Ferritin light heavy chain (FLHC) gene는 일부 중금속과 결합, 저장 및 운반하여 무독화 시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. Fe 관련 유전자인 FLHC유전자를 식물 발현용 promoter인 35S promoter와 Tnos를 사용하여 식물 형질전환용 vector를 재조합하였다. 식물세포형질전환용 binary vector는 상기 cassette vector가 조립이 매우 양호하며 border sequence를 가지고 있는 pRD400 binary vector를 사용하여 최종적으로 가나마이신 내성 유전자 (NPT II gene)와 tadpole ferritin heavy chain gene 및 human ferritin light chain gene를 함유하고 있는 binary vector를 재조합하였다. Binary vector의 아그로박테리움에 도입은 triparental mating 방법에 의하여 수행하여 AB배지 및 가나마이신 함유 배지에서 disarmed Ti-vector를 가지고 있는 Agrobacterium tumefaciens MP90/FLHC을 선발하였다. FLHC 유전자 도입된 식물형질전환용 binary vector를 이용하여 형질전환방법을 변형하여 많은 embryo를 유도하였으며 유도된 embryo들은 GA 10mg/L가 첨가된 배지에 지상부를 유도하였다. 형질전환체식물체의 정상적인 생장을 유도하기 위해 최적의 배양조건을 조사하였던 바, 비교적 1/3 MS배지에서 뿌리의 생장과 지상부의 생장이 균일하게 생장하는 경향을 보였으며, 뿌리와 줄기가 잘 발달된 약 7cm의 유식물체를 대량으로 증식하여, 모래와 흙이 1:1로 혼합된 토양에 옮겼다.
국내품종인 동진벼와 태백벼의 미숙접합자배 유래 배발생 현탁배양 세포의 초저온 보존 시스템을 개발하였다. 동결/해동 후 캘러스 재생률은 동진벼의 경우 2 M DMSO와 0.4 M sucrose를 태백벼의 경우 0.64 M DMSO와 0.4 M sucrose를 혼용처리하였을 때 캘러스 재생률이 각가 88%와 90%로 가장 높았다. 또한 고농도의 삼투용액에서 배양세포 의 전처리 과정은 필요하지 않았다. 재생된 캘러스를 1 mg/L NAA와 5 mg/L kinetin이 첨가 된 $N_{6 }$, 배지로 이식하여 명배양하였을 때 체세포배발생을 통하여 다수의 유식물체가 발달하였다. 약 100여개의 식물체가 재분화되었으며, 이중 25%는 albino이었다.다.
이병묘로부터 마이코플라즈마 무병주의 생산법을 확립하기 위하여 대추나무 시험관묘의 액아에서 생장점을 채취하여 기내접목을 실시하였다. 대목으로는 기내에서 발아시킨 대추나무 실생묘의 배축을 사용하였다. 접수중 10%(30점 중 3점씩 2회)가 정상적으로 생장하였고 계속적인 증식과 발근이 가능하여 유식물체로 분화되었다. 마이코플라즈마의 존재여부를 전자현미경과 형광현미경 검경방법을 이용하여 검경한 결과, 접수로 사용한 시험관묘에서는 마이코플라즈마가 관찰되었으나 접목묘에서는 관찰되지 않았다. 이로써 마이코플라즈마를 보균한 시험관묘의 생장점을 접수로 한 기내 미세접목을 통하여 건전묘 생산의 가능성을 보여주었다.
Protocorms were newly formed from the culture of axillary buds, obtained in the seedlings of Dendrobium moniliforme in vitro. Its formation ratio was calculated to 43.7% on MS medium containing 1.0 mg/L BA. To test their survival ratio, we gradually increased the inoculation of transplant populations from single to more than three, and then found that the ratio in three populations went up as high as 95.2% rather than those of one or two. In bioreactor, explant obtained from the axillary bud grew well in lower concentration as 1/4 MS medium, while clearly grew slow in a little bit high concentration as 1/2 MS medium. We found that the explant of axillary bud, obtained from the Dendrobium moniliforme seedlings, would grow five times after culturing in a bioreactor for six weeks in 1/4 MS medium.
Carrot seedling emgryos showing variations in cotyledon number were selected and anatomical comparisons of the embryo vascular systems were performed between the variants and normal two cotyledonary (5) embryos from 800 seedings germinated . Externally, all of the four and six cotyledonary embryos had two cotyledonary petioles. Each of the cotyledonary petioles divided into two or three on the upper part fo the petiole which result in four and six cotyledons, respectively. However, the embryos had three different cotyledonary petioles in the three cotyledonary embryos. On the basis of the pattern of vascular system, the four and six cotyledonary embryos had the same basic vascular system as fnormal two cotyledonary embryos, Therefore the cotyledon number abnormality could result from the branching split of the abnormally thickened upper part of the cotyledonary petiole. However, the three cotyledonaryembryos had a different vascular system from the normla two cotyledonary embryos. They could be regarded as different varieties form the two cotyledon embryos. All embryos observed had short cylindrical plumule sheath which formed by the fusion of the cotyledon bases. The presence of plumule sheath strontgly implied that the initiation of the cotyledons was not from the two localized primordia but from the circular proimordiu formed at the blobular stageof embryo, and it is not consistent with current views of cotyledon initiation. On the formation of the primary vascular system of carrot seedlings, it is suggested that the primary vascular system of the plumule was formed independently from that of the root-hypocotyle-cotyledon system.
