Seol-Hwa Jang;Seyeon Kim;Shinhwa Kim;Hyunjung Chung;Sook-Young Park
Research in Plant Disease
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v.30
no.3
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pp.229-235
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2024
Conidial production is a critical factor in testing pathogenicity and studying the physiology and ecology of fungal pathogens. Therefore, selecting an appropriate condition and medium for consistent conidia production is essential. In this study, we investigated light conditions and suitable medium conditions using the slide culture method to establish optimal conditions for continuous spore acquisition of Bipolaris oryzae. Primarily, we observed conidial production using two B. oryzae isolates, CM23-042 and 23CM10, under two different light conditions: (1) consistent near-ultraviolet (NUV) with fluorescent light, and (2) a 12-hr shift of the NUV-dark cycle. Secondly, we examined conidial formation under seven different media on potato dextrose agar (PDA), V8-Juice agar, minimal medium (MM), sucrose-proline agar (SPA), rabbit food agar (RFA), rice bran agar (RBA), and rice leaf agar (RLA). Under consistent NUV light with fluorescent conditions, conidia were induced in both isolates, whereas conidia were not produced under other conditions after 7 days post-inoculation (dpi). Moreover, B. oryzae isolate CM23-042 produced the highest number of conidia in MM, while isolate 23CM10 yielded the highest number of conidia in PDA after 7 dpi. In summary, our data demonstrated that the consistent NUV light with fluorescent conditions were most conducive for conidia induction in B. oryzae. The selection of a medium for conidiation may vary depending on the B. oryzae isolates, but using MM and PDA or SPA and RFA medium could be effective for spore induction. These findings will contribute to improving conidiation according to the characteristics of collected isolates of B. oryzae.
Marine bacterium Bacillus cereus ASK202 produced an extracellular agarase (E.C.3.2.1.81) which showed a high level of enzyme activity in the presence of agar and agarose. In the optimal culture conditions, the agarase production increased 7.7 folds compared with the one obtained from the basal medium. Agarase production reached upto 160 units/L after 24hr of cultivation in a modified marine medium at $25^{\circ}C$. The degree of purification increased 31.5 folds with 27.8% yield through freeze drying, DEAE Sepharose CL-6B and Superose 6HR 10/30 column chromatography. The molecular weight of the purified agarase was determined to be 90,000 daltons by gel-permeation filteration. Optimal temperature and pH for the enzyme activity were $40^{\circ}C$ and 7.8, respectively. The enzyme was stable up to $50^{\circ}C$ and at a broad pH range of 5.0-10.0. The $\beta$-agarase was activated by $Zn(NO_3)_2$, and was inhibited by $CuSO_4$ and $SnCl_2$. The Km and Vmax values of this enzyme for agarose as a substrate was $2.4mg/m\ell$ and 13.6 mg/m$\ell$, respectively.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.37
no.12
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pp.1548-1553
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2008
This study was concerning various physiological activities of agar hydrolysates. All agar hydrolysates showed strong antimicrobial activity against Bacillus subtilis and Bacillus cereus. Also, the agar hydrolysates prepared at the temperature of $110^{\circ}C$ or $120^{\circ}C$ showed antimicrobial activity against St. aureus and E. coli. Among the agar hydrolysates, several hydrolysates treated with citrate or malate at $110^{\circ}C$ or $120^{\circ}C$ conditions showed tyrosinase activity inhibition, and their inhibition rates of tyrosinase activity were about 80%. Some tested samples treated with 0.5% organic acid at $100^{\circ}C$ or $110^{\circ}C$ inhibited the growth of cancer cell. Two agar hydrolysates prepared with 0.5% citrate and lactate at $110^{\circ}C$ for $180^{\circ}C$ min had relatively high cancer cell growth inhibition among the tested samples. The agar hydrolysates treated with citrate and lactate at $110^{\circ}C$ for 180 min obtained the main peaks of six and seven from Sephadex G-15 column chromatography. Among the main peaks, the cancer cell growth inhibition of C-3 and L-3 fractions were higher than that of other fractions.
