• 한국양식학회지
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• 제11권1호
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• pp.67-75
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• 1998

감성돔 (Acanthopagrus schlegeli) 정자의 냉동 보존시 정자의 생리활성과 보존효과를 비교하기 위하여, 순환여과 사육시스템에서 사육한 전장 $25.9{\pm}1.7$ cm, 체중$292.8{\pm}53.7$ g의 성어로부터 얻은 정액을 재료로 하여 희석액별, 동해방지제별 해동후 정자의 활성, 생존율 및 알에 대한 수정능력을 평가하였다. 희석액별 냉동보존에서 해동정자의 생존율은 3% sodium citrate에서 $80{\pm}1.4$%로 가장 높았으나, 수정률은 5.4% glucose에서 $63.4{\pm}4.4$%로 가장 높았다. 동해방지제별 냉동보존에서 해동정자의 수정률은 5~15% glycerol을 동해방지제로 사용하였을 때, 50.1~69.4%로 DMSO 보다 나은 효과를 보였다. 감성돔 정자의 냉동보존을 위한 적정 희석액과 동해방지제는 5% glucose와 5% glycerol이었다. 냉동하지 않은 감성돔 정자의 머리는 구형으로 직경 $1.5{\pm}0.1$ ${\mu}$m, 길이 $1.3{\pm}0.1$${\mu}$m였으며, 치밀한 핵질로 채워져 있었다. 편모는 전형적인 9+2 구조를 나타냈다. 그러나 냉동후 해동시킨 정자중에서는 염색질의 과립화, 세포막의 이탈에 의한 그 용적이 커지는 구조변화를 보였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권3호
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• pp.315-322
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• 1998

본 연구는 xanthine과 xanthine oxidase가 첨가된 배양액내에서 전배양된 돼지동결정액의 수정능력에 있어서 catalase의 영향을 검토하였다. 체외수정을 위한 기본 배양액내에서 0 또는 30분간 전배양한 정자는 catalase를 첨가 (40 및 15%)한 경우 보다는 무첨가 (66 및 38%)시 유의적으로 높은 정자침입율을 나타냈지만 (p<0.05), 배양액내에 xanthine을 첨가해 정자를 0, 30 및 60분간 전배양했을 때에는 catalase 무첨가 (33, 41 및 19%) 보다는 첨가시 (68, 70 및 49%) 유의적으로 높은 정자침입율이 인정되었다 (p<0.05). 그러나 xanthine oxidase를 첨가하여 정자의 전배양을 행하지 않은 경우는 catalase의 첨가 (13%) 보다는 무첨가 (51%)시 유의적으로 높은 정자침입율을 나타냈지만 (p<0.01), 전배양(30 및 60분)후에는 catalase의 존재유무와 정자전배양시간에 관계없이 매우 낮은 정자침입율 $(10\sim21%)$을 나타냈다. xanthine과 xanthine oxidase를 동시에 첨가하여 0, 30 및 60분간 정자를 전배양한 경우 catalase의 무첨가 (14, 4 및 8%)보다 첨가 (75, 55 및 52%)시 유의적으로 높은 정자침입율을 나타냈다 (p<0.001). 한편, 다정자침입율은 xanthine, xanthine+xanthine oxidase의 첨가시 정자전배양기간이 길어짐에 따라 감소하였으며, catalase의 첨가보다는 무첨가시 낮은 다정자침입율을 나타냈다. 본 연구의 결과로부터 xanthine과 xanthine oxidase를 동시에 첨가시 catalase의 존재는 정자의 전배양후에도 다정자침입을 억제하면서 수정능력의 유지를 위해 매우 효과적인 것으로 추측되었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제23권3호
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• pp.229-237
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• 1999

본 연구는 돼지 동결-융해 정자의 전배양시 aseorbie acid (Ase)와 ferrous sulfate (Fe$^{2＋}$)가 정자의 수정능력획득, 첨체반응 및 난자내 침입능력에 미치는 영향을 검토하였다. 정자의 전배양시 0~1.0 mM의 Fe$^{2＋}$의 첨가는 비전배양에 비해 높은 첨체반응 (P＜0.05) 및 정자침입율을 얻었다. 이와 같은 결과는 0~0.5mM의 Ase 첨가 시 첨체반응율에서는 같은 결과를 나타냈지만 정자침입율은 오히려 정자의 전배양 보다는 비전배양시 높은 비율을 나타냈다. 한편, Fe$^{2＋}$가 함유 되어있는 배양액내에서 2시간동안 정자의 전배양시 0.1 mM Asc의 첨가는 0.5 mM Ase의 첨가에 비해 유의적으로 높은 첨체반응율을 나타냈으나 (P＜0.05), Ase의 농도사이에서 정자침입율에는 차이가 없었다. 또한, Ase가 함유된 배양액내에서 정자의 전배양시 0.1 mM Fe$^{2＋}$를 첨가했을 때 첨체반응율은 Fe$^{2＋}$ 무첨가시 유의적으로 높았으나 (P＜0.05), 오히려 가장 낮은 정자침입율을 나타냈다. 이와 같은 결과는 체외에서 돼지정자의 처리시 Fe$^{2＋}$ 또는 Ase의 첨가와 정자의 전배양에 의해 첨체반응과 정자침입에 효과적인 작용을 하는 것으로 생각된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제25권4호
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• pp.327-337
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• 2001