지황 (R. glutinosa)의 조직절편으로부터 고효율의 식물체 재분화 시스템을 확립하기 위하여 기내에서 발아된 유묘의 잎을 절취하여 auxins과 cytokinins을 농도별로 단독 또는 혼합하여 MS배지에 치상한 후 신초의 형성율을 조사하였다. 잎 절편으로부터 부정아의 형성율은 1 mg/{\ell}\;BA와\;2mg/{\ell}$ IAA가 첨가된 MS배지에서 93.4%로 가장 높았다. 한편, 엽령에 따른 부정아의 형성율을 조사한 결과 기내에서 발아 후 6주가 지난 유식물체의 정단부위로부터 3번째의 잎을 사용함으로써 신초의 형성율을 98.4%까지 높일 수 있었다. 형성된 신초는 $0.1mg/{\ell}$ IBA가 첨가된 1/2MS배지로 옮겼을 때 4주 후 최대 발근율을 보여주었다.
황칠나무의 선발된 우량개체군의 집단재배시 우량해체간의 교잡에 의해서 형성된 종자를 증식하기 위한 기내배양체계를 확립하기 위해서 기내 발아, 증식, 발근에 적합한 식물생장조절제를 구명하기 위하여 본 실험을 실시한 결과는 다음과 같다. 황칠나무 종자의 무균발아에 적합한 배지로는 MS(Murasinge Skook)기본배지가 발아율이 높고 유식물체(plantlet)의 생장이 양호하여 알맞는 배지로 판단 된다. 기내에서 신초의 증식과 생육에 효과적인 식물생장조절제는 사이토키닌(BAP 0.1~l.0 mg/l)과 오옥신(NAA 0.5~1.0 mg/l)의 혼용처리가 효과적이었다. 또한 기내의 발근은 오옥신의 첨가에서 쉽게 유도되었으며, 그 중에서 NAA1.0 mg/l첨가에서 가장 양호하였다.
The purpose of this study is to clarify the relation of survival rates of seedling plants under grown orchardgrass populations and control by the difference cutting frequency. The orchardgrass populations investigated in this study have passed for 10 years after establishment. Cutting frequencies were 3, 4 and 5 times in a year. This experiment was conducted from April to October, 1989 at the experimental field of Institute of Agricultural Development, Yonsei University. The results are summarized as follows: 1. The survival rates of seedling plants decreased by the days after sowing. The final survival rates of seedling plants were 7.8%, 38.9% and 33.8% in 3, 4 and 5 cuttings, respectively. 2. Relative light intensity indicated highly possitive correlation with relative survival rates of seedling plants and negative correlation with plant length of orchardgrass populations in 4 and 5 cuttings. 3. The frequency distribution of survival seedling plants at 177 days after sowing were showed high values in seeding spots near the adjacent plants of 3 cutings, but in the middle of seeding spots between adjacent plants of 4 .and 5 cuttings, respectively. 4. The plant length of seedling became longer towards the seeding spots near the adjacent plants but the number of tillers increased slightly up to the middle of seeding spots between adjacent plants in all cutting frequencies.
엽록체 small HSP의 기능을 조사하기 위하여 벼로부터 분리한 엽록체 small HSP를 구성적으로 발현하는 형질전환 식물체를 제작하였다. 먼저 고온 스트레스 조건하에서의 형질전환 식물체의 내열성을 chlorophyll 형광으로 측정하여 분석하였다. Leaf disc를 고온 스트레스 조건에서 5분간 처리한 후, 광화학계 II의 불활성화를 나타내는 Fo 값과 증가치를 조사하였다. 형질전환 식물체는 고온 스트레스 하에서의 Fo 값의 증가가 현저하게 감소하였다. 또한 무균적으로 Petri dish에서 재배한 유식물체를 치사온도인 $52^{\circ}C$에서 45분간 처리한 후, $20^{\circ}C$ 에서 계속적으로 배양하였을 때, wild-type 식물체는 전부 고사하였으나, 형질전환 식물체의 약 80%는 정상적으로 생존하였다. 또한 과발현된 Oshsp26 단백질의 축적량이 많을수록 내열성의 정도도 증가하였다. 이러한 결과는 엽록체 small HSP가 고온 스트레스 하에서 광합성기구를 보호함으로서 식물체의 내열성을 증가시키는데 있어서 중요한 기능을 담당하고 있음을 나타낸다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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