• 제목/요약/키워드: 현미경관찰법

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마이크로파에 의한 생체물질 고정효과

  • 손태호
    • 한국전자파학회지:전자파기술
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    • 제5권3호
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    • pp.78-87
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    • 1994
  • 생물학 및 의학등의 생명과학에서는 현미경을 이용하여 생체물질 즉, 생체조직을 관찰하고 이에 대한 조직의 검사 결과를 판정하고 발표한다. 이때 필히 고정과정(fixation process)을 거쳐야 한 다. 즉, 생체조직중 조직의 구조, 특정 세포나 바이러스 및 효소등을 관찰할 때 고정과정을 거쳐 조직을 절편하고 이를 염색하여 현미경으로 검사하게 된다. 고정과정이란 생체물질을 안정화시키고 자기분해 혹은 부패를 방지하여 보존이 가능하도록 변화시키 는 과정으로, 조직내의 용해성 물질을 불용성 물질로 변형시키는 과정이다. 고정과정을 거친 생체조직 은 구조를 보존하고 있기 때문에 조직의 훼손이 없는 상태에서 절편이 가능하고 또한 염색상태를 좋게 하며 관찰시 contrast를 증진시킨다. 만약 고정과정을 거치지 않으면 물질의 세포막이 파괴되고 단백질 등의 물질이 용해되어 조직의 변형을 일으켜 제대로 조직을 관찰할 수 없게 된다. 고정과정에는 크게 화학적 고정법과 물리적 고정법이 있다. 화학적 고정법은 생체조직을 화학용액에 처리하는 방법이며, 물리적 고정법은 직접적인 열 혹은 초음파등으로 물질을 고정시키는 방법이다. 표 면과 내부의 열전도가 달라져 고정이 균일하게 되지 않는 단점을 가지고 있기 때문에 보통 2~6일의 고 정시간을 요하는 화학적 고정법을 사용하고 있다. 따라서 조직에 대한 총 검사시간이 최소 6일에서 최 대 12일이 요구된다. 병원등에서 조직검사의 결과가 늦게 발표되는 사유는 바로 화학적 고정법을 사용 하여 생체조직을 관찰하고 그 결과를 판정하기 때문이다. 본 고에서는 마이크로파를 이용하여 약 3시간만에 조직의 상태를 관찰할 수 있는 고정법을 소개한다. 마이크로파를 이용하여 조직을 고정하는 고정방법을 기존의 고정법과 비교하여 이들의 장단점을 나타 낸다. 본 연구자에 의해 개발된 마이크로파 고정기를 소개하고, 이를 이용하여 생체물질을 고정한뒤 절 편, 염색하여 현미경 관찰결과를 발표하여 본 연구의 방법이 기존 방법보다 우수함을 나타낸다.

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Hydrofluoric acid 용액을 이용한 유리 커버글라스에 배양된 신경세포의 전자현미경 시료제작법 (TEM Sample Preparation for Cultured Neurons on a Glass Coverslip)

  • 오현우;박호용
    • Applied Microscopy
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    • 제35권4호
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    • pp.10-15
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    • 2005
  • 신경연접 구조 관찰을 위한 방법으로 hydrofluoric acid 용액을 이용하여 유리 커버글라스 위에 배양된 신경세포의 전자현미경 관찰을 위한 편리한 시료제작법을 제시하였다. 배양된 신경세포의 TEM관찰을 위한 전체적인 시편제작 방법은 일반적인 전자현미경 시편 준비법과 큰 차이가 없으나 시료 블록을 제작한 후 유리 커버글라스를 효과적으로 제거하는 것이 가장 큰 차이점이다. 유리 커버글라스의 제거를 위해 열중합 반응이 끝난 시료 블록은 유리 커버글라스를 완전히 노출시켜 48% hydrofluoric acid 용액이 들어있는 플라스틱 비이커에 넣어 $5{\sim}10$분간 처리하여 유리 커버글라스를 완전히 제거한 후, 흐르는 물로 충분히 세척하고 상온에서 건조하여 사용하였다. 유리 커버글라스가 제거된 시료 블록은 실체 현미경을 이용하여 관찰하고자 하는 부위를 선정한 후 절삭하여 절편을 제작하였다.