본 연구는 superoxide dismutase (SOD)가 동결-응해 돼지정자의 lipid peroxidation과 체외수정능력에 미치는 영향을 검토하였다. 그 결과 동결-응해 정자는 10 units/$m\ell$의 SOD가 첨가된 배양액에 의해 처리했을 때 가장 높은 정자생존율을 나타냈으나 서로 다른 농도에 의한 차이는 인정되지 않았다. 그러나 SOD농도에 관계없이 정자처리 직후의 생존율은 120분간 배양 후에 비해 유의적(P＜0.05)으로 높은 생존율을 나타냈다. 또한 정자처리 후 배양시간이 0, 60 및 120분으로 길어짐에 따라 정자의 첨체반응 유기율이 증가하였지만 SOD 첨가 또는 무첨가구 사이에서 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 한편, 체외수정시 1 unit/$m\ell$의 SOD를 첨가한 경우 0, 10 및 100 units/$m\ell$ 첨가시 보다 유의적(P＜0.05)으로 높은 정자침입율을 나타냈으며, 10과 100 units/$m\ell$의 SOD 첨가시 낮은 다정자 침입율을 나타냈다 (P＜0.05). 정자의 peroxidation은 malondialdehyde의 생성에 기초를 두고 평가하였는데 SOD 무첨가에 비해 첨가농도가 높아질수록 malondialdehyde의 생성이 낮아졌지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 또한 동결-융해된 정자는 sulfhydrl(-SH) group의 용량을 측정한 결과 SOD무첨가시 보다 첨가시 높은 용량이 측정되었지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 한편, 동결-융해된 정자가 체외에서 성숙시킨 난자의 투명대에 접착하는 정도를 평가한 결과 SOD 무첨가 보다는 첨가농도가 높아짐에 따라 접착정자수가 증가하였으며 100 units/$m\ell$ 첨가시 유의적(P＜0.05)으로 높은 접착정자 수를 나타냈다 본 연구의 결과로부터 SOD는 돼지 동결-융해정자에 있어서 난자의 투명대 접착능력의 증가와 함께 체외수정능력 향상에 영향을 미치는 것으로 나타났다.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권3호
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• pp.275-289
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• 2002

본 연구는 종모우의 정자수정능력 평가방법의 개발과 정자 기능 및 성상 변화에 영향을 미치는 요인을 알아보기 위하여 시행하였다. 동결-융해된 종모우 정액을 대상으로 정자의 운동성과 정자의 형태를 분석하였고, 정자의 기능 검 사 항목으로서 체외수정(IVF), HOST, Ca-ionophore에 의한 첨체반응율, 정자의 ROS 측정을 위한 luminol, lucigenin-dependent chemiluminescence, LPO 분석을 위한 malondialdehyde의 측정 및 TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT) dUTP nick end labelling) 기법을 이용한 정자의 DNA fragmentation를 측정하였으며 이들 각각의 조사 항목들의 분석치들과 체외수정율 및 배발생율과의 상관관계를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 고수정군과 저수정군의 체외수정율과 배반포 발생율의 평균은 각각 64.4%와 34.3%, 18.50%와 6.2%였으며 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(P<0.05). 고수정군과 저수정군의 정자운동성과 첨체반응률은 각각 평균79.0 %와 66.2%, 40.7%와 22.9%로 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), 정상형태 정자의 비율과 HOST는 각각 평균 94.6%와 92.7%, 69.4%와 59.8%로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 2. Luminol dependent chemiluminescence, LPO 및 DNA fragmentation의 평균은 고수정군과 저수정군에 있어서 각각 6.4와 6.5, 2.Onmol와 3.Inmol 및 2.6%와 7.4%로 두 군간 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), lucigenin dependent chemiluminescence는 4.7와 4.6로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 3. 체외 수정율은 정자의 운동성 및 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정(positive)의 상관관계(r=0.87, p<0.01; r=0.81, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxldation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부(negative)의 상관관계 (r= -0.81, p<0.05; r: -0.74, p<0.05; r : 0.81, p<0.05)를 나타내었다. 그러나 체외수정율은 정상형태 정자의 비율, HOST 및 lucigenin dependent chemiluminescence와는 유의한 상관 관계를 나타내지 않았다. 4. 배반포 발생율은 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정의 상관관계(r=0.71, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxidation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부의 상관관계(r= -0.71, p<0.05; r= -0.89, p<0.01; r= -0.71, P<0.05)를 나타내었다. 배반포 발생율은 정자의 운동성, 정상형태 정자의 비율 및 HOST, lucigenin dependent chemilumihescence와는 유의한 상관관계를 나타내지 않았다. 이상의 결과를 종합해 보면 정액질의 저하에 ROS의 영향이 밀접히 연관되어 있음을 알 수 있으며, 또한 본 연구에서 적용된 기법들은 정액질의 평가 및 정자 수정능력 향상을 위한 기술개발에 있어서 유용한 평가 방법으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국동물학회지
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• 제33권1호
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• pp.70-77
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• 1990

