The effect of metallothionein expression on the metal resistance and removal by recombinant Saccharomyces cerevisiae containing the plasmid pJW9 was investigated. The recombinant strain S. cerevisiae BZ-pJ was constructed by transforming the host strain S. cerevisiae BZ3l-1-7Ba with the gene coding for a metal-binding protein, metallothionein. Introduction of the MT gene yielded an increase in the minimum inhibitory concentration (MIC) of copper more than three times compared with the host strain. The minimum inhibitory concentrations of $Cr^{2+}, Znr^{2+} and Pb^{2+}, $ were not different for the two strains. The recombinant yeast grown in a medium containing 8mM CuSO4 was able to remove copper with a capacity of 18.9mg $Cu^{2+}$/g dry cell. In a mixture of copper and zinc, the presence of copper relieved the toxic effects caused by zinc, resulting in an enhancement of the final cell density and the specific growth rate of the recombinant yeast. The capability to remove copper by the recombinant yeast was linearly proportional to the copper concentrations in the medium. The efficiency of copper removal was rather constant regardless of the initial copper concentrations. The specific removal of zinc was dependent on the zinc concentrations in media, though, and such dependence was not so pronounced as the concentration of copper.
Using superoxide dismutase (SOD)-deficient mutants of Saccharomyces cerevisiae, the oxygen toxicity induced by paraquat was studied. In aerobic culture condition, yeasts lacking MnSOD (milochondrial SOD) showed more significant growth retardation than CuZnSOD (cytoplasmic SOD)-deficient yeasts. However, not so big differences in growth pattern of those mutants compared with wild type were observed under anaerobic condition. When exposed to paraquat, the growth of yeasts lacking CuZnSOD was severely affected by higher than 0.01mM of paraquat in culture medium. By the analysis of several cellular components ivolved in free radical generating and scavenging system, it was found that, under aerobic condition, the content of lipid peroxides in cell membrane as well as cellular activity of glutathion peroxidase of CuZnSOD-deficient mutants was increased in the presence of paraquat, although significant decrease of catalase activity was observed in those stratns. In MnSOD-deficient yeast, however, increment in cellular activity of glutathion peroxldase and catalase by paraquat was observed without any deterioration of membrane lipid. It implies that the lack of mitochondrial SOD could be compensated by both of glutathion peroxldase and catalase, but that only glutathion peroxidase might act for CuZnSOD in cytoplasm. In contrast, all of SOD-deficient mutants showed a significant decrease in catalase activity, but slight increase in the activities of glutathion peroxidase, when cultivated anaerobically in the medium containing paraquat. Nevertheless, any significant changes of lipid peroxides in cell membranes were not observed during anaerobic cultivation of SOD-deficient mutants. It suggests that a little amount of free radicals generated by paraquat under anaerobic condition could be sufficiently overcome by glutathion peroxidase but not by catalase.
Park, Seon-Jeong;Jang, Ji-Eun;Lee, Hyang-Burm;Lee, Jong-Soo
The Korean Journal of Mycology
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v.49
no.1
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pp.67-79
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2021
This study aimed to isolate wild yeasts from waters and soils on the riversides of Geumgang upstream in Geumsan, seashores of Cheongpodae in Taean and Suncheonman in Suncheon, Korea, and to investigate their unrecorded microbiological characteristics. Forty-nine species of wild yeasts, including Aureobasidium pullans YH 4-3, were isolated from 40 samples of Cheonnaegang in Geumgang upstream. Fifty-six species and 36 species of wild yeasts were also isolated from 80 samples of Cheongpodae Beach and Suncheonman Mashland, respectively. Species from Candida genus were isolated from all three locations. Among them, Candida michaelii NNIBRFG28278, Sporobolomyces japonicus NNIBRFG28271, Dioszegia buhagiarii NNIBRFG28279, Ustilago spermophora NNIBRFG28273, Nakazawaea pomicola NNIBRFG31590, Candida natalensis NNIBRFG31591, Candida pseudorhagii NNIBRFG31592, Candida santamariae NNIBRFG31593, Cutaneotrichosporon terricola NNIBRFG31594, and Meira nashicola NNIBRFG31595 represent newly recorded yeast strains in Korea. Almost all of these unrecorded yeasts were oval shaped, and Sporobolomyces japonicus NNIBRFG28271 and Candida natalensis NNIBRFG31591 have ascospores. All the strains grew well in yeast extract-peptone-dextrose (YPD) and yeast extract-malt extract (YM) media, and Ustilago spermophora NNIBRFG28273 grew well in vitamin-free medium. Sporobolomyces japonicus NNIBRFG28271 grew well in 15% NaCl-containing YPD medium, and Ustilago spermophora NNIBRFG28273 and Dioszegia buhagiarii NNIBRFG28279 assimilated starch, and Ustilago spermophora NNIBRFG28273 produced ethanol.
