• 한국동물학회지
• /
• 제34권1호
• /
• pp.20-30
• /
• 1991

지렁이(L. rubelIus) 체액내의 적혈구용혈능깍 단백질분해능을 확인하였다. 지렁이의 체액 0. 33 $\mu$l속에 있는 용혈인자는 9 $\times$ 1011 rat RBCs를 2분만에 완전히 용혈시켰으며, 다른 포유류들의 적혈구에도 약간의 차이는 있으나 비슷한 용혈능을 보였고, 이 용혈인자는 지렁이의 혈구가 아닌 몸체조직에서 분비되는 것으로 생각되었다. 용혈인자는 pH 6.5-7.5사이에서 활성이 가장 강하였고, 63'c로 30분 열처리할 경우 활성이 완전히 없어졌으며, 2-mercaptoethanol은 용혈인자의 활성을 증가시켰다. 이 인자의 활성도는 여러가지의 당류, LPS, cholesterol, prosphatidyl Choline, Ch10ropromazine, Sphin90myelin 및 FG2+, Fe3+, CU2+, ZR2+ 등의 금속이온에 의하여 활성이 저해되었다. 한편 지렁이 체액내의 단백질 분해인자는 BSA와 19G를 여러 조각으로 분해시켰으며 이 분해인자는 PMSF및 TLCK에 의하여 활성이 억제되지 않았다. 지렁이의 체강에는 용혈소를 분비하는 박테리아들이 존재하였으나 이들 박테리아들의 용혈소는 지렁이의 용혈인자와는 전기영동이동도에서 차이가 있었다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
• /
• 제30권4호
• /
• pp.335-343
• /
• 2005

세균의 용혈활성은 세균이 숙주 내에서 생존하기 위해 필요한 철을 획득하기 위한 특성이며 기능 면에서 볼 때 숙주에 대한 중요한 독력인자로 간주될 수 있다. 본 연구에서는 괴사치수 및 치근단 치주염으로 진단된 환자의 근관에서 분리한 Prevotella nigrescens의 용혈활성을 다양한 조건 하에서 측정하여 그 특성을 규명하는 것을 목적으로 한다. 1. 임상에서 분리한 P. nigrescens와 표준균주인 P. nigrescens ATCC 33563에서 모두 용혈활성이 나타났다. 2. 사람, 면양 및 말 세 가지 종에 대해 용혈활성을 비교한 결과 사람의 적혈구에서 가장 강한 용혈활성을 나타내었다. 3. 용혈소 억제제인 $NaN_3$와 dithiothreitol(DTT)는 농도의존적으로 P. nigrescens의 용혈활성을 감소시켰다 (p<0.05) 4. P. nigrescens가 최대 용혈활성을 나타내는 최적의 pH는 4이었으며, $50^{\circ}C$이하의 온도에서는 용혈활성을 보였으나 $95^{\circ}C$에서 급격히 감소하였다. 5.배양조건에 따른 P. nigrescens의 용혈활성을 비교한 결과 $10\%\;CO_2$배양기에 배양한 경우 혐기성 조건에서 배양한 것보다 더 높은 용혈활성을 보였다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제43권3호
• /
• pp.190-195
• /
• 2000

재배버섯에 갈색의 침몰성 반점들로 나타나는 갈반병(brown blotch disease)은 Pseudomonas tolaasii의 펩티드성 독소인 tolaasin에 의해서 유발된다. Tolaasin은 18개의 아미노산으로 구성된 분자량 1,985 Da의 lipodepsipeptide이며, 생체막에 pore를 형성하여 버섯세포 뿐만 아녀라 세균, 곰팡이, 식물 및 동물세포를 파괴한다. Tolaasin의 활성은 용혈성 독소의 활성측정에 널리 쓰이는 적혈구를 이용하여 독소의 용혈활성을 측정함으로써 이루어졌다. Tolaasin의 용혈활성은 적혈구의 파괴시 방출되는 헤모글로빈 양을 420 nm에서의 흡광도 증가로 측정하거나, 잔존하는 적혈구에 의한 600 nm에서의 흡광도로 측정하였다. P. Tolaasii 배양액의 용혈활성은 배양중 정체기 초기에 증가하기 시작하여 정체기 후기에서 최대로 나타났다. Tolaasin의 용혈활성은 개와 쥐의 적혈구에서 높게 나타났으며, 상대적으로 토끼와 닭의 적혈구에서는 낮았다. Tolaasin의 용혈활성에 미치는 양이온들의 효과에서 $ZN^{2+}$ 뿐만 아니라, $Cd^{2+}$과 $L^{3+}$이 tolaasin의 용혈활성을 저해하였으며, 음이온의 경우 $CO_3^2$가 용혈활성을 지연시켰고, 반면 $PO_4^{2-}$의 경우 용혈활성을 증가시켰다.

