양어장에서 어류의 배설물이나 사료에 의해 생성된 암모니아성 질소 제거를 위한 수처리 공법의 하나로써 질산화 세균 및 탈질화 세균을 고정화 방법의 개잘리 필요한 실정이다. 이를 위해서는 우수한 고정화 방법의 개발이 필요한 실정이다. 이를 위해서는 우수한 질산능과 탈질능을 가지는 미생물의 분리가 선행되어야 하므로 denitifier consortium으로부터 여러 균주를 선별, 동정하여 이를 Pseudomonas sp. KH2-2으로 명명하였다. 분리된 균의 탈질능은 최적의 생육을 보일 때 가장 강하게 나타났다. $30{\circ}C보다는 40{\circ}C$에서 배양하였을 때 최적의 성장을 보여주었고, 탈질능도 현저히 높았다. pH에 있어서는 pH7에서 가장 강한 탈질능을 나타내었다. pH5에서는 균의 성장이 이루어지지 않았고 pH9에서는 $NO_3$^-환원능은 높았으나 $NO_2$^-환원능은 낮았다.
참나무톱밥에 의한 6가크롬의 흡착과 환원특성이 연구되었다. 용액의 pH를 변화하면서 톱밥의 Cr(VI)에 대한 분포계수($K_d$)와 흡착용량을 측정하여 최적조건을 발견하였다. 결과, pH 2.0이 최적조건이었다. 왜냐하면 이 pH에서 Cr(VI)의 $K_d$는 최대이고 Cr(III)로의 환원량은 최소이었기 때문이다. 이러한 참나무 톱밥의 특성을 이용하여 공장폐수중 Cr(VI)의 제거방법도 연구하였다.
토양에서 분리한 호알카리성 Bacillus sp. YC-335가 생산하는 CGTase를 ethanol 침전법, DEAE-Toyopearl column chromatography, Sephadex G-100 column chromatography 방법 등에 의해 대량 정제 하였다. 이때 수율은 17.8 이었고 52.9배의 정제도를 가진 효소단백질을 얻을 수 있었다. 정제효소는 SDS-polyacrylamide gel 전지영동에 의해 분자량이 75,000 정도인 단일 peptide의 단백질임을 확인하였고 효소의 최적활성 pH는 6.0 있었으며 pH 안정성은 pH 6-10까지 안정하였다. 최적활성온도는 5$0^{\circ}C$이었으며 열안정성은 5$0^{\circ}C$까지 안정하였고 이는 15mM CaCl$_2$에 의해 열안정성이 보호되었다.
두 개의 amylase를 호알칼리성 Pseudomonas sp. KFCC 10818의 배양액으로부터 정제하여 그 특성을 조사하였다. 정제된 효소의 분자량은 각각 50 kDa과 75 kDa이었다. 이 효소들의 최적반응온도는 각각 $35^{\circ}C$와 $40^{\circ}C$였으며 50 kDa의 효소는 칼슘이온에 의하여 효소활성이 두 배로 촉진되었다. 이 두 효소는 최적 pH가 6-8 부근이었으며 pH 12의 조건에서도 효소활성을 유지하는 알칼리내성을 나타냈다. Maltooligosaccharide이나 soluble starch로부터 maltose와 maltotriose를 최종 효소반응산물로 생산하였다. 두 amylase는 N-말단 아미노산 서열이 각각 QTVPKTTFV와 DTVPGNAFQ로 분석되었다.
Cyclodextrin(CD) 생성효소(CGTase)를 생산하는 미생물을 토양으로부터 알칼리 (pH10.3) 조건하에서 1주 분리하여 동정한 결과, pH 7.5~ll.0까지 생육하는 절대 호알칼리성 Bacillus sp.이었다. 분리균주가 생산하는 효소는 전분으로부터 $\beta$-CD를 우선적으로 생성하는 효소임을 HPLC를 통해 분석하였으며, 이때의 $\alpha$-, $\beta$-, ${\gamma}$-CD의 생성비율은 1:10:1.5이었으나 분리균주의 효소생산 조건은 1% $Na_2$CO$_3$가 탄소원으로, 5% corn steep liquor를 질소원으로 하여 호기적 조건에서 37$^{\circ}C$, 48~60시간 진탕배양하였을 때 배양상징액으로 부터 최대 효소생산을 얻었다. Ethanol 침전방법을 이용하여 얻은 조효소액의 효소적 특성에 있어서 본 효소의 최적활성 pH는 6.0이었으며 pH 안정성은 pH 5~9까지 안정하였다. 최적활성 온도는 5$0^{\circ}C$이었으며 열안정은 5$0^{\circ}C$까지 안정함을 보였다. 본 효소의 활성염색 전기영동 결과, 대조균인 호알칼리성 Bacillus sp. ATCC 21783의 효소와 비교시 단백질의 성상에 있어서 차이점을 확인할 수 있었다.
