Antagonistic Promicromonospora sp. KH-28 isolated from a suppressive soil could produced a chitinase and a antifungal antibiotic for the biocontrol ability. The chitinase and the antibiotic appeared to inhibit plant pathogens of Fusarium oxysporum. Phytophthora capsici, Alternaria kiki, fusarium solani, Stemphylium sp., and Psudomonas fluorescens. the antibiotic produced from the strain was identified as a antifungal substance of 503 dalton having a pyrimidine skeleton with an aliphatic side chain. The Promicromonospora sp. KH-28 was able to suppress effectively F. oxysporum derived-fusarium wilt of red-pepper plant in the pot in vivo test.
Monilinia fructicola에 의해 감염되어 미이라화된 복숭아 열매로부터 Monilinia fructicola에 강한 항진균성 물질 chitinase 및 urease을 분비하는 방선균을 분리하였다 선발된 TH-04 균주는 배양적 .형태적 특성 세포벽 성분 및 세포내 당 성분을 분석한 결과 전형적인 Streptomyces속에 속하는 방선균으로 동정되었다. TH-04 균주는 Monilinia fructicola Colletotrichum gloeosporioides Magnaporthe grisea Rhizoctonia solani, Phytophthora capsici, Alternaria kikuchi-ana, Fusarium solani 및 Fusarium oxysporum 등 8종의 식물병원균에 대하여 항진균 활성을 나타냈다. 항생물질 생산을 위한 배양조건은 온도 $20^{\circ}C$, pH 7 및 배양기간 7일로 확인되었다.
새로운 천연물 농약 또는 생산군주를 개발하기 위하여 Streptomyces 속의 여러 균주를 대상으로 항진균 물질을 탐색하여 항진균 물질 생산 균주 Streptomyces hygroscopicus MJM1004를 선발하였다. 항진균 물질의 생산을 위한 발효 배지를 선정하기 위하여 여러 탄소원, 질소원과 무기원을 대상으로 균체 생장 정도와 항진균 물질의 생산성을 조사하였으며, 생산 배지는 2% soybean meal, 1% glucose, 2% starch, 0.3% $CaCO_3$, 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.05% $K_2HPO_4$를 조성으로 하였다. S. hygroscopicus MJM1004 균주의 균체에서 추출된 항진균 물질은 Candida albicans와 여러 식물 병원성 곰팡이들에 대하여 광범위한 저해 효과를 나타내었다. S. hygroscopicus MJM1004 균체로부터 분리된 항진균 물질, SH-1004를 핵자기공명법($^1H,\;^{13}C$, DQF COSY, HMQC 및 HMBC)을 통하여 분석한 결과 azalomycin F complex 임을 확인할 수 있었다. Positive FAB mass spectrum을 통하여 SH-1004는 azalomycin F4a와 F5a가 1.8 : 1의 비율로 혼합된 물질임을 확인하였다.
토양 우점능이 강한 생물학적 방제제 제조를 위해 경북지역 토양에서 길항균주를 분리하고 이들 중 Fusarium oxysporum, Phytophthora capsici 에 강력한 길항능을 보이는 Pseudomonas sp. 4059 를 선발, 동정하였다. Pseudomonas sp. 4059 의 시들음 병균 Fusarium oxysporum, 고추 역병균 Phytophthora capsici 에 대한 길항기작은 내열성 저분자의 항생물질과 철이온을 특이적으로 흡착하는 siderophore의 생산에 의한 것이다. Pseudomonas sp. 4059 는 항진균성 항생물질 Phenazine 생산 유전자를 소유하며 Salkowski test에 양성인 옥신류 생산도 한다는 것을 확인하였다. Pseudomonas sp. 4059 는 bioochemical tests, API test, MicroLogTM system을 통해 Pseudomonas fluorescens (biotype A)으로 98% 상동성을 보였으므로 이를 Pseudomonas fluorescens (biotype A) 4059 로 명명하였다. 선발된 길항균 Pseudomonas fluorescens (biotype A) 4059는 고추를 기주식물로 하였을 때 고추역병균인 Phytophthora capsici가 원인이 되는 고추역병을 in vivo 상에서도 충분히 억제할 수 있는 생물방제능을 나타내었다.
