암세포는 종양의 성장을 지지하는 다양한 성분으로 구성되어 있는 환경에서 자란다. 암미세환경에 존재하는 주요 세포등은 섬유아세포, 내피세포, 면역세포들이며 이들세포들은 암세포들과 서로 소통을 하고 있다 종양조직에 유입된 면역세포중에서 대식세포가 종양미세환경의 주요성분으로서 다양한 면역현상들을 조절한다. 면역세포유입에 의한 암촉진과 항암효과 간의 복잡한 균형은 종양의 성장과 진행에 필요한 만성염증 환경을 생성시킬 수 있다. 대식세포는 M1과 M2 극성화로 규정된 미세환경 신호에 반응하여 기능적으로 다른 프로그램을 작동시킬 수 있다. 종양관련대식세포는 다양한 사이토카인, 케모카인, 단백질분해효소들을 분비함으로써 암 신생혈관형성, 증식, 전이 및 면역억제를 촉진시킨다. 최근에, 종양관련대식세포는 암줄기세포와 상호작용하여 종양의 진행, 전이 및 항암제 내성을 유도하는 것으로 알려져 있다. 종양관련대식세포는 암미세환경을 유지하기위해 면역억제 기능을 획득하며, 종양의 이질성과 가소성의 특성을 갖고 있어 암관련인자 및 감염등의 노출에 의해 서로 다른 극성형질로 리프로그래밍된다. 종양관련대식세포는 기질인자의 자극에 의해 암특이적인 케모카인들을 생성하기 때문에 케모카인은 질병의 활성을 반영하는 바이오마커로 작용할 수 있다. 종양조직에 종양관련대식세포가 많이 유입될수록 환자의 예후가 좋지 않으며 항암치료에 대한 저항성이 생긴다. 따라서 종양에서 대식세포를 표적화하는 항암치료는 유망한 치료전략이 될 수 있다.
쉬땅나무족 15분류군의 화판의 미세형태학적 형질을 주사 전자현미경으로 관찰하여 화판 향축면, 배축면의 세포 외형, 배열, 수층벽, 큐티클의 미세형태를 자세히 기재하였으며, 분류학적, 계통학적 유용성을 검토하였다. 쉬땅나무족의 화판은 유두상 또는 원추형 유두상(PCS), 직사각형의 주름판상(TRS)로 확인되었으며, 향축면, 배축면의 화판 구조에 따라 크게 세 유형으로 구분하였다. Type I. PCS-TRS, Type II. PCS-PCS, Type III. TRS-TRS (향축면-배축면). 구분된 이들 유형과 수층벽, 큐티클 표면의 형태는 족 내 속간/종간 진단 형질로 유용하였을 뿐 아니라, 계통학적으로도 그 유용성이 확인되었다. 또한, 화판 표면의 세포의 미세형태와 수분매개자(곤충을 통한 충매)와의 연관성을 나타내는 추가적인 사례로 제시하였다.
혈관여포양 임 파선증식 증 (angiofollicular lymph node hyperplasia)은 원인 미상의 드문 양성 질환으로서 대부분 흉곽내에 발생한다. 진단은 임상증상, 이학적 경사 그리고 X-선 촬영을 비롯한 각종 영상술에 의하며 여러 다른 질환과 감별진단이 어렵다. 대개 수술적 적출에 의한 조직학적 검색으로 확진이 된다. 조직학적으로는 두 가지로 분류되며 하나는 초자양혈관형으로서 여포내에 혈관이 증식되고 초자양화(hyalinization)가 일어나는 것이 특징이다. $90\%$가 이에 속하고 다른 하나는 형질세포형으로서 $10\%$를 차지한다. 후자는 여포간 조직내에 형질세포가 미만성으로 증식되고 신증후군, 발열, 빈혈, 적혈구침강속도 증가, 고감마글로블린혈증, 저알부민혈증 등의 변화가 있는 점이 전자와 다른 점이다. 치료는 주로 수술적 제거술에 의하며 수술로서 절제되지 못하는 것은 방사선 치료에 의하게 된다. 저자들은 경도의 흉부불쾌감과 경부 임파절 종대를 보인 61세 남자에서 전상종격동 종괴를 수술적 부분제거 후 외부 방사선 치료를 실시하여 완치된 1예를 경험하였기에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 hGM-CSF 유전자가 도입된 형질전환 담배세포에서 sucrose의 농도가 배양 배지내 분비된 hGM-CSF, 총분비 단백질, 그리고 단백질 분해효소에 미치는 효과를 보았다. 10, 30, 60, 90, 120, 150 g/L의 sucrose 농도로 배양한 결과 sucrose농도가 30g/L일 때 건조중량은 11.22g/L, 분비된 hGM-CSF의 양은 181.53 $\mu\textrm{g}$/L, 그리고 총단백질은 66.8 mg/L.로 시료채취 5일 때 가장 높은 값을 나타내었고, 단백질 분해효소는 sucrose농도가 120 g/L일때 2660 U/L.의 값을 나타내었다. 그러나 배양 10일째 sucrose농도 60 g/L에서 건조중량이 28.36g/L로 가장 높은 값을 나타낸 반면 분비된 hGM-CSF의 최대 값은 95 $\mu\textrm{g}$/L.로 sucrose농도가 150 g/L일 때 가장 높은 값을 나타내었다.
