• Journal of Plant Biology
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• 제37권2호
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• pp.183-193
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• 1994

인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)의 뇌두 캘러스로부터 분리한 원형질체와 배양된 원형질체의 미세구조 변화와 원형질막 표면을 투과 및 주사전자현미경으로 조사하였다. 분리 직후의 원형질체에서는 캘러스세포에서보다 작은 액포들이 많이 형성되어 있었다. 또한 활면소포체의 수가 증가하였으며 이들은 원형질막과 평행으로 배열하였다. 활면소포체는 가끔 세포질을 둘러싸서 세포질분리체(cytosegresome)를 형성하였고, 이 구조는 세포질을 분해시킨 후 액포로 변화하기도 하였다. 배양된 원형질체에서는 분리 직후의 원형질체와 비교하여 조면소포체, 딕티오좀, 리보좀, 미토콘드리아, proplastid 및 액포 등의 수가 현저하게 증가하였다. 딕티오좀으로부터 많은 소낭들이 형성되었고 이들은 세포질 전반에 걸쳐 존재하였다. 때로는 소낭들이 원형질막 바깥으로 돌출되어 돌기를 형성하기도 하였다. 배양된 원형질체의 표면에는 섬유소로 구성되어 있을 것으로 추정되는 섬유상 구조들이 형성되어 있었다.

• 미생물학회지
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• 제23권4호
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• pp.265-270
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• 1985

Brevibacterium flavum과 Corllnebac ter ium glutamicum세포로부터의 원형질쳐l 형성과정, 형성된 원형질체의 미세구조, 이들 원형질체간의 융합 및 세포벽 재생을 투과전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형질쳐1의 형성과 정은 특이하게 관찰되었다. 즉, penicillin G와 lysozyme의 작용을 받아 세포벽의 한 부위가 파괴되어 생긴 細孔응 통하여 원형질이 빠져나가 구형의 원형질체를 형성하였닥 융합과정에서는 원형질체들이 서로 접촉하여 접촉부꾀 를 형성하고 이어서 이 부위의 셰포막이 얼부 소실되며 양 원형질쳐1간에 내부의 울질들이 이동하였다 융합 원 행질체들은 비융합 원형질체에 비하여 세포벽의 재생이 다소 더디게 일어나는 것으로 관찰되었으며, 융합 원형질 쳐l들이 비융합 원형질체들 보다 그 크기가 월등히 컸다.

• 미생물학회지
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• 제25권4호
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• pp.274-281
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• 1987

Candida pseudotropicalis의 영양요구성 돌연변이 균주들에 대한 원형질체 형성, 재생 그리고 융합에 있어서 bovine serum albumin (BSA), myoinositol 그리고 ergosterol의 증진효과를 연구하였다. 원형질체 형성율은 영양요구성 균주의 type에 따라 48%-98%였다. O. 5mg/ml의 myoinositol과 0.1mg/ml의 ergosterol을 배양액에 첨가하고 4mg/ ml의 BSA을 원형 질체 형성 완충용액에 첨가했을 때는 50~100%의 원형절체 형성윷을 얻었다. 영양요구성 균주의 생장배지에 myoinositol과 ergosterol을 동시에 첨가하고 원형질체 형성 완충용액에 BSA를 침가하면 2.2-3.0애의 원형질체 재생율 증진을 보여주었다. 원형질체 융합의 최적조건에서 상보적 영양요구성 균주간의 융합율은 $7.0\times 10^{-4}$ ~ $1.5\times 10^{-3}$ 이였으며 상기화합물을 처리하지 않고 얻은 융힐l율과 비교해서 1. 9-2. 3배의 증가를 보였다. 이러힌 결과로 본 연구에서 사용된 균주들에서는 상기화합물 처리 에 의해 원형질체 재생은 물론 세포융합율도 증진됨을 알 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.175-179
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• 1986