A potential biocontrol bacterium, YB-70 was isolated from a rhizosphere in suppressive soil and identified as a strain of Bacillus subtilis. In several biochemical and in vitro antibiosis tests on Fusarium solani with the culture filterates from B. subtilis YB-70, we found that antifungal mechanism of B. subtilis YB-70 was mediated by antibiotic substances produced from the bacterium. These antifungal substances were appeared to be hear-resistant, micromolecular, and ethy alcohol soluble. Antifungal agents produced by B. subtilis YB-70 showed strong inhibified against root-rotting fungi F. solani in in vivo pot test. An antifungal substance. YBS-1s, was purified from the culture broth of B. subtilis YB-70 by isoelectronic precipitation, silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography analysis by Fab-MASS, $^{1}$H-NMR, $^{13}$C-NMR, DEPT, and amino acid analyzer revealed that the YBS-1A was a peptide antibiotics of iturin class containing seven amino acids from five different groups, and the other(YBS-1B) was an analogue of iturin group composed of 11 amino acids with larher molecular weight of about 1, 500 dalton, which was lager than that of iturin A.
토마토시들음병의 원인균인 Fusarium oxysporum의 생물학적 방제를 위해 경북지역의 저병해경작지로부터 항진균성 항생물질 생산성 길항미생물인 BK4 균주를 선발하였으며, 길항균주 BK4의 16S rDNA 분석 및 생화학적 특성 조사 후 최종적으로 Biolog사 동정시스템인 $MicroLog^{TM}$ 3.0을 이용하여 선발 길항균주 BK4를 Bacillus thuringiensis BK4로 동정하였다. B. thuringiensis BK4는 pH 9.0로 적정한 Nutrient broth를 이용하여 $30^{\circ}C$에서 배양할 경우 항생물질의 생산은 최대였다. B. thuringiensis BK4가 생산하는 항생물질은 $121^{\circ}C$에서 열처리시에도 $80{\%}$ 잔존활성을 유지한 내열성 항생물질이었으며, pH $3.0{\~}12.0$의 범위에서 활성의 변화를 조사한 결과 산성보다는 알칼리성에서 다소 안정적이였으나 pH 3.0에서도 $50{\%}$ 이상의 잔존 활성을 가지고 있다. B. thuringiensis BK4는 F. oxysporun에 의한 토마토시들음병에 대하여 in vivo pot상에서도 충분한 방제력을 나타내었으므로 토마토시들음병을 위시한 Fusarium속 균주가 원인이 되는 질병을 방제할 수 있는 미생물제제의 개발이 가능하게 되었다.
About 300 actinomycetes were isolated from two forest and one sea-shore soil and tested for inhibitory effects on mycelial growth of six plant pathogenic fungi Magnaporthe grisea, Alternaria mali, Colletotrichum gloeosporioides, Phytophthora capsici, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum, and Rhizoctonia solani. Among 300 actinomycetes tested, only 16 actinomycetes showed the antifungal activity against the test fungi. Isolate NH 50 was selected for production and purification of antifungal antibiotic substances. Actinomycete isolate NH 50 displayed the broad antifungal spectra against 11 plant pathogenic fungi. To identify actinomycete isolate NH 50, cultural characteristics on various agar media, diaminopimelic acid type, and morphological characteristics by scanning electron microscopy were examined. As a result, actinomycete isolate NH 50 was classified as a rare actinomycete that had LL-DAP type and did not produce spores. After incubation of isolate NH 50 in yeast extract-malt extract-dextrose broth, antifungal compound NH-B1 that inhibited mycelial growth of some plant pathogenic fungi was purified from the methanol eluates of XAD-16 resins by a series of purification procedures, i.e., silica gel flash chromatography, C18 flash chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, silica gel medium pressure liquid chromatography (MPLC), C18 MPLC, and high pressure liquid chromatography (HPLC). UV spectrum and 1HNMR spectrum of antifungal compound NH-B1 dissolved in methanol were examined. The antibiotic NH-B1 showed the major peaks at 230 and 271.2nm. Based on the data of 1H-NMR spectrum, NH-B1 was confirmed to be an extremely complex polymer of sugars called polysaccharides. The antibiotic NH-B1 showed strong antifungal activity against Alternaria solani and Cercospora kikuchi, but weak activity against M. grisea.