An experiment was conducted to study the effects of the dietary Cu sources on the performance of the weanling pigs. Forty-eight, 24 in each sex, 4 weeks old pigs were assigned to four treatments; control, methionine-Cu chelate, chitosan-Cu chelate or yeast-Cu chelate. Control diet contained 136ppm Cu to which additional 100ppm Cu in different chelated form was added to the respective treatment. Individual pig weight and feed intake of each pen were recorded weekly for 5 weeks. Average daily feed intakes(ADFI), average daily gains(ADG) and ADFI/ADG were not significantly different among treatments. Nutrient availability was not also significantly affected by treatments. Serum triglyceride concentration of chitosan-Cu treatment was significantly lower than those of methionine-Cu and yeast-Cu treatments but was not significantly different from that of the control. Serum cholesterol concentration of yeast-Cu was significantly lower than those of the control and methionine-Cu but was not significantly different from that of chitosan-Cu treatment. Serum HDL-cholesterol concentration was not significantly affected by treatments. Serum IgG concentrations of all copper treatments were significantly lower than that of the control. It was concluded that Cu-chelates supplemented to the basal diet (136ppm Cu) by the level of 100ppm Cu did not significantly affect growth performance of weaning pigs. However, serum parameters of cholesterol, cholesterol and IgG were significantly affected by the treatments.
Lee, Jae-Seung;Kim, Min-Young;Kim, Jae-Heun;Nam, Jong-Hyun;Lee, Hyeon-Young;Hwang, Baik
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.16
no.4
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pp.268-272
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2008
The effect of elicitor and precursor on salidroside production from Rhodiola sachalinensis A.Bor callus cultures was investigated. Callus cultures were treated with yeast extract, soft-ferrite ceramics powder, methyl jasmonate, ascorbic acid, jasmonic acid and $CuCl_2$/$CdCl_2$ as an elicitor. When callus cultures were treated with $0.2g/\ell$ of yeast extract, salidroside production from callus treated with yeast extract is 3.45 times higher than that of the controlled group. Among of them, callus cultures treated with yeast extract produced the highest salidroside. Callus cultures were treated with L-phenylalanine and L-tyrosine as a precursor for 4 days. The result of salidroside content analysis showed that all feeding of precursors not affected salidroside production from callus cultures. In case of L-tyrosine fed into callus cultures, both callus growth and salidroside production decreased at all concentrations.
This study aimed to isolate wild yeasts from water and soil sample of the Nonsan stream and Sapgyoho (lake) in Chungcheonnam-do, Korea, and to further characterize previously unrecorded wild yeast strains. In total, 102 strains, representing 55 different species of wild yeast were isolated from 95 samples collected from the Jangseoncheon and Ipchoncheon of Nonsan stream in Jellabuk-do and Chungcheonnam-do. Among these, 33 strains were isolated from alkalophilic yeast extract-peptone-dextrose (YPD) medium (pH 9.0), and 9 strains were isolated concurrently on general YPD medium (pH 6.5) and alkalophilic medium. Seventeen strains of Cryptococcus laurentii were predominantly isolated. Additionally, 65 strains, representing 27 different species of wild yeast were isolated from 58 samples obtained from Sapgyoho (lake). Among the 82 isolated wild yeast strains, 8 strains, including Candida fructus JSC 72-1(JSL-GGU 015), had not previously been recorded. All 8 previously unrecorded yeasts were oval in shape except C. fructus JSC72-1(JSL-GGU-015), and only the Filobasidium chernovii JSC39-1(JSL-GGU-013) strain formed spores. All strains except Pseudosydowia eucalypti JSC23-6(JSL-GGU-012) grew well in yeast extract-peptone-dextrose (YPD) and yeast extract-malt extract media and grew in vitamin-free medium. Four strains, including P.eucalypti JSC23-6(JSL-GGU-012) grew well in 15% NaCl-containing YPD medium. F.chernovii JSC39-1(JSL-GGU-013) and Sirobasidium intermedium JSC7-3(JSL-GGU-014) assimilated lactose, and five strains, including F. chernovii JSC39-1(JSL-GGU-013) also assimilated starch. All strains were resistant to 800 ppm of Ca, Cu, Li, and Mg ions.