Cymbidium속 난의 형질전환계를 확립하기 위해서, microprojectile bombardment 방법을 이용하여 춘란(Cymbidium virescence)의 rhizome 조직세포에 외래 유전자를 도입하는 조건을 검토하였다. 각 parameter별 적정조건으로서 텅스텐 입자의 크기는 $1.11\;{\mu}m$, He 가스 압력은 $77.33kg/cm^2$, gap distance는 6.35mm, target distance는 7.0cm 이었다. DNA피복입자를 투사한 $400{\mu}m$ 두께의 rhizome 절편을 2개월간 배양한 뒤 GUS 활성을 조사한 결과 이 유전자가 발현되는 세포들이 관찰되었다. Kanamycin (100 mg/L)을 첨가한 배지에서 6개월 동안 선택배양을 통해 얻은 rhizome의 DNA를 PCR로 분석한 결과 nptII 유전자의 삽입을 확인할 수 있었다.
한국산 체꽃속(Scabiosa L.)의 외부형태형질을 바탕으로 구분한 5가지 변이 유형[솔체꽃(S. comosa) Type 1-2, 체꽃(S. tschiliensis f. pinnata) Type 3-4, 구름체꽃(S. tschiliensis f. alpina) Type 5]에 대해 잎 표피와 화분의 미세구조를 관찰하였다. 잎 표피세포의 크기는 향축면은 평균 12.4 × 6.7 ㎛로, Type 1이 가장 작고 Type 3가 가장 컸으며, 배축면은 평균 9.4 × 4.6 ㎛로 모든 유형이 비슷하게 나타났다. 모용은 단세포성 선상 모용이 일부 유형에서, 다세포성 비선상 모용이 모든 유형에서 관찰되었다. 선상 모용은 향축면에서 Type 1과 5에만 있었으며, 두 유형 중 Type 5의 모용이 길이 72.2 ㎛로 더 길고, 단위면적 (0.01 mm2) 당 개수도 5개로 더 많았다. 배축면에서는 Type 1, 3 및 5에 있고, 단위면적 당 개수가 Type 1과 5는 3~6개로 비슷하였으나, Type 3은 1개 이하로 매우 드물게 나타났다. 기공복합체는 부등형으로 양면에 분포하며, 향축면의 공변세포 크기는 평균 4.4 × 2.7 ㎛로 너비는 유사하나 길이는 Type 1과 5가 3.1 ㎛, 3.9 ㎛로 나머지에 비해 작았다. 단위면적 당 기공의 수는 향축면과 배축면이 평균 40.2개, 149.2개이고, 양면 모두 Type 1이 66.3개와 177.2개로 가장 많았다. 화분은 모두 단립으로 삼구형이고, 극축 길이(P)와 적도면 지름(E)의 비율은 0.83~1.12로 모양은 아단구형~약장구형이다. 표면무늬는 과립상 표면에 자상 돌기가 있고, Type 3과 4에서만 유공상이 확인되었다. 이상의 결과에서, 솔체꽃 유형인 Type 1과 2가 잎 표면의 선상 모용 유무 및 기공의 수에 뚜렷한 차이를 보여 Type 1은 솔체꽃과는 다른 새로운 변종 또는 품종일 가능성이 있다고 생각된다. 또한 체꽃 유형인 Type 3과 4의 경우, Type 3의 잎 배축면에 털이 드물게 있으나, 두 유형의 화분 표면무늬가 동일하고, 다른 형질들도 모두 중복되어 연속적인 변이로 보이며, 구름체꽃 유형인 Type 5는 나머지 유형과 뚜렷이 구분되었다.