생쥐의 정자가 부정소에서 성숙하는 동안 Phosphatase 활성도의 변화를 알아보기 위하여 본 연구를 실시하였다. 효소의 활성도는 Ernst(1975)의 방법을 변용하여 측정하였으며 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 부정소으 두부내 정자와 미부내 정자으 단백질 함량은 각각 59.1 $\pm$8.4(mg/10 9 sperm), 14.0$\pm$12.3(mg/10 9 sperm)으로 나타났다. 기본 반응액에서 나타난 두부내 정자의 효소 활성도를 100%로 할 때, 미부내 정자의 활성도는 ALPase가 29.2%, ALPase가 44.9% 그리고 ALPase가 53.8%였으며, 초음파로 정자를 분쇄하였을 경우에 ALPase는 16.5%, ALPase는 33.3% 그리고 ALPase는 38.7%였다. 따라서 미부내 정자의 phoshatase 활성도는 두부내 정자에 비하여 현저히 감소하였다. 그리고 부정소의 미부내 정자에서 K+ -dependent ALPase와 ALPase의 활성도는 두부내 정자에 비하여 유의하게 감소하였으며, 초음파로 정자를 분쇄하였을 때 $Ca^2$+ -dependent phoshatase의 활성도는 유의하게 증가하였다. 이상의 결과로 보아 생쥐의 정자가 부정소에서 성숙하는 동안 phoshatase의 활성도가 감소하는 것은 성숙과정에서 정자가 수정능력을 획득하는 데 어떤 중요한 역할을 할 것으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권2호
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• pp.125-134
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• 2003

본 연구는 사람의 시험관아기 프로그램에서 체외 수정란의 질을 향상시키는 한 방법으로 난포액으로 처리된 정자를 체외 수정에 사용하여 생산된 체외 수정란의 전핵 등급과 발달 능력을 조사하였다. 정상적인 시험관 아기 시술을 시행한 실례 환자를 대상으로 과배란을 유기하여 배란 직전의 난자를 채취하여, 난포액으로 처리된 정자와 체외 수정시킨 후 사람 체외 수정란의 전핵 등급과 체외발달율을 조사하였다. 체외수정을 위한 정자의 처리 방법으로 synthetic serum substitute (SSS)를 15% 첨가한 modified human total fluid (m-hTF) 혹은 난포액에서 정자를 2시간 동안 swimming-up 처리 후 각각 체외수정에 사용한 결과, 수정율은 75.3 및 82.1%를 나타내어 유의적인 차이는 없었으나, 1등급 전핵란은 각각 48.0 및 65.5%를 나타내어 난포액에서 유의적으로 (P<0.05) 높았고, 배양 후 3일째에 수정란의 등급을 조사한 결과, 1등급 체외수정란은 각각 44.9 및 60.5%를 나타내어 난포액에서 유의적으로 (P<0.05) 높았다. 또한 체외수정란을 배양 후 3일째에 수정란의 발달 단계를 조사 한 결과, 5-세포기 단계 이상을 발달하는 비율은 각각 51.0 및 70.5%를 나타내어 난포액에서 유의적으로 (P<0.05) 높았다.

