Naegleria fowleri로 면역된 마우스 비장세포를 이입(이입)함으로써 원발성 아메바성 수막 뇌염의 발생을 방어할 수 있는지 즉 방어면역을 피동적으로 전달할 수 있는지를 관찰하였다. 무균 배양한 N. fowleri, ITMAP 359 영 양형 7×l04개를 생후 6주된 ICR 마우스에 감염시켰다. 살아있는 N. fowleri 영양형 106개씩을 1주일 간격으로 3회 복강내로 주입시켜 면역시켰다. 면역시킨 마우스의 비장을 적출하여 107개의 비장세포가 함유된 부유액을 마우스 복강내로 주입시키고 3일 후 N, fowleri를 감염시켰다. 비장세포에 Con. A와 lipopolysaccharide(LPS)를 처리한 후 배자발생 정도를 methyl-[3H]-thymidine을 사용하여 측정하였다. N. fowleri를 감염시킨 마우스의 사망률을 보면 정상 비장세포를 주입시킨 실험대조군에서 84%, 면역 비장세포를 주입시킨 실험군에서 72%로서, 정상 대조군에서의 사망률 100%에 비해 낮음을 알 수 있었다. 면역된 비장세포를 주입시킨 실험군에서 LPS를 처리한 비장세포의 배자발생정도는 감염 7일 후 실험대조군이나 정상대조군에 비해 증가되어 있었고, Con. A처리에 의한 배자발생 정도도 감염 7일 후 증가되어 있음을 관찰할 수 있었다. 혈청내 항체가는 감염 12일 후 정상 대조군에 비해 실험군과 실험대조군에서 높았다.
본 연구에서는 아토피 피부염 동물 모델인 NC/Nga mice에 실크단백질 sericin과 fibroin을 식이 공급 후 피부의 세라마이드 함량 및 관련인자 발현 변화를 정상대조군인 BALB/c mice 및 아토피 피부염 대조군과 비교 분석하였다. 세라마이드 함량은 아토피 대조군인 CA군이 정상대조군 C군보다 현저히 낮았으나, 정제된 건조 분말을 별다른 처리 없이 그대로 실크단백질 sericin을 식이공급한 S군은 정상대조군인 C군 이상의 수준으로 높였으며, 실크단백질 fibroin(F군)은 세라마이드 함량을 정상대조군 수준이상으로 올려주지는 못하였다. 세라마이드 합성효소인 SPT의 mRNA 및 protein 발현은 아토피 대조군인 CA군은 정상대조군인 C군보다 높았으나, 실크단백질 공급군인 S군 및 F군은 모두 정상대조군 C군보다 현저히 낮았다. 반면, 세라마이드 분해효소인 ceramidase의 mRNA 및 protein 발현은 아토피 대조군인 CA군은 정상대조군인 C군보다 높았으나, 실크단백질을 식이섭취한 S군 및 F군에서는 정상대조군인 C군과 유사한 수준으로 CA군에 비해서는 유의적으로 낮았다. 결론적으로 실크단백질 sericin의 10주간 식이섭취는 아토피 피부염 동물모델 NC/Nga mice 표피의 세라마이드 함량을 정상대조군 수준 이상으로 증가시켰으며, 궁극적으로 표피의 장벽기능을 정상대조군의 수준으로 변화시켰다. 이는 serine이 다량 함유되어있는 실크단백질 sericin을 공급에 의해 증가되었는데, serine은 그 자체로서 보습기능을 하여 표피의 장벽기능을 보완하였기 때문에 SPT에 의한 생합성은 불필요하였으며 또한, ceramidase에 의한 세라마이드 분해를 정상수준이하로 억제하여 세라마이드의 생성보다는 분해억제에 의한 것으로 여겨진다.