본 연구에서는 생물농약용으로 연구 개발된 길항미생물의 균주들을 이용하여 친환경농업용 길항미생물 컨소시엄을 개발하고자 하였으며, 개별 길항미생물의 항생능력, 항진균성 siderophore 및 ${\beta}$-glucannase 생산능, auxin생산능, 인산가용능 등 각 기작별 상호 보완형 미생물균주의 컨소시엄 후보군을 구성하였다. 구성된 컨소시엄 후보군 중 컨소시엄 No. 11이 in vivo pot test에서 가장 좋은 고추생장촉진능과 교추역병 방제능을 발휘하였다. 최적 컨소시엄인 No. 11 컨소시엄내 두 길항미생물인 B. subtilis AH18과 B. licheniformis K11은 기작별 상호보완형으로 모두 auxin생산능, 항진균성siderophore 및 ${\beta}$-glucannase생산능을 가지며, 특히 B. licheniformis K11는 고추역병을 길항하는 항생물질인 iturin을 생산한다. 고추역병방제용 최적컨소시엄 구성균주들간의 상호 비경쟁적 상리공생 여부를 조사하기 위하여 개별균주인 B. subtilis AH18과 B. licheniformis K11을 각각 단독으로 배양한 것과 두 균주를 동시에 접종하여 배양한 것 그리고, 각각 단독으로 배양한 것을 접종시에 혼용하는 것의 3가지 처리를 실시하였다. 그 결과 동시 배양한 것은 각각을 단독을 배양한 것과 비교하였을 때 방제능과 생육촉진능 모두 시너지 효과를 나타내지 않았다. 하지만, 단독배양 후 혼용한 처리구에서는 시너지 효과를 크게 나타내었는데 방제능도 가지면서 뿌리, 줄기, 잎의 생장촉진효과에서 모두 개별 단독배양 후 처리 또는 동시배양 후 처리에서 보다 50% 이상 시너지 효과를 발휘하였다.
Griseofulvin의 구조활성상관연구에서 6'-methyl기와 4'-oxo기가 생물활성에 있어서 중요한 인자라는 것이 예견되어, 6'-methyl기(基)를 phenyl기(基)로 치환한 6'-phenylgriseofulvin을 diels-alder부가환화로 합성하고 Botrytis allii 및 B. cinerea에 대한 항균활성을 paper disc 법으로 연구하였다. 6'-Phenylgriseofulvin은 $25\;{\mu}g/disc$에서 높은 항균활성을 나타냈다.
6개 고추재배지의 근권 및 해안가 토양으로부터 고추 역병균(Phytophthora capsici)과 벼 도열병균(Magnaporthe grisea)에 길항효과가 있는 53개의 방선균을 분리하였다. 분리된 방선균 중에서 고추 역병균의 균사생장을 억제시켜 5 mm 이상 저지원을 형성하는 32균주를 선발하여 이들 균주의 균총형태, 색깔 등에 따라 20군으로 유별하였다. 이들 길항방선균의 고추 역병균에 대한 길항효과는 균주간에 매우 다양하여 V-8 juice agar에서 5.7-17.5, tryptic soy agar에서는 2.5-l7mm의 저지효과를 보였다. 몇가지 방선균의 길항효과는 두 배지에서 상당히 다르게 발현되었다. 길항균들은 비교적 넓은 항진균성 스펙트럼을 나타내었으나, 세균에 대해서는 Pseudomonas solanacearum을 제외하고는 항균작용이 거의 없었다. 길항방선균 배양여액의 butanol 추출액이 고추 역병균과 벼도열병균의 균사생장을 억제하는 것으로 보아서 이들 길항균이 항균물질을 생성함을 강하게 시사하고 있다. 몇가지 길항방선균의 배양여액은 고추 역병방제 효과가 뚜렷하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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