코발트와 구리가 함유된 유기산 침출용액으로부터 용매추출법을 이용하여 구리와 코발트의 분리 회수를 위한 기초 연구를 실시하였다. 구리와 코발트의 추출에 영향을 미칠 수 있는 평형 pH, 추출제의 농도, 상비 변화에 대하여 용매 추출 실험을 진행하였다. 구리 추출제로 LIX 84, 코발트 추출제로 Cyanex 272 및 Versatic acid 10을 사용하였는데 실험 결과 구리의 경우 평형 pH 2.0 이상에서 약 99%의 추출율을 보였고, 코발트의 경우는 추출제로 Cyanex 272를 사용 시 평형 pH 6.0에서 Versatic acid 10 사용 시에는 평형 pH 7.5에서 각각 90% 이상의 추출율을 나타내었다. 한편, 구리와 코발트를 탈거하기 위한 탈거제로 최적의 황산농도는 120 ~ 150 g/L 이었다. 그리고 구리 및 코발트가 함유된 미생물 침출용액에서 구리와 코발트를 회수할 수 있는 기초 최적 공정을 제시하였다.
새송이버섯의 biomass를 위한 최적조건을 규명한 결과, 균사체 spot 배양을 위한 최적 조건은 PDA배지를 사용하여 24$^{\circ}C$에서 18일 배양 시 최적인 것으로 판단하였으며, 새송이버섯 균사체 Biomass를 위한 bioreactor의 배양 최적조건은 PDMP배지를 사용하여 pH 5.5, 18$^{\circ}C$에서 27일 배양시 reactor의 반응은 최적의 상태를 나타낼 수 있을 것이라 판단되었다. 최적조건에서 bioreactor를 이용한 새송이버섯 균사체의 인공적인 대량 배양이 가능하였으며, bioreactor에서 대량 인공 배양된 균사체를 이용한 새송이버섯 재배 시, 자실체가 형성되어 새송이버섯의 대량생산을 위한 biomass가 가능하였다.
Erro-prone PCR에 의해서 열안정성이 향상된 Streptomyces coelicolor A(3) 유래의 L-threonine aldolase를 Corynebacterium glutamicum R에서 과잉발현시키기 위하여 Corynebacterium용 vector plasmid인 pCRB1의 SD배열과 개시코든사이의 1염기를 제거한 고발현용 vector plasmid인 pCG-H44(2)를 구축하였다. pCG-H (2)에 의해서 형질전환된 C. glutamicum R 균주(CGH44-2)에서 L-TA를 발현시킨 결과, 기존의 Corynebacterium용 vector plasmid인 pCRB1(CGH44-1)보다 L-TA의 발현량이 높았다. L-threo-DOPS의 합성을 위한 최적조건은 $30^{\circ}C$, 0.1 M cirtric acid buffer(pH 7.0)이었으며, 0.1% TritonX-100를 첨가하였을 경우 보다 높은 활성을 보였다. 최적조건하에서 CGH44-2를 whole cell biocatalyst로 이용한 반복회분식반응에서 재조합대장균을 숙주로 이용한 경우보다 재조합Corynebacterium을 이용하였을 경우, 목적하는 L-threo-DOPS의 합성이 안정적으로 이루어졌다.
옥수수 전분의 인산화 가교반응에 의한 RS4 제조 시 최적 annealing 조건을 검토하였다. 전분유에 NaOH를 0.9%, 1.2%, 1.5%/st.ds의 농도가 되게 첨가하고 복합인산염(STMP/STPP 혼합)을 이용하여 인산화 가교반응 할 경우 NaOH 농도가 높을수록 반응 초기에 RS 함량이 빠르게 증가되었으나 NaOH 농도에 상관없이 반응 12시간 후에는 비슷한 RS 함량을 나타내었다. 전분유의 Annealing 처리는 인산화 가교반응 전에 실시하였다. 전분유를 pH 2-10, 온도 $40-60^{\circ}C$, 0-14시간으로 처리한 후 인산화 가교반응을 하였다. Annealing 처리시 pH가 낮을수록 RS 함량이 높아지는 결과를 보였으며 pH 2에서 annealing 온도 $50^{\circ}C$, 2시간 annealing에서 최고의 RS 함량을 나타내었다. 따라서 최적 인산화 가교반응 조건은 먼저 pH 2.0, $50^{\circ}C$에서 2시간 annealing 처리를 한 후 황산나트륨 농도 10%/st.ds, NaOH 농도 1.2%/st.ds 조건에서 12시간 인산화 가교반응을 행하는 것으로 생각된다. RS 함량은 인산염 투입량이 증가함에 따라 직선적으로 증가하였다. 본 연구결과에 의한 최적조건을 활용하여 복합인산염 10%/st.ds의 농도로 RS4를 제조한 결과 RS 함량은 72.3% 였으며 인의 함량은 0.36%/st.ds로 한국 식품첨가물 공전에 적합하여 식품용 소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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