본 연구는 생체 내 세포 및 조직배양기로서의 면역결핍동물을 개발할 목적으로 proximal lck promoter와 DT-A gene를 이용하여 형질전환생쥐을 생산하고 이 형질전환생쥐의 면역세포에서 DT-A gene이 발현되는지를 분석하였다. 형질전환생쥐와 정상생쥐로부터 thymus, spleen 및 liver에서 RNA를 추출하여 RT-PCR수행하였는데 정상생쥐의 조직에서는 어떠한 DT-A gene의 발현양상을 얻을 수 없었으나 형질전환생쥐의 thymus, spleen, liver에 DT gene의 발현을 확인할 수 있었고, Northern blotting을 이용하여 형질전환생쥐의 thymus, spleen 및 liver에서 DT-A gene이 강하게 발현되는 것으로 나타났다. 형질전환생쥐 $F_1$ 및 $F_2$ 산자의 혈액에서 T-cell 발달의 분포도를 확인하기 위해 CD4 및 CD8 antibody를 이용하여 FACS analysis를 실시하였는데 형질전환생쥐의 혈액 내 mature T-cell인 single positive thymocyte의 수가 정상생쥐에 비해 감소하는 경향을 나타냈다. 정상생쥐의 혈액 내 T-cell 중 $CD8^{+}$ T-cell의 경우 약 50%를 나타냈으나 형질전환생쥐의 경우 33%로 감소하였고, $CD4^{+}$ T-cell은 정상생쥐에서 10%를 차지하고 있으나 형질전환생쥐에서는 5.9%로 감소되는 것으로 분석되었다. 그러므로 본 연구의 형질전환생쥐에서 lck promoter에 의해 초기 immature한 상태의 T-cell에서 DT-A gene이 발현되어 발육중인 T-cell이 파괴 되어 mature 상태인 $CD4^{+}CD8^{-}$나 $CD4^{-}CD8^{+}$ cells (single-positive)들이 감소된 것으로 확인되었다.
NFI-C는 정상적으로 상아모세포, 골모세포에 존재하며, NFI-C가 결손된 경우 치근상아질을 형성하는 상아모세포의 분화에 이상이 있다고 알려져 있다. 본 연구는 NFI-C (-/-) 생쥐에서 치관 및 치근의 상아질을 형성하는 상아모세포의 표현형을 상아모세포에 특이적으로 발현하는 DSPP와 골모세포에 특이적으로 반응하는 BSP 유전자를 이용한 in-situ hybridization을 통하여 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. NFI-C (-/-) 생쥐의 구치에서 치관 상아질은 정상적으로 형성되었으나 치근 상아질은 형성되지 않았다. 2. NFI-C (-/-) 생쥐의 하악 절치의 순측 상아질은 비교적 많이 형성되었으나, 설측의 상아질은 형성되지 않았다. 3. NFI-C (-/-) 생쥐의 하악 절치의 상아모세포는 형태가 변화되었으며, 형성된 상아질 내에 세포가 함입되는 양상을 보였다. 4. NFI-C (-/-) 생쥐의 구치에서 치관부위의 상아모세포에서는 DSPP가 강하게 발현되었으나, 치근부위의 상아모세포에서는 발현되지 않았다. 또한 NFI-C (-/-) 생쥐에서 절치의 순측 상아모세포에서는 DSPP가 약하게 발현되었다. 5. 정상 생쥐에서 절치의 상아모세포에서는 BSP가 발현되지 않았으나 NFI-C (-/-) 생쥐에서는 BSP가 강하게 발현되었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 NFI-C가 결손된 경우 상아모세포가 골모세포로 분화되는 표현형의 변화를 보이는 것으로 사료된다.
