• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.135-135
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• 2003

본 연구는 체세포 핵이식 복제 수정란의 이식에 의한 고능력 한우를 다량 증식하기 위한 방안을 확립하기 위하여 수행되었다. 본 실험에 공여된 체세포는 육질과 육량 등급이 국내에서 100위 이내의 암소 귀세포를 채취하여 동결 및 계대배양하여 사용하였다. 한편, 핵이식 수정란의 준비를 위하여 도축장에서 채취한 난소에서 난자를 회수하여 22시간 성숙배양 후 난구세포를 제거하고 극체가 존재하는 난자만을 선별하여 recipient cytoplasm으로 이용하였다. 난자의 제핵, 체세포 핵이식, 전기융합 및 활성화 처리는 본 실험실의 방법에 준하여 실시하였으며, 핵이식란은 CR1aa 배양액 내에서 5% $CO_2$, 95% Air 및 39$^{\circ}C$의 기상조건하에서 7일간 배양 후 이식에 이용되었다. 한편, 수란축은 2회 이상 정상 발정주기가 확인된 경산우와 미경산우에 25mg의 PG $F_{2}$$\alpha$/를 투여하여 발정을 유기하거나 자연발정우를 선발하여 수란축으로 이용하였다. 그 결과, 배반포기배를 이식한 경우 14두중 5두에서 임신이 확인되었으며 그중 4두에서 유산되었고, 1두는 임신 6개월령으로 정상 발육되고 있는 것이 확인되었지만 상실배기단계에서 이식된 경우는 임신이 되지 않았다. (중략)

• Korean Journal of Plant Tissue Culture
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• v.22 no.4
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• pp.207-211
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• 1995

Immature zygotic embryos from immature seeds of Wasabia japonica (cv Dalma) were isolated and cultured on modified MS medium supplemented with 2,4-D, IAA, and BA. Immature zygotic embryos were classified into torpedo shape and cotyledon stage. The highest rates of callus formation were obtained of 1.0mg/L IAA(torpedo stage, 90.0%)and 1.0mg/L 2,4D plus 0.1mg/L BA(cotyledany stage,84.3%). Somatic embryos after 60 days of culture. These numerous somatic embryo could be seperated and subcultured on the same media for further propagation. After 90 days of culture, most somatic embryos were developed well organized embryos which were able to produce into whole plants.

• Korean Journal of Plant Tissue Culture
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• v.28 no.2
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• pp.113-116
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• 2001

Chromosomal variation was investigated in the female and male somaclones regenerated from the leaf segment culture of Rumex acetosa L. Difference in phenotype depending on the sexuality was not observed. In female somaclones, 21 among 25 somaclones carried the same chromosome complements (2n＝14) with wildtype and others were tetraploids (2n=28), Considerable chromosomal variation was found in male somaclones. Only 4 among 20 somaclones carried normal chromosome number (2n=15) and 13 somaclones were aneuploids.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.90-90
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• 2003

체세포 핵이식에 의한 복제기술은 매우 낮은 성공률 나타내고 있어 실용화에 지장을 초래하고 있다. 이것은 후생적인 유전현상인 reprogramming이 불완전하게 이루어지기 때문인 것으로 추측되어지고 있다(Reik et al., Theriogenology 2003, 59: 21-32; Han et al, Theriogenology 2003, 59: 33-44). 체세포 핵이식 후에 태아사망의 원인이 태반의 비정상적인 기능과 관계가 있는 것으로 추정되는데 복제시 태아사망의 원인을 찾기 위해 본 연구를 시행하였다. 한우에서 체세포 복제 후 임신 말기에 태아가 사망한 태반조직 3개와 IVF 수정란 이식 후 동일한 시기에 제왕절개술을 실시한 태반조직 2개를 실험에 이용하였다. 태반 protein을 Two-Dimensional electrophoresis와 Mass spectrometer를 이용하여 분석 비교하였다. IPG-system을 이용하여 pH 4~7, pH 6~9에서 1차 전기영동을 한 후, 8~l6%의 SDS-PAGE gel에 2차 전기영동을 실시하였고 G-250 Coomassie로 염색하였다. gel 이미지는 Malanie III program을 이용하여 분석하였다. 전체 gel에서 약 1800개의 구분 가능한 protein spot이 나타났다. pH 4~7 범위에서 양적으로 차이나는 것 15개 중 복제한우 태반에서 증가되는 protein spot 5개와 감소하는 protein spot 10개를 골라 protein identification을 실시하였다. MALDI-TOF-MS를 이용하여 동정한 결과 phosphatidylinositol transfer protein-$\alpha$와 interleukin-18 등의 protein이 복제태반에서 발현이 증가되었고, 복제한우에서 발현이 감소되는 것으로는 vimentin, Rho-GDI-$\beta$, TRAST $\beta$-chain, ovarian sterol carrier protein 2, triosephosphate isomerase, tropemyosin beta chain, Aldose reductase 등으로 나타났다. 이러한 protein들은 inositol 지질 신호전달과 면역시스템, 세포분열, 산소 운반, steroidogenic 세포에서의 콜레스테롤 이동, 촉매 작용, 대사 작용 등에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 체세포 복제에 의한 태아사망 원인은 태반에서 이러한 protein들의 비정상적인 발현에 기인된 것으로 추정된다.