• 미생물학회지
• /
• 제33권3호
• /
• pp.170-174
• /
• 1997

강한 항진균 활성을 나타내며, 낮은 적혈구 용혈활성을 갖는 새로운 합성 펩티드를 얻기 위하여 cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12) 및 이들의 유사체들을 설계하고 이들을 고상법에 의하여 합성하였다. 합성 펩티드의 항진균 활성은 Trichosporon beigelii에 대한 성장억제능에 의하여 측정하였으며, 세포독성은 인간의 적혈구 세포에 대한 용혈활성에 의하여 측정하였다. 펩티드의 양쪽 친매성의 증가는 항진균활성보다는 적혈구 용혈황성에 큰 영향을 미쳤다. Cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12)의 12번 아미노산이 Lys을 Ala으로 치환시킨 유사체 펩티드(A2)는 가장 강한 항진균활성(minimum inhibitory concentration : 2.5.$\mu$g/ml)을 나타내며 비교적 낮은 적혈구 용혈활성(200.$\mu$g/ml의 펩티드 농도에서 0.5% hemolysis를 나타냄)을 나타내었다. 따라서 A2의 펩티드는 세포독성을 갖지 않으며 강한 항진균 활성을 가지는 모델로서 유용하게 사용될 것이다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제52권1호
• /
• pp.28-32
• /
• 2009

세균독소인 톨라신은 재배버섯에서 버섯균사 및 자실체의 구조를 파괴하여 갈반병을 일으킨다. 톨라신의 세포독성은 톨라신이 적혈구의 세포막에 pore를 형성하여 세포구조를 파괴하기 때문에 용혈활성을 측정하여 평가한다. 저자들은 $Zn^{2+}$와 $Cd^{2+}$에 의한 톨라신의 용혈활성 저해효과를 측정하는 중에 $Ni^{2+}$이 또 다른 저해제로 톨라신의 독성을 억제하는 것을 발견하였다. $Ni^{2+}$에 의한 톨라신 용혈활성의 저해는 농도의존적이었으며, Ki 값은 대략 10mM이었고, 이것은 $Ni^{2+}$이 $Cd^{2+}$에 비하여 저해효과가 높음을 의미한다. 용혈활성은 50mM 이상의 $Ni^{2+}$농도에서 완전히 제거되었으며, $Ni^{2+}$의 효과는 EDTA 첨가에 의해 가역적임을 확인하였다. 톨라신에 의한 용혈활성이 20mM $Ni^{2+}$에 의해서 완전히 억제된 상태에서 EDTA를 가하면 즉각 용혈활성이 나타났다. $Ni^{2+}$에 의한 톨라신 독성의 저해기작은 알 수 없지만, $Ni^{2+}$은 톨라신의 독성과정인 막결합, 분자중합체 형성, pore 형성, pore를 통한 막대한 양의 이온이동 등에 작용할 수 있을 것이다. 된 연구의 결과는 $Ni^{2+}$이 독성과정의 마지막 단계인 pore를 통한 이온이동 과정을 저해함을 보여준다.

• 한국균학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.123-125
• /
• 2000

한국산 야생버섯 22종의 용혈독성을 규명하기 위하여 그 냉침액(cold water extract)의 용혈활성을 검색하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Collybia confluence(밀버섯), Laccaris vinaceoavellanea(색시졸각버섯) 및 Lenzites betulina(조개껍질버섯) 등 3 종이 mouse 및 rat 적혈구에 대하여 강력한 용혈 작용을 나타내었다. 2. L. vinaceoavellanea은 $100^{\circ}C$ 수욕상에서 30분간 가열하여도 mouse 적혈구에 대한 용혈활성이 80% 이상 유지되어, 열에 매우 안정한 용혈성분을 함유하는 것으로 확인되었다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제50권4호
• /
• pp.257-261
• /
• 2007

Pseudomonas tolaasii에 의해서 분비되는 펩티드 독소인 tolaasin은 재배버섯에 세균성 갈반병을 유발한다. Tolaasin의 독성은 적혈구를 파괴하는 용혈활성으로 평가된다. Tolaasin 펩티드는 C-말단부위에 두 개의 amine기를 갖고있어, 이 펩티드의 세포막 결합은 amine기의 전하상태에 따라 다를 수 있다. 이것을 확인하기 위하여 tolaasin을 적정하였을 때, 적정곡선은 pH 7.0에서 9.6 사이에서 적정이 되는 amine기가 있음을 보였다. Tolaasin에 의한 용혈활성의 pH 의존성을 조사하였을 때, 용혈활성은 알칼리 조건에서 증가함을 확인하였다. 따라서, pH 변화에 따른 tolaasin의 막결합 특성을 조사하기 위하여 적혈구를 tolaasin과 사전배양한 후, tolaasin을 포함하지 않은 완충액으로 씻어내고, 사전배양중 적혈구에 결합한 tolaasin의 용혈활성을 측정하였을 때, 활성은 pH 8 이상에서 크게 증가하였다. 이러한 결과는 tolaasin이 전하가 없거나 양전하량이 적은 상태에서 세포막에 잘 결합하여 세포독성이 커진다는 것을 의미한다.