HIV와 유사하게 retro virus의 일종인 Friend virus of Anemia strain (FVA)을 BALB/c mice 에게 감염시 reverse transcriptase 의 활성에 의해 비장의 erythroid progenitor cell 에서 증식되므로서 비장의 비대 및 빈혈을 초래하게 된다. 이를 지표로 하여 reverse transcriptase 억제작용을 지닌 항 virus 약물을 천연성분으로 부터 검색하고자 하였다. 우선, 대조약물로 사용한 기존의 항 AIDS 약물인 zidovudine (AZT) 을 FVA 가 감염된 BAB/c mice 에게 18일간 투여시 (약 100 mg/kg/day, p.o. ) 대조군에 비해 비장의 비대 및 reverse transcriptase 활성이 90% 이상 억제되었으며, 이들의 혈청을 정상 BALB/c mice 에게 재투여시에도 유사한 결과를 나타내어 reverse transcriptase 를 억제하므로서 항 virus 작용을 나타낸다는 것을 입증하였다. 그러나, 혈액중 Hemoglobin등 빈혈의 지수는 대조군과 유사한 수치를 나타내므로서 정상으로 회복되지를 못하였다. 이것은 zidovudine 자체가 지니는 골수억제에 의한 부작용 때문인 것으로 고려된다.
본 실험은 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)의 항스트레스효과를 조사하기 위하여 시행되었다. 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)이 전기자극으로 스트레스 상황을 유발시킨 mouse에게 끼친 B 임파구 면역계 변화를 mouse 혈청의 면양적혈구(綿羊赤血球)에 대한 적혈구 응집소가와 비장세포에서 B 세포 및 T 세포가 차지하는 백분율의 변화를 통하여 측정하였으며 이를 대조군과 비교 분석하였다. 혈청 항체가의 측정에서 스트레스 자극하에서 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)을 투여받은 그룹에서 약제를 투여받지 않은 그룹에 비하여 유의성 있는 차이를 보여(p<0.01) 면역 기능을 정상군의 수준으로 유지하는 결과를 얻었다. T 세포와 B 세포의 백분율의 측정에서도 스트레스 자극하에서 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)을 투여 받은 그룹에서 약제를 투여 받지 않은 그룹에 비하여 유의성 있는 차이를 보여(p<0.01) 면역 기능을 정상군의 수준으로 유지하는 결과를 얻었다. 실험결과들로 보아 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)이 체액성 면역 반응과 비장 내 면역 세포의 백분율을 정상의 수준으로 유지하는 효과를 보여 면역 기능의 이상에 응용할 수 있는 가능성을 제시한다고 사료된다.
정상 마우스와 Cyclophosphamide(CY)로 처리된 마우스에 Royal Jell(RJ)를 투여하여 면역계에 미치는 영향을 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 정상 마우스에 RJ를 투여하였을 때는 대조군에 비하여 마우스의 체중, 비장, 흉선 , WBC 수 , DNFB에 대한 접촉성 과민 반응으로 측정된 세포성 면역반응 및 면양 적혈구에 대한 응집가와 용혈가로 측정된 체액성 면역 반응이 투여일에 따라 증가 또는 감소되었고, RBC수와 간 중량은 영향을 받지 않았다. 2. 증가 작용을 보여준 투여일에 RJ를 병용 투여함으로써, CY 처리로 인한 마우스의 생존율, 비장의 중량 , WBC수 및 세포성 면역 반응의 감소가 약간 억제되었으나, CY를 감소된 흉선의 중량 및 체액성 면역반응에는 영향을 나타내지 않았다.
본 연구는 칡청국장 및 칡청국장 캡슐함유 식이가 체중, 지방축적, 지질대사 등에 미치는 효능을 알아보기 위하여 선천성 비만 및 인슐린 비의존성 당뇨병의 모델동물인 ob/ob 마우스를 대상으로 정상대조군(NC: 일반식이군), 양성대조군(PC: 2% 청국장함유군), 칡청국장 2% 함유군(AR: 2% 칡청국장), 칡청국장 캡슐군(ARC: 2% 칡청국장 캡슐함유)으로 나누어 10주간 실험하였다. 체중 및 식이효율은 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 감소하였다. 혈청 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 중성지방, 혈당 및 동맥경화지수는 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 감소하였다. 칡청국장 캡슐군에서 지방간의 전형적인 지방축적의 억제효과를 보였다. 간조직의 SOD, CAT, GST 활성은 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. 이에 칡 추출물 청국장 및 캡슐형태의 투여는 지방함량의 저하효과, 혈당강하효과, 항산화계의 활성도 증가 등의 효과를 통하여 항비만기능이 있으며, 칡청국장 캡슐형의 기능성이 높다는 사실을 확인할 수 있었다.