Kefir is a traditional fermented milk in Caucasusian area and is made mainly of milk fermented with lactic acid bacteria and yeasts. Six typical kefir grains were selected from ten kefir grains collected from different locals in Korea. Kefir grains were gelatinous in texture and had various shapes of villi, grapes, leaves, hulled millets, and towels. To investigate predominant microflora of kefir grains, SPC, MRS, M17, Rogosa, and APT agar media were used for viable cell count MRS, SPC, and Rogosa media were most acceptable for bacterial cell counts of the selected kefir grains. From one or two of the SPC agar plates which contained around 25∼50 colonies, all grown colonies were isolated and identified. Most predominant bacteria was identified as Lactobacillus fermentum by API 50 CHL kit. The proportions of Lb. fermentum and Lb. brevis among the total identified bacteria were around 41~88% and M4%, respectively. To select the best preservation method for kefir grains, refrigeration, freezing, and freeze drying were compared. Freeze drying was found most suitable for the preservation of kefir grains, based upon their acid-producing activities and production of off-flavors.
In this study, an effective method for purifying of crude agar was attempted, and at the same time, the effect of crude protein and ash contained in impurified agar on the gel strength of the agar were investigated. In order to reduce the content of protein of crude agar, the agar extract was treated with a protein precipitant such as tricholoroacetic acid(TCA) or perchloric acid(PCA), whereas washing with deionized water was applied to decrease the ash content of agar extract. Among the protein precipitants used in the experiment PCA reduced the crude proteins of crude agar most efficiently; addition of 0.01% PCA resulted in the reduction of crude protein content by 3%, and the gel strength of agar thereby increased from 220g/$cm^{2}$ to 402g/$cm^{2}$. High ash content of crude agar was removed by means of washing treatment and it decreased from 8.1% to 2.7%, leading to the gel strength of 530g/$cm^{2}4$.
The purpose of this study was to isolate a new marine agarase-producing bacterium. Agarase can hydrolyze agar and agarose to produce agarooligosaccharides or neoagarooligosaccharides, which possess many physiological functions. Strain DH-3 was isolated from seawater collected from the coast of Yeosu at Jeollanam province, Korea. A 16S rDNA sequence analysis showed this strain to be Persicobacter sp. DH-3. Extracellular agarase was prepared from culture media of Persicobacter sp. DH-3 and used for characterization. Relative activities at 20, 30, 40, 50, 60, and $70^{\circ}C$ were 50, 55, 70, 100, 90, and 50%, respectively. Relative activities at pH 5, 6, 7, and 8 were 75, 100, 90, and 75%, respectively. The enzyme showed maximum activity at $50^{\circ}C$ in a 20 mM Tris-HCl buffer at pH 6. This enzyme could be useful, as agar is in liquid state at $50^{\circ}C$. Agarase activities were maintained at 80% or more for 2 hr at 20, 30, and $40^{\circ}C$. Thin layer chromatography analysis suggested that Persicobacter sp. DH-3 produced extracellular ${\beta}$-agarases as it hydrolyzed agarose to produce neoagarohexaose and neoagarotetraose. In addition, zymogram analysis confirmed that Persicobacter sp. DH-3 produces at least three agar-degrading enzymes with molecular weights of 45, 70, and 140 kDa. Therefore, it is expected that agarases from Persicobacter sp. DH-3 could be used to produce functional neoagarooligosaccharides.
In this study, the growth characteristics of an agar-degrading bacterium isolated from seawater samples collected from Yeongheungdo, Incheon, and the characteristics of its agarase were analyzed. The 16S rRNA gene sequence of the isolated strain was 95% similar to that of the genus Agarivorans, and thus the isolated strain was named Agarivorans sp. HY-1. When Agarivorans sp. HY-1 was cultured in a marine broth 2216 medium at 27℃ and 250 rpm, it showed maximum growth on day 1 and showed maximum enzymatic activity on day 2. A crude enzyme solution was prepared from secreted agarase in the culture medium. The extracellular agarase of the Agarivorans sp. HY-1 strain showed maximal activity at 40℃ and pH 7.0 (20 mM Tris-HCl) with 591.91 U/l. The agarase exhibited relative activities of 64, 91, 100, 97, 89, and 60% at 20, 30, 40, 50, 60, and 70℃, respectively. At pH 5, 6, 7, and 8, the relative activities were 79, 95, 100, and 55%, respectively. Furthermore, the agarase exhibited >86% residual activity at 20, 30, and 40℃ for 2 hr and >44% residual activity at 50℃ after 2 hr. A TLC analysis confirmed that Agarivorans sp. HY-1 produced α-agarase. As the degradation products of α-agarase have anticancer and antioxidant effects, Agarivorans sp. HY-1 and its agarase may well prove useful.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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