• Journal of Environmental Health Sciences
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• v.21 no.2
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• pp.42-53
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• 1995

광주시 지역에서 사육하고 있는 젖소 1,614두중 유방염으로 의심되는 730분방 중에서 170분방을 검사분석하여 유방률, 균의 분리와 간이검사법과의 관계, 계절별 분리균의 분포, 항균 요법제에 대한 감수성 등을 검사하였다. 본 원인균은 730분방 중 134분방(18.4%)에서 분리되었으며 체세포 숫자는 평균 $1.620 imes 10^6pm 1.167 imes 10^6/ml$(C.V. 72.0%)이었다. CMT 반응치는 평균 $2.9pm 1.2$(C.V. 41.4%)이었으며 WT 반응치는 평균 $2.8pm 1.2$(C.V. 42.9%)이었다. RBVT와 CMT의 상관계수는 0.82(P<0.001)이었고 RBVT와 WT의 상관계수는 0.75 (P<0.001)이었으며 CMT와 WT의 상관계수는 0.93 (P<0.001)이었다. 체세포 숫자를 기준으로 하여 CMT 및 WT의 양성율을 비교하여 보면 원인균이 분리된 경우에는 체세포 숫자가 $0.49 imes 10^6$ 이하/ml의 경우에 반응치가 1+일때의 CMT는 72.4%, WT는 42.1%이었고 체세포 숫자가 $0.50 imes 10^6~1.00 imes 10^6/ml$의 경우에 반응치가 2+일 대의 CMT는 45.5%, WT는 48.8%이었으며, 체세포 숫자가 $3.01 imes 10^6$ 이상/ml의 경우에 반응치가 3+일 때의 CMT는 73.7%, WT는 92.3%이었다. 원인균의 월별 분리 빈도를 보면 8월 (17.9%)이 가장 높았고 다음은 9월(16.4%), 7월 (12.7%), 6월 (11.2%), 1월 (9.0%)의 순이었다. 원인균의 분리 빈도를 보면 Staphylococcus sp. (51.4%)가 가장 높았고 다음은 Escherichia coli(23.9%), Pseudomonas sp. (11.2%). Streptococcus sp. (6.7%)의 순이었다. 항균 요법제에 대한 감수성은 trimethoprim/sulfamethoxazole은 Streptococcus sp., Staphylococcus epidermidis, Proteus sp., Salmonella sp. 등에 높았고 gentamycin은 Streptococcus sp., Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, Klebsiella sp., Proteus sp., Salmonella sp. 등에 높았으며 enrofloxacin은 일반적으로 거의 모든 균에서 감수성이 높았다.

• Journal of Korean Society of Forest Science
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• v.87 no.1
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• pp.57-61
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• 1998

Somatic embryo induction, plant regeneration, and field establishment were investigated from tissue cultured winter buds of a 10-year-old tree Aralia elata. Embryogenic calli were obtained from cultures of winter buds on MS medium supplemented with 2,4-D. A number of somatic embryos were regenerated from the calli on an embryo induction medium supplemented with 2,4-D and BA. Although abnormal somatic embryos were frequently observed, most of the embryos formed were morphologically normal. All somatic embryos at the later stage of maturity germinated successfully, but only 14% of them could be developed into plantlets on MS basal medium. The plants regenerated from the somatic embryos survived well in the field (survival rates : more than 95%) and have grown normally for three years after transplanting.

• Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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• v.19 no.4
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• pp.297-302
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• 1999

Cotyledonary abnormalities were observed in secondary somatic embryos which were developed from calli cultured on MS medium with various concentrations of 2,4-D. In MS medium containing hormone-free or $0.1mg/{\ell}$ 2,4-D, the frequency of normal embryo formation with two cotyledons were above 57%. According to concentration of 2,4-D increment the frequency of normal embryos were decreased. In MS medium containing $4mg/{\ell}$ 2,4-D, the frequency of normal embryo formation was just 10%. The rate of germination was as follows; 37.7% of somatic embryos had one cotyledon, 85% two cotyledons, 38% three cotyledons, 35% four cotyledons, 25% five cotyledons and 29% trumpet-like cotyledons. About 80% of the embryos with two cotyledons were converted into normal plants, but one, three or four cotyledons were only 6.8~10%. The five or trumpet-like embryos were not developed into normal plants.

