• 미생물학회지
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• 제26권1호
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• pp.32-36
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• 1988

The yeast gene HOM3 encodes aspartokinase, which catalyses the first step (aspartate to and from beta-aspartyl phosphate) of common pathway to threonine and methionine. The yeast HOM3 gene expression is known to be regulated by threonine and methionine specific control, and also by general control of amino acid biosynthesis. Isolation and characterization of the HOM3 gene are essential for the molecular genetic study on its regulation of expression. A recombinant plasmid pSC3 (15.5kb, vector YCp50) has been cloned into E. coli HB101 from yeast genomic library through their complementing activity of HOM3 mutation in a yeast recipient strain M34-24B. Organization of the plasmid was characterized by delineation of restriction cleavage sites in the insert fragment.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권3호
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• pp.253-257
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• 1997

The secE gene of Streptomyces lividans TK24 was cloned by the polymerase chain reaction method with synthetic oligonucleo- tide primers designed on the basis of the nucleotide sequences of Streptomyces coelicolor secE-nusG-rplK operon. The deduced amino acid sequences of the SecE were highly homologous to those of other known SecE protein, that is 36.8%, 30.4%, 80.0%, and 80.9%, similarity to E. coli, Bacillus subtilis, Streptomyces griseus, Streptomyces virginiae SecE, respectively and exactly same with Streptomyces coelicolor SecE. It means that in spite of evolutionary differences, the genes for protein translocation machinery are highly conserved in eubacteria. The gene organization of secE-nusG-rplK is also similar to that of E. coli, B. subtilis, and streptomycetes.

• 미생물학회지
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• 제22권4호
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• pp.229-234
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• 1984

A modified E. coli trp operon, $trpL({\Delta}att)\;trpE^{FBR}$, was conjugally transfered into Klebsiella pneumoniae $KC_{100}\;(Phe^-,\;Tyr^-,\;Trp^-,\;Rif^r,\;Kam^r)$ by in vivo cloning using the hybrid plasmid $R_{6}K::$ Mucts 61 with a transfer frequency of $5.2{\times}10^{-7}$. Two K. pneumoniae transconjugants, $KUA_{701}\;and\;KUA_{702}$, were isolated. The characters of attenuation control-free and resistance to feedback-inhibition which are characteristics of donor C. coli trp operon were normally expressed in the $KUA_{701}.\;However,\;KUA_{702}$ retained only the feedback-inhibition resistant character. $Trp^+$ phenotype and ampicillin resistant character were completely stable in the transconjugants, but streptomycin resistant character was lost in the transconjugants.

• 미생물학회지
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• 제29권4호
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• pp.203-208
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• 1991

The dapA-complementing gene (L-2, 3-dihydrodipicolinate synthetase: DHDP synthetase, dapA) has been cloned by using a cosmid genomic bank of Corynebacterium glutamicum JS231 that is a lysine overproducer, AEC (s-(2-aminoethyl)-L-cysteine) resistant mutant. By enzymatic deletion analysis, the DNA region complementing the escherichia coli dapA host could be confined to 4.5kb SalI-generated DNA fragment. This DNA fragment was inserted into the C. glutamicum/E. coli shuttle vector pECCG117 to construct pDHDP5812. The specific activity of DHDP synthetase detected in C. glutamicum JS231/pDHDP5812 was increased about 10 fold above that of C. glutamicum JS231. The addition of leucine during growth did not repress the expressin of dapA, and the enzyme activity was not inhibited by lysine.