• 한국가축번식학회지
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• 제27권2호
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• pp.153-161
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• 2003

본 연구는 돼지 동결-융해 정자의 배양에 의한 체외수정능력과 glycosidase activity를 평가하기 위하여 chlortetracycfine fluorescence분석법을 이용하여, glycosidase가 체외수정능력과 정자침입에 미치는 영향에 대하여 검토하였다. 또한 돼지난자의 투명대내에서 발견된 당잔기에 대한 정자의 glyco-sidase 특이성을 확인하기 위하여 $\alpha$-L-fucosidase, $\alpha$-D-mannosidase, $\beta$-D-galactosidase 및 N-acetyl-$\beta$-D-glucosaminidase ($\beta$-GlcNAc'ase)의 activity를 분석하였다. 그 결과 glycosidase activity는 동결정자의 응해 후 배양하지 않았을 때보다 2시간 배양했을 때 더 높게 나타났다. $\beta$-GlcNAc'ase의 activity 는 정자 배양 유무에 관계없이 다른 glycosidase 처리시보다 최소한 2배 이상 높게 나타났다. 또한 첨체반응이 유기된 정자의 비율은 glycosidase ($\alpha$-D-mannosidase; P<0.05)에 의해 영향을 받았으며 자를 배양하지 않은 경우보다는 배양된 정자에서 높게 나타났다. 그러나 배양시간에 따른 정자의 존성에 대해 glycosidase의 종류에 따른 유의차는 인정되지 않았다. 한편 투명대내 정자의 접착과 입에 대한 또 다른 실험에서, 서로 다른 glyco-sidase가 첨가된 배양액내에서 수정된 정자가 배양시간이 길어짐에 따라 정자의 침입율은 낮아졌다 $\beta$-GlcNAc'ase; P<0.05). 투명대내의 정자접착정도는 glycosidase의 첨가시에 무첨가시보다 접착정도가 더 높았으며, 가장 높은 접착율은 $\beta$-GlcNAc'ase 첨가시 나타났다. 또한 모든 glycosidase 처리시 2시간 배양한 정자보다는 배양하지 않은 정자에서 투명대에 대한 접착정도가 높게 나타났으며, $\alpha$-D-mannosidase의 처리시 유의적인 차이를 보였다 (P<0.05). 본 연구의 결과, $\beta$-GlcNAc'ase가 주로 돼지정자의 원형질막내에 존재하는 것으로 추측되며, 배양된 정자에 의한 투명대 접착정도와 침입율이 낮았음에도 불구하고 glycosidase activity가 증가하는 것으로 나타났다.

• 한국가금학회지
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• 제30권2호
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• pp.129-134
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• 2003

정액의 액상보존이 닭의 번식능력에 미치는 영향을 구명하기 위하여 계통이 분명한 재래닭을 정액 채취용 수탉으로 사용하였으며 인공수정용 암닭으로는 백색산란계를 사용하였다. 닭 정액을 채취 희석하여 5$^{\circ}C$ 냉장온도에서 6, 30, 54 시간보존하며 정액성상 검사와 함께 인공수정을 하였을 때, 원정액과 skim milk glucose액, egg yolk glucose액 및 saline에 희석된 정액의 정자운동성은 냉장보관 6 시간에는 처리간에 유의적인 차이가 없었으나, 냉장보관 30 및 54 시간에는 저하되는 경향이었다 그러나 skim milk glucose액과 egg yolk glucose액의 정자운동성과 정상정자율은 30 및 54 시간 냉장 보존을 하여도 원정액이나 saline액보다 현저히 높았으며 (P<0.05), 수정율에 있어서는 6, 30 및 54 시 간 냉장보존된 skim milk glucose희석정액에서 90.77, 87.70 및 59.46% 를 나타내어 다른 시험구보다 현저하게 우수한 결과를 보였다 .(P<0.05). 따라서 본 연구결과 skim milk glucose액은 닭의 액상정액 인공수정시 산업적 이용이 가능하다고 판단된다.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2002년도 가을 학술발표논문집
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• pp.116-117
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• 2002

보존온도별(5, 25, 35$^{\circ}C$)로 정액과 희석액의 비율(1：1, 1：2, 1：3)을 달리하여 보존시간(1, 3, 6시간)에 따른 정자운동성을 조사한바, 5$^{\circ}C$ 냉장 온도에서는 희석배율에 따른 보존시간별 정자운동성은 차이가 없었으나, $25^{\circ}C$ 상온에서 6시간, 35$^{\circ}C$ 고온에서 3시간 이상 보존할 때 정액과 희석액의 비율이 1：1보다는 1：2 비율에서 정자운동성이 현저히 높게 유지되었다(P<0.05). 온도가 높을수록 1：1 배율보다는 1：2 이상 희석배율을 높여 주었을 때 정자의 운동성을 높게 유지시킬 수 있었다. Skim milk glucose액을 사용하여 닭 정액을 희석한 후 인공수정 하였을 때, 1회 주입정자수를 0.2, 0.4, 1 및 2억으로 하였을 때 각각 90.67, 94.00, 96.00 및 98.67%의 수정율을 나타냈다. 90%이상의 수정율을 얻기 위해서는 0.2억 이상의 정자 주입이 필요하며, 94%이상 안정적인 수정율을 얻기 위해서는 0.4억의 정자가 필요하다고 판단된다.