When Saccharomyces cerevisiae MTY62, a high-RNA content yeast, was cultivated by fed-batch mode feeding molasses and com steep liquor, the cell density less than 45g-DCW/L and the RNA content less than 140mg/g-cell were obtained, indicating that unknown compounds inhibiting the cell growth and RNA accumulation are contained in the molasses. Therefore, in order to obtain higher levels of cell density and RNA content, $Ca^{++}$, $Cu^{++}$and $K^{+}$ ions in molasses were removed by pretreatments of molasses with various agents such as IonClear BigBead, $Na_2$$HPO_4$, $H_2$$SO_4$, citric acid, $K_2$$HPO_4$, and EDT A. Among them, IonClear BigBead, $Na_2$$HPO_4$, and EDTA gave the highest $Ca^{++}$ removal efficiency of about 60-90%. In the batch culture with pretreated molasses, the cell concentration of 18.6g-DCW/I and RNA concentration of 3127 mg/I, maximum specific growth rate of 0.459$h^{-1}$ , and specific consumption rate of reducing sugar of 1.28g-sugar/g-cell-h were obtained, which are about 10%, 17%,47%, and 36% higher levels, respectively, over the batch culture with untreated molasses.
The present study aimed to screen unrecorded wild yeasts from Jeju lsland and Jangsado on the southern coast of Korea, and to investigate their microbiological characteristics. To date, Coniozyma leucospermi JJD37-2, Hanseniaspora thailandica JJD44-1, Kluyveromyces nonfermentans JJD15-1, Kockovaella fuzhouensis JJD47-3, Vishniacozyma heimaeyensis JJD8-4, Candida carpophila JSDH24-1, Wickerhamomyces strasburgensis JSDH34-2, Candida savonica HJD6-4, and Candida karawaiewii YP23-3 have not been previously recorded in Korea. In the present study, we investigated the microbiological characteristics of these previously unrecorded yeasts. Except for W. strasburgensis JSDH34-2 strain, none of the strains formed spores, and only the C. leucospermi JJD37-2 strain formed pseudomycelia. Almost all strains grew well in yeast extract-peptone-dextrose (YPD) medium, potato dextrose (PD) medium and yeast extract-malt extract (YM) media. C. carpophila JSDH24-1 and W. strasburgensis JSDH34-2 also grew well in YPD medium containing 10% NaCl. H. thailandica JJD44-1 is fermented to produce glucose, fructose and mannose.
S. diastaticus hydrolysised $\alpha$-1.4 linkage of the starch and was known fermenting yeast strain, but poorly hydrolized $\alpha$-1.6 linkage of the starch. To improve the starch fermentation ability of yeast, we tried that protoplast fusion between S. diastaticus and C. tropicalis and finally two starins of fusant (FPDC42, FPDC43) were obtained. C. tropicalis well hydrolysis both $\alpha$-1.4 and $\alpha$-1.6 linkanges in the starch. The protoplast of parental auxotrophic cells were fused in the presence of 10mM CaCl$_2$ and 35% of polyethylene glycol (M. W. 4,000). The fusion frequency was 10$^{-5}$ to 10$^{-6}$. Properties of the fusants(genetic stability, assimilation of carbon sources, random spore formation, copper resistance, NaCl tolerance, DNA content, cell size and growth rate) were investigated.
In this study, the cellulase of Monochamus saltuarius (MsGHF45) gene was introduced in Kluyveromyces lactis, successfully. The molecular weight of recombinant enzyme was determined by SDS-PAGE and western blotting. The enzymatic activity was confirmed by native-PAGE containing carboxymethyl cellulose as a substrate. The optimul pH and temperature of recombinant MsGHF45 was pH5 and $40^{\circ}C$. The barium ($Ba^{2+}$) and ferrous ($Fe^{2+}$) enhanced enzyme activity, and the mercuty ($Hg^{2+}$) inhibited its activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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