Retrovirus vector를 이용한 형질전환 동물의 생산에 있어서 시급히 선행되어야 할 가장 중요한 요소는 표적세포에 대해 높은 감염도를 가진 virus를 생산하는 system의 개발이다. 이러한 문제를 해결하기 위한 일환으로 본 연구에서는 세 가지 방법을 사용하여 세포 배양액 속의 virus의 농도를 높여줌으로써 retrovirus vector system에서 생산되는 virus의 낮은 감염도를 극복하고자 하였다. 이 실험에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 1) Virus를 생산하는 세포(pG13-LN$\beta$Z retrovirus producing cell)를 5mM의 Na-butyrate로 처리했을 때 virus titer는 소의 embryonic trachea 표적세포에서 약 3배의 증가를 나타냈다. 2) Virus가 들어있는 세포 배양액을 ultrafiltration을 통해 농축한 결과, 농축액 속의 virus titer는 대조구에 비해 약 3.6배 증가하였다. 3) 초원심분리를 통해 농축된 virus stock의 titer는 소의 embryonic trachea 표적세포에서 약 1.0$\times$105LacZ+TU/ml였는데 이 방법은 대조구에 비해 약 12.5배 만큼의 titer의 향상을 가져왔다. 따라서, 이와같이 농축된 virus stock을 이용할 경우 retrovirus vector system을 이용한 소의 수정란에의 유전자 전이율을 현저히 향상시킬 수 있으리라 사료된다.
본 실험에서는 외래 유전자의 효율적인 발현을 위하여 GFP 표지유전자를 이용하여 여러 종류의 promoter를 검정하였다. 또한, retrovirus vector에 WPRE 서열을 도입함으로써 GFP 유전자의 발현 증가 여부를 확인하였다. 모든 표적 세포에 있어서 UbC와 β-actin promoter에 비해 RSV와 CMV promoter 통제하의 GFP의 발현이 더 강하게 나타났으며, 특히 CEF 세포에서는 RSV promoter가 가장 우수한 것으로 확인되었다. WPRE의 도입으로 인한 발현율의 증가는 CEF를 제외한 세포주에서 promoter의 종류에 관계없이 확인되었다. 이상의 결과로 각 세포주는 promoter에 따라 발현 양상이 약간의 차이를 보이고 있으나 RSV와 CMV promoter에서 유전자의 발현이 보다 효율적이며, WPRE 서열이 도입된 경우에 HeLa와 PFF 세포에서 발현이 현저히 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과는 효율적인 유전자의 발현 체계를 확립하는데 기여함으로써 더 나아가 유전자 치료나 형질전환 동물생산에 적극적으로 활용되어질 수 있을 것이다.
형질전환된 담배세포 배양을 이용한 hGM-CSF 생산에 있어 polyurethane foam 내 고정화법을 이용하여 연속배양의 가능성을 확인하였고 spinner flask에서의 배양에 따른 영향을 알아보았다. 16일 동안 3번의 배지교환에도 세포의 활성이 유지되어 hGM-CSF 생산량은 계속적으로 증가하였다. 온도와 교반속도를 동일하게 하였을 때 spinner flask에서의 hGM-CSF 생산량은 17.3 ${\mu}g/L$으로 100-mL flask의 9.8 ${\mu}g/L$보다 증가하였다. 따라서 최적의 배지교환 속도와 양을 결정하여 spinner flask에서 연속배양을 실시할 경우 세포 재사용이라는 경쟁력과 함께 높은 hGM-CSF 생산량이 얻어질 것으로 예상된다.
잠두위조바이러스(broad bean wilt virus) 5종의 분리주에 대하여 명아주 등 29종의 지표식물반응에 의한 병원성을 분류하였다. 이들 분리주에 감염된 세포에서 3종류의 서로 다른 특이한 미세구조가 관찰되었다. 첫번째 구조는 바이러스입자로 된 $1\sim2$층의 원형관(tube)이고, 둘째는 6각형의 벌집구조(comb)로서 이것은 외부모양이 원형 또는 각으로 된 구조로 구분되었으며, 셋째는 세포원형질 내에 존재하는 다량의 막구조(membrane proliferation)이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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