• Journal of Ginseng Research
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• v.23 no.2 s.54
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• pp.74-80
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• 1999

Excised cotyledon segments of ginseng zygotic embryos cultured on MS basal medium without growth regulators produced somatic embryos near the basal excised portion at a high frequency. The frequency of somatic embryo formation on the segments declined along with advancing zygotic embryo maturity. In immature cotyledons, all the cells of the epidermis and subepidermis were smaller and more densely cytoplasmic than those in mature cotyledons, and from which multiple cells participated in embryogenic division to form somatic embryos with multiple cotyledons and fasciated radicles (poly-embryos). But in germinating cotyledons, only the epidermal cells were densely cytoplasmic and singularly competent to develop into somatic embryos resulting in single-embryos with closed radicles. This result means that the origin and development of somatic embryos is determined according to whether the cells participating in embryonic division are in a single state or a massive state relative to cotyledon maturity.

• Korean Journal of Plant Tissue Culture
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• v.28 no.1
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• pp.21-24
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• 2001

Peucedanum japonicum $T_{HUNB}$ used as a edible and medicinal plants was investigated for in uitro regeneration. Callus formation occurred on leaf and stem explant cultures and showed spontaneous embryogenic and organogenic capability on MS basal medium supplemented with 0.1~5 mg/L NAA and 0~10 mg/L BA in dark. The regeneration was highest on the condition supplemented with 2.5 mg/L NAA and 10 mg/L BA. Development of the somatic embryo progressed through the globular, heart-shaped, torpedo-shaped and cotyledonary stage, typical of zygotic embryos. When the first somatic embryos was cultured on the medium supplemented with 0.2 mg/L NAA, secondary somatic embryo were induced with higher frequency on the hypocotyl then on the cotyledon and root.t.

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2002.11a
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• pp.70-70
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• 2002

형질전환 가축을 생산하기 위하여 최근 체세포 복제 기법을 이용하고 있다. 이러한 체세포를 이용한 형질전환 동물의 생산에는 체세포내에 유전자의 도입 효율이 직접적인 영향을 주게 된다. 따라서 본 연구는 세포내 유전자의 transfection 효율을 높이고자 한우의 체세포를 이용하여 여러 가지 조건에서 유전자 도입을 실시하였다. 세포내 유전자 도입 방법은 electroporation (EP) 방법을 이용하였다. 사용한 세포는 소의 귀세포(KbESF), 태아섬유아세포 (KbFF), 그리고 대조구로서 CHO cell을 이용하여 GFP 유전자를 도입하였다. EP는 0.4 cm cuvette을 사용하였고, voltage는 0.25 kV, 그리고 field strength 는 0.625 kV/cm 조건으로 실시하였으며, pulse times은 각각 1, 2, 또는 3회를 사용하였다. KbFF와 KbESF에서는 각각 pulse times을 증가시킬수록 유전자도입 세포수가 증가하였으나 (KbFF: 81, 634, 1,065 cells/$10^{6}$ cells, KbESF: 1,011, 5,567, 15,408 cells/$10^{6}$ cells), CHO cell에서는 pulse times을 증가시킬 수록 오히려 유전자도입 세포수가 감소하였다 (CHO: 1,591, 687, 297 cells/$10^{6}$ cells). 그리고 2주 동안 neo selection을 실시 한 결과 KbFF, KbESF, CHO에서 각각 93, 35, 184 colony가 선발되었으며, 이 중 65.6%, 8.6%, 4.3% 가 GFP 형광 발현 colony로 나타났다. 한편 CHO cell에서 transfection cell수가 감소된 것은 EP의 자극으로 인해 손상된 세포가 많이 발생한 것으로 나타났다. 또한 neo selection에서 선발된 colony중 GFP가 발현되지 않거나 일부만 발현되는 colony들이 많이 발생하였는데, 이것은 세포내 유전자가 transfection되지 않은 세포도 neo selection에서 선발된다는 것을 제시하고 있다. 따라서 체세포를 이용한 형질전환동물 생산을 위해서는 세포내 유전자 도입과 선발 과정에서 나타난 colony에 대하여 보다 엄격한 screen을 하는 것이 필요한 것으로 생각된다.