Cellulose분해력이 높은 Cellulomonas flavigena NCIB 12901의 원형질체 융합을 위한 원형질체의 형성조건을 조사하여 본 결과 배양기간에 따라 원형질체의 형성율이 매우 달라져 대수증식기 말기보다는 중기때의 세포를 lysozyme처리하는 것이 더 효율적이며 lysozyme 400$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ 농도로 6시간처리 하여 95% 이상이 형성됨을 관찰할 수 있었다. 또한 원형질체 형성확인법으로 osmotic shock에 의한 원형질체 계수법은 spheroplast의 형성과 원형질체의 형성이 구별되어 지지 않으므로 그 결과가 전자현미경상으로 직접 관찰된 결과와 일치하지 않는 경우가 있어 전자현미경으로의 관찰이 뒤따라야 하는 것을 알 수 있었다.

• 한국균학회지
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• 제14권2호
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• pp.165-174
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• 1986

본 실험은 Aspergillus niger의 원형질체 형성, 환원 및 융합 조건을 조사하였으며 아울러 융합 빈도를 높이기 위한 방법을 모색하였다. A. niger에 자외선 $(9.9\;erg/mm^2)$을 13분간 조사하여 영양요구성 변이주 및 형태 변이주를 유도, 분리하였다. 균사체 배양 시간에 따른 원형질체 형성량은 21시간 배양한 균사체에서 최대치를 나타내었다. 세포벽 분해효소인 driselase는 1%농도로 3시간 처리했을 때 가장 효과적이였으며 osmotic stabilizer로는 0.6M KCI과 0.6M $NH_4Cl$이 가장 좋았다. 효소 반응 시간에 따라 형성된 원형질체는 크기와 액포 함유량에 있어 불균일성을 나타내었다. 원형질체의 환원률은 0.6M KCI이 침가된 pH 5.0의 배지에서 가장 높았다. 세포벽 분해효소의 반응시간에 따라 형성된 원형질체의 환원률은, 3시간 반응시켜 형성된 원형질체에서 8.0%, 1시간 반응시킨 것에서 15.3%였다. 영양요구성 변이주간의 원형질체 융합에 필요한 PEG (M.W. 6,000)의 최적 농도는30%였으며 $CaCl_2$의 농도는 $1{\sim}50\;mM$에서 비슷한 최대 효과를 나타내었다. 융합 반응의 최적 pH는 8.0, 최적 반응 시간은 10분이었다. 효소 반응 시간에 따라 형성된 원형질체간 융합률은 차이를 보여, 3시간 반응시켜 형성된 원형질체를 사용했을 때 $0.06{\sim}0.42%$, 1시간 반응시킨 것을 사용했을 때 $0.09{\sim}0.54%$였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권3호
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• pp.311-314
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• 1985

Novozym 234를 사용하여 Ganoderma lucidum의 원형질체 형성 및 재생 실험을 실시하였다. 원형질체 형성에는 Mannitol을 위시한 여러 가지 삼투압 조절제를 사용하여 $10^{6}$$m\ell$의 원형질체 형성이 가능하였다. 재생 실험에서는 Inositol과 Sucrose를 삼투압 조절제로 하여 0.26%까지의 재생율을 얻을 수 있었으나 MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$는 재생용 배지의 삼투압 조절제로서는 부적합하였다. 재생 실험에서는 Bacteria등의 오염을 억제하기 위하여 Streptomycin sulfate를 첨가한 배지를 overlay 하였다.