한국산 마(Dioscorea batatas DECENE, Yam)에서 점질물(mucilage)의 fraction 1, 2를 분획하여 6주령의 ICR 마우스에게 당 부하 검사(glucose tolerance test)를 실시한 결과 마 점질물 fraction 1이 마 점질물 fraction 2에 비해서 더 나은 효과를 나타내었기 때문에 마 점질물 fraction 1을 시료로 채택하여 6주령의 ICR 마우스에게 Alloxan으로 당뇨를 유발시킨 후 10일간 경구 투여를 실시하고 식이 섭취량 및 체중의 변화를 관찰하고 혈액중의 포도당 농도와 혈청과 간장 중의 지질 성분과 각종 장기의 무게 변화를 측정한 결과는 다음과 같았다. 식이 섭취량은 당뇨대조군과 마점질물투여군이 정상대조군에 비해 거의 2배에 가까운 식이 섭취량을 보였다. 체중의 변화는 정상대조군과 당뇨대조군은 증가한데 반해 마점질물 투여은 유의적으로 체중이 감소하는 경향을 보였다 공복시 혈중 포도당 농토는 시료 투여 직전에 정상 대조군은 $68.00{\pm}6.04\;mg/dL$였으며, 당뇨 대조군과 시료 투여군은 $400.50{\sim}403.50\;mg/dL$였다. 당뇨 대조군의 경우 시료 투여 첫째날부터 종료시까지 고혈당을 유지하였으며, 마점질물 투여군에서는 실험기간 5일째까지는 당뇨 대조군에 비해 혈당이 감소하지 않았지만, 시료투여 10일째에 마점질물투여군은 당뇨대조군에 비해 낮은 혈당치를 나타내었다. 혈액중 중성지방농도는 당뇨 대조군이 정상 대조군에 비해 약 1.7배 정도 유의적으로 높았다. 마점질물투여군은 당뇨 대조군에 비해 중성지방의 농도가 유의적으로 감소하였다. 비장의 무게는 y500F1군이 당뇨 대조군에 비해 유의적으로 감소하였다. 이상에서 마점질물 fraction 1을 Alloxan 유발 당뇨 마우스에 투여하였을 때 체중의 감소 및 혈중 포도당과 중성지방농도를 감소시키는 경향을 나타내어 당뇨병에 대한 개선 효과를 위한 기능성 식품으로서의 개발 가능성이 높다고 사료된다.
Naegleria fowleri로 면역시킨 마우스의 혈청이나 비장세포를 다른 마우스에 주입시켜 N. fowleri 감염에 대한 면역효과가 나타나는지 살펴보았다. 또 어미 마우스를 N. fowleri로 면역시 킨 다음 면역시키지 않은 어미에서 태어난 새끼 마우스에게 면역시킨 마우스의 모유를 먹게한 뒤 모유를 통한 면역 효과의 전달 여부를 관찰하였다. 면역시킨 마우스의 비장세포나 정상 마우스의 혈청을 다른 마우스에 주입시킨 경우 감염 후 사망률이 감소하였으나 혈중 IgG는 증가되지 않았다. 한편, 면역시킨 마우스의 혈청이나 정상 마우스의 비장세포를 준 경우 혈중 보G가 증가되고 감염 후 생존 기간은 연장되었으나 결국은 모든 마우스가 사망하였다. 즉 면역시킨 마우스 또는 정상 마우스의 혈청이나 비장세포를 다른 마우스에 주입시키면 사망률이 감소되거나 생존 기간이 연장됨을 알 수 있었다. 또 면역시킨 어미 마우스의 혈중, 모유 내, 또는 그 모유를 먹은 새끼 마우스의 혈 중에서, N. fowleri에 대한 IgG는 증가되었으나 IgA는 증가하지 않았으며 증가된 항체도 감염 후 의 사망률이나 생존 기간에는 큰 영향을 주지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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