• 한국초지학회:학술대회논문집
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• 한국초지조사료학회 2005년도 학술심포지엄, 제43회 학술발표회
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• pp.214-215
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• 2005

• 한국잠사곤충학회지
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• 제52권1호
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• pp.45-51
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• 2014

면역 유도된 천잠(Antheraea yamamai) 유충에서 cecropin-A 유전자를 분리하였고 이 유전자를 Ay-CecA로 명명하였다. 전체 Ay-CecA cDNA 크기는 419 bp로 64개의 아미노산 잔기를 인코딩하는 195 bp ORF로 구성되어 있다. 천잠 CecA 유전자는 22개 잔기의 signal peptide, 4개 잔기의 propeptide 및 항균활성을 갖는 37개 잔기로 구성된 성숙 단백질(mature protein) 영역으로 구성되고 예상 분자량은 4046.81 Da으로 산출되었다. 천잠 CecA의 아미노산 서열은 다른 나비목 곤충에서 분리된 cecropin와 매우 높은 상동성(62 ~ 78%)을 나타냈다. Ay-CecA 유전자의 C말단에 기존에 보고된 곤충의 cecropin에서와 동일하게 C말단 아미드화를 위한 glycine 잔기가 존재하고 있다. 이 펩타이드의 항균활성을 검정하기 위해서 대장균 발현 시스템을 이용하여 활성이 있는 재조합 Ay-CecA 발현에 성공하였다. 발현 기주인 대장균에 대한 재조합 CecA 독성 중화를 위해서 불용성 단백질인 ketosteroid isomerase(KSI) 유전자를 CecA 유전자와 융합하였다. 융합 CecA-KSI 단백질은 대부분 불용성 단백질로 발현되었다. 발현된 융합단백질은 Ni-NTA immobilized metal affinity chromatography(IMAC)에 의해서 정제하였으며 CNBr 반응을 통하여 재조합 CecA를 절단하여 용출하였다. 최종적으로 양이온 교환 chromatography 과정을 통하여 CecA를 순수 정제하였다. 정제된 재조합 Ay-CecA는 그람음성균인 E. cori ML 35, Klebsiella pneumonia 및 Pseudomonas aeruginosa에 대해 매우 높은 항균활성을 나타냈었다. 따라서 본 연구 결과, 높은 항균활성 지닌 CecA는 천잠의 면역 반응에서 중요한 역할을 담당할 것으로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권4호
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• pp.313-319
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• 1995

본 실험은 알팔파(Medicago sativa) 근류균인 Rhizobium meliloti TAL1372 균주에서 섬유소분해효소의 활성을 확인하고 이 유전자를 크로닝하기 위해 코스미드 벡타인 pLAFR3를 사용하여 유전자 은행을 만들었다. 이 유전자 은행으로 부터 분리한 1,000개의 형질 도입체에서 CM-cellulase(carboxymethylcellulase) 활성이 있는 클론(pRC8-71) 하나를 분리하였으며 30kb 크기의 R. meliloti DNA 단편을 함유하고 있는 것을 확인하였다. 이 CM-cellulase 유전자의 발현 산물을 native PAGE 법에 의하여 분자량을 측정한 결과 약 45kD 정도의 크기로 추정되었으며 pRC8-71로 부터 Tn5 변이법에 의해 조사한 결과 30kb 단편 내에서 CM-cellulase 유전자의 위치는 제한효소 KpnI에 의해 절단되는 약 3kb 단편에 존재하였다. 표시교환 변이법에 의해 야생균주 R. meliloti TAL1372로부터 cellulase 무생산 변이체를 얻어 근류형성 정도를 실험한 결과 CM-cellulase유전자가 근류형성에 관련될 것으로 추정되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제45권3호
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• pp.226-235
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• 2017