• 한국균학회지
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• 제21권1호
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• pp.1-8
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• 1993

Phytophthora capsici에서 원형질체를 형성, 재생 시키는데 관여하는 요인에 대해 조사연구하였다. 삼투압조절제로서 0.35 M $CaCl_2$가 첨가된 Novozym 234를 6-9시간 처리하면 균사체에서 원형질체가 양호하게 나출되었다. 24시간 배양한 어린 균사체에서 가장 많이 원형질체를 나출시킬 수 있었으며, 또한 Novozym 234의 농도가 진할수록 효과적으로 원형질체가 나출되었다. 원형질체를 재생시키는데는 0.4 M mannitol과 0.1 M $CaCl_2$를 혼합한 것이 삼투압 조절제이었다. 원형질체의 재생률은 모든 영양소가 첨가된 Henninger 합성배지에서 가장 높았다. 아미노산이나 ${\beta}-sitosterol$은 원형질체의 재생에 영향을 미쳐 두 영양소가 빠지면 원형질체의 재생이 억제되었다. 특히 아미노산 중 L-aspartic acid와 L-glutamic acid는 원형질체의 재생을 촉진시켰다. 그러나, 미량원소는 원형질체의 재생에 영향을 주지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권4호
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• pp.377-382
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• 1985

이속 효모간 원형질체 융합에 의해 새로운 알콜발효 균주를 개발하기 위한 전단계로서, Arthro-bacter luteus에서 얻은 zymolyase 5,000을 세포벽 분해효소로 사용하여 전분분해 효모인 C. tropicalis, E. fibuligera 및 알콜발효 효모인 S. cerevisiae 등의 원형질체 형성조건에 대하여 검토하였다. 원형질체 형성의 최적 pH와 온도는 각각 pH 7.5와 35$^{\circ}C$였다. 또한 원형질체 형성에 대한 2-mercapto-ethanol의 효과는 50mM농도에서 가장 좋았으며 삼투압 안정제로는 0.6M KCl이 적당하였다.

• 미생물학회지
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• 제22권1호
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• pp.49-56
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• 1984

Novozym 234에 의한 K. fragilis와 C. pseudotropicalis의 원형질체 형성과 재생에 관한 연구를 하였다. intact cell을 원형질체로 전환시키는데 정지기의 세포보다 대수기에 있는세포가 효과적이었으며 osmotic stabilizer로는 $(NH_4)_{2}SO_4$가 두 종 똑같이 원형질체 형성이나 재생에 있어서 적합했고 최적 효소농도는 K. Fragilis에서는 3mg/ml, C. pseudotropicalis에서는 1~3mg/ml이었다. 반응 후 관찰된 세포 중의 원형질체 형성 수율은 K. fragilis에서 약 95%, C. pseudotropicalis에서 약 100%였으나 원형질체의 재생은 Glusulase와 비교해 볼 때 매우 낮았다. 그러나 세포 이물질이 없는 원형질체를 얻는데는 Novozym 234가 적합한 것 같다.

• 미생물학회지
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• 제24권2호
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• pp.154-160
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• 1986

Cellulose분해력이 높은 Cellulomonas속 세균의 원형질체 융합을 위한 원형질체 형성조건을 조사하여 본 결과 같은 Cellulomonas 속인 Cellulomonas sp. C S 1- 1과 Cellulomonas flavigena NCIB 12901 균주일지라도 그 형성조건에 현저한 차이가 있어 CS1-l균주는 lysozyme농도 $100{\mu}g/ml$ 30분정도의 처리로 99.9%의 높은 원형질체 형성을 얻을 수 있는 반면 C.flavigena 균주는 lysozyme 농도도 훨씬 높고 장시간이 소요되어 $600{\mu}g/ml$. 6시간 정도의 처리에 약80%의 원형질체 형성을 보였다. 또한 세균 배양기간이 미치는 영향도 CS1-l균주는 별 영향을 받지 않고 원형질체화 되었으나 C. flavigena균주는 매우 민감하게 영향을 받아 대수증식기 중기의 세포가 말기의 세포보다 원형 질체가 잘 이루어 졌다. 원형질체 형성확인방법에서도 CS-1 균주는 osmotic shock을 주어 원형질체를 계수하거나 SEM으로 확인하거나 같은 결과를 얻었으나 C. flavigena 균주는 osmotic shock에 의한 원형질체의 계수결과와 SEM으로의 결과가 서로 달라 확인방법으로 두 방법이 병행되어져야 함을 보여주었다.