고압전자현미경을 이용한 소뇌 조롱박세포 가지돌기가시 관찰 (Observation of Dendritic Spines of Purkinje Cell Using High-Voltage Electron Microscopy)

  • 유임주;이계주;서영석
    • Applied Microscopy
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    • 제31권1호
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    • pp.1-8
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    • 2001
  • 신경세포 가지돌기가시의 형태를 분석하는 것은 신경세포의 기능을 이해하는데 중요하다. 가지돌기가시는 광학현미경 해상도의 한계근처에 있는 구조물로 투과전자현미경 및 공초점헌미경 등을 이용한 연구들이 보고 되고 있다. 고압전자현미경은 높은 해상도와 투과능력 덕분에 두꺼운 절편의 관찰이 용이하여 신경세포의 가지돌기가시 등을 관찰하는데 유용한 것으로 알려져 있다. 고압전자현미경을 이용하여 신경세포의 가지돌기가시를 효과적으로 관찰하는방법을 확인하고 기본적인 형태학적 자료를 축적하고자 하였다. 생쥐 소뇌에 위치하는 조롱박세포의 가지돌기가시를 anti-calbindin 28kD항체 및 Golfi 염색으로 표지한 후 $4{\mu}m$두께의 절편을 제작하여 impregnation방법으로 각각 처리하여 표본을 제작한 후, 초고압전자현미경으로 관찰하여 효과적인 관찰방법을 찾고, 영상분석 기법을 이용하여 가지돌기가시의 밀도와 가시의 길이를 측정하였다. 초고압전자현미경 관찰 결과, 면역조직화학법과 Golgi법 모두 조롱박세포의 가지돌기가시를 관찰할 수 있었으나 Golgi법으로 준비된 표본이 가시를 정량적으로 분석하기에 더욱 적합하였다. 명상분석 결과로는 가지돌기 가시의 평균밀도가 $24.5{\pm}3.6$개/$10{\mu}m$였고, 가시의 평균길이는 $1.12{\pm}0.22{\mu}m$였다. 본 연구를 통해서 Gogli 법으로 염색된 조롱박세포를 고압전자현미경으로 관찰할 경우, 가지돌기가시를 정량적으로 관찰할만한 만족스러운 영상을 얻을 수 있었고, 추후 경사를 주어 촬영한 두 장의 사진을 이용하여 3차원적으로 분석하면 좀 더 정확한 결과를 얻을 수 있을 것으로 판단되며, 이는 소뇌의 신경가소성을 이해하는데 중요한 자료가 될 것이다.

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플라즈마 분자선 에피탁시 법으로 성장된 비극성 ZnO 박막의 표면 형상 분석 (Surface Morphology Characterization of Nonpolar ZnO Thin Films Grown by Plasma-Assisted Molecular Beam Epitaxy)

  • 이재욱;이정용;한석규;홍순구
    • 한국표면공학회:학술대회논문집
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    • 한국표면공학회 2007년도 춘계학술발표회 초록집
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    • pp.161-162
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    • 2007
  • (1-102) R-면 사파이어 기판 위에 플라즈마 분자선 에피탁시 법으로 성장시킨 비극성 ZnO 박막의 표면 형상을 원자력간현미경(AFM) 및 투과전자현미경으로 분석하였다. AFM 관찰 결과 ZnO<0001> 방향으로 길쭉한 제방 모양의 표면 형상이 나타남을 알 수 있었고, 고분해능 투과전자현미경 관찰을 통해 박막 성장 중에 관찰되는 V(chevron 모양) 형상의 in-situ RHEED 패턴을 야기시키는 박막 표면의 facet 면을 원자 level에서 확인하였다.

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착체중합법으로 합성한 srAl2O4의 핵생성 관찰 (Crystallization of srAl2O4 Synthesized by the Polymerized Complex Method)

  • 김형준;박정현
    • 한국세라믹학회지
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    • 제41권6호
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    • pp.439-443
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    • 2004
  • 착제중합법을 이용하여 SrAl$_2$O$_4$를 합성 시 핵생성 초기단계를 관찰하였다. 고상반응법을 이용했을 때의 문제점인 불균일성과 높은 합성온도를 유지전구체를 이용한 착체중합법으로 해결하였다. 전구체 분해과정은 40$0^{\circ}C$부터 관찰되었으며, 원소분석기와 주사전자현미경으로 관찰하였다. 핵생성 단계를 투과전자현미경으로 관찰하여 30∼50 nm의 결정이 생성되고 있음을 알 수 있었고, XRD 패턴들을 분석하여 그 관찰 결과와 일치함을 확인하였다.