Phytoene, lycopene, ${\beta}-carotene$과 같은 카로티노이드는 식품의 착색제나 영양보조제, 사료첨가제, 화장품의 원료로 사용된다. 이전 연구에서 본 연구진은 분홍색의 색소를 생산하는 새로운 해양 세균인 K. gwangalliensis를 분리 동정하였다. Phytoene desaturase (CrtI) 효소는 crtI 유전자에 암호화되어 있으며, phytoene을 lycopene으로 전환하며, 카로티노이드 합성 초기 단계에 있어서 필수적이다. CrtI는 카로티노이드 생합성 조절의 주요 효소 중 하나이며, 다양한 카로티노이드를 생합성하는 생물들의 카로티노이드 생합성 경로에 있어서 속도 조절 단계에 관련이 있다. 본 논문에서는 K. gwangalliensis로부터 lycopene 생합성을 담당하는 crtI 유전자를 클로닝 하였으며, 이 유전자는 1,584개의 염기서열을 가지며, 527개의 아미노산을 암호화하고 있다. crtI 유전자의 염기 서열을 Kocuria rhizophila와 Myxococcus xanthus를 포함한 다른 종의 염기 서열과 비교한 결과, 진화 과정에서 잘 보존되어 있음을 확인하였다. crtI 유전자를 포함하는 발현 플라스미드를 구축하여 발현시킨 결과, 이 플라스미드를 함유하는 대장균은 약 57 kDa의 재조합 단백질을 생산화였으며, 이는 phytoene desaturase의 분자량에 해당한다. lycopene의 생합성은 lycopene 생합성에 필요한 crtE, crtB 유전자를 포함한 pRScrtEB plasmid를 E. coli에 형질전환 했을 때, Escherichia coli에서 합성되는 것을 확인하였다. 이 연구의 결과는 분자 수준에서 K. gwangalliensis CrtI의 1차 구조에 대한 폭 넓은 지식 기반을 제공할 것이다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제60권2호
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• pp.187-193
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• 2006

배 경 : 결핵균의 성장 속도가 늦은 이유가 mammalian cell이나 대장균에 비해 결핵균 AK의 매우 낮은 활성도에 의한 것이라는 추측으로부터 AK1과 유사한 촉매능을 나타내는 AKmt 돌연변이 유전자와 human muscle-type AK 합성 유전자(AK1)를 각각 Mycobacterium/E.coli 발현벡터에 재조합(pMVAKmtDM, pEMAK1)하여 성장 속도가 매우 느린 BCG에 형질전환함으로써 이들 단백질들의 촉매능에 의한 성장 속도 변화가 일어나는지를 확인하고자 하였다. 방 법 : Human AK1의 촉매 활성도와 유사하도록 결핵균 AK (AKmt)유전자의 ATPbd와 LID domain을 돌연변이하여 제조한 유전자(AKmtDM)와 human muscle-type adenylate kinase 합성 유전자(AK1)를 Mycobacterium/E.coli 발현벡터에 클로닝하여 재조합 BCG를 제조하였고, 이들 재조합 BCG와 BCG Pasteur $1173P_2$ (wild-type)를 7H9 액체배지에 접종하여 2-3 일 간격으로 $A_{600}$ 값을 측정하였다. 결 과 : 재조합 BCG의 성장 속도는 Wild-type BCG의 성장 속도에 비해 변화가 없었다. 결 론 : 결핵균 adenylate kinase의 정확한 기능은 알 수 없으나, adenylate kinase의 촉매 활성도의 증가는 BCG의 성장 속도에는 영향을 주지 않는 것으로 판단된다.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2005년도 제22차 정기총회 및 학술발표회
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• pp.64-65
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• 2005

Pumilio 유전자는 생식 세포의 발달과 분화에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 우리는 이러한 Pumilio family인 Pum1, Pum2 유전자를 닭에서 클로닝하여 그 Pumilio homology domain의 구조와 단백질 염기서열이 초파리, 생쥐, 인간과 유사하다는 것을 밝혔고 이를 통해 이 유전자가 진화적으로 보존되어 있다는 것을 증명하였다. 또한 닭의 Pum1과 Pum2 genome 구조 역시 생쥐와 인간 Pum 유전자들의 구조와 일치하는 것을 보여주었다. Real-time RT-PCR 결과 닭의 배아의 여러 조직들 중 Pum1과 Pum2 유전자 모두 부화한 암컷 생식선에서의 발현 수준이 유의적으로 높았고, 특히 Pum2 유전자의 경우 부화한 병아리의 생식선뿐만이 아니라 12일령의 생식선에서도 발현 수준이 높았다. 결과적으로, 다른 동물에서 알려진 바와 같이 닭에서도 Pumilio 유전자들이 생식선 발달에 관여할 가능성이 크다는 것을 알수 있다.