• 한국균학회지
• /
• 제25권4호통권83호
• /
• pp.253-256
• /
• 1997

한국산 야생버섯의 독성을 규명하기 위한 연구의 일환으로 46종의 야생버섯의 용혈독성을 검색하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 46종 중 Amanita esculenta, A. griseofarinosa, A. longistriata, A. melleiceps, A. phalloides, A. rubescence, A. spissacea, A. vaginata, Hebeloma crustuliniforme, Lepiota cygnea, Macrolepiota procera, 및 Oudemansiella platyphylla 등 12종의 야생 담자균 냉침액이 마우스 적혈구에 대하여 강력한 용혈활성을 나타내었다. 2) A. griseofarinosa 및 H. crustuliniforme은 $100^{\circ}C$ 수용상에서 5분간 가열하여도 그 용혈 활성이 소실되지 않아 열에 매우 안정한 용혈성분을 함유하는 것으로 추정된다.

• 한국수산과학회지
• /
• 제34권5호
• /
• pp.502-508
• /
• 2001

병원성 비브리오 속인 Vibrio furnissii의 용혈소를 분리정제하고 그 물리화학적 특성, 생물학적인 그리고 면역학적인 상호관련성을 검토하여, 다음과 같은 결과를 얻었다. 용혈소의 정제는 ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 (1st와 2nd)와 Sephaedx G-100 gel permeation chromatography를 거쳐 738배로 정제되었으며 회수율은 각각 $11.6\%$ 와 $5.2\%$로 나타났다 전기영동법으로 용혈소의 정제를 확인한 결과 단일 밴드의 형성을 관찰할 수 있었다. 분자량은 61 kDa이였으며 또한 SDS-PAGE 결과 subuint는 존재하지 않았다. 정제된 용혈소는 열에 불안정한 이열성 용혈소이며 $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$와 cholesterol에 의해 용혈활성이 모두 저해되었다. 용혈기작에 있어서는 온도의존성 용혈기작으로서 최적 용혈의 온도는 $37^{\circ}C\sim47^{\circ}C$로 나타났다. 정제용혈소의 pH 안정성은 pH 6.0, 6.5, 10.0에서 각각 불안정하였다. 용혈활성에 있어서 최적 혈구 농도는 $1.0\sim2.0\%$였다. 또한 각종 동물 혈구의 감수성 시험 결과 두 용혈소 모두 토끼에서 가장 감수성이 높았으며 사람의 혈구에서는 B형 혈액형에서 다소 높은 감수성을 나타내었다.

• 미생물학회지
• /
• 제34권1_2호
• /
• pp.26-30
• /
• 1998

Tetradecapeptide인 Mastoparan B(MP B)와 이의 [Ala]-MP B 유도체들을 합성하고 항균 활성 및 용혈 작용을 측정하여 MP B의 활성에 미치는 소수성도(hydrophobicity)와 양친매성(amphiphilicity)의 영향을 비교하였다. 그 결과 MP B와 소수성도가 MP B 보다 큰 [$Ala^2$]-, [$Ala^4$]-MP B 유도체가 큰 항균 활성을 나타내었으며, 소수성도가 MP B보다 작은 [$Ala^6$]-MP B 유도체의 활성은 MP B와 비슷하거나 작게 나타나 소수성도가 큰 유도체일수록 항균 활성을 크게 나타내었다. 그러나 MP B 보다 소수성도가 큰 유도체인 [$Ala^9$]-MP B는 Ala에 의한 Trp의 치환때문에 MP B 보다 작은 활성을 나타내었다. 용혈 활성 측정 결과 MP B보다 소수성도가 큰 [$Ala^2$]-, [$Ala^4$]-MP B 유도체가 각각 100.0%와 69.4%로써 용혈 작용을 크게 나타냈으나, 소수성도가 작은 [$Ala^6$]-MP B 유도체는 6.1%로써 가장 작은 용혈 작용을 나타내었고 Trp 대신 Ala으로 치환한 소수성도가 큰 유도체인 [$Ala^9$]-MP B는 MP B 보다 작은 26.0%의 용혈 작용을 나타내었다. 그러므로 용혈 작용은 소수성도가 클수록 증가하였으며 양친매성이 활성에 미치는 영향은 적었다.