본 연구에서는 비소로 오염된 지역의 토양 및 지하수에 동전기적 기술을 사용하고 배양된 토양 미생물과 배양액을 주입하여 토양 내의 토착 미생물을 활성화하여 비소의 이동도를 상승시키는 것이 주요목표이다. 생물학적 동전기법은 미생물의 전기적 이동을 이용하여 기존의 생물학적 복원에서 문제시 되어온 늦은 분해속도와 낮은 제거효율의 단점을 극복할 수 있었다. 이는 전극의 전해액 대신 토양 미생물과 배양액을 혼합 주입하여 유기물질을 전자 공여체로 이용하는 다양한 토양 미생물이 Fe, Mn 등을 환원하게 된다. 이에 따라 주변의 금속 산화 미생물이 As(III)를 As(V)로 변환시킴으로써 As(III)의 이동도가 증가하게 되고, 이로 인해 As의 이동도가 기존 동전기법의 약 30%에 비해 60 ~ 70%정도로 상승함을 확인하였다.
더덕의 효과적인 재분화조건 (약 90%의 재분화율)을 바탕으로 개화시기 조절유전자인 RAG25 Codonopsis lanceolata유전자의 도입을 시도하였다. 더덕의 잎 절편을Agrobacterium과 3일 동안 공조배양 하였으며 NAA 2 mg/L, BA 2 mg/L (N2B2)와 NAA 2 mg/L, BA 4 mg/L (N2B4)가 첨가된 shoot inducing media (Km 20mg/L와 Cf 250 mg/L가 첨가됨)에서 배양하였을 때 형질전환 신초가 형성되었다. 획득된 신초에서 genomic DNA를 추출하고 npt II와 RAG25 primer를 이용한 PCR을 수행하여 각각 0.7 kb와 0.6 kb의 band를 확인하였다. RAG25 유전자에 대한 PCR산물을 이용하여 Southern hybridization을 수행한 결과 PCR과 동일한 위치에서 band 가 검출되어져 이 유전자의 도입을 재확인하였다.
토양으로 부터 분리한 lipoxygenase inhibitor 생산균주 Penicillium sp.를 배양하여, 배양액으로 부터 저해물질을 분리, 정제하였다. 배양액을 여과한 후 원심상등액을 농축하고, ethanol 침전에 의해 불순물을 제거하였다. Ethanol은 감압농축기로 제가한 후 Dowex 50W, Sephadex G-25, silica gel column 및 HPLC 등으로 single peak를 나타낼때까지 정제하였다. 정제된 본 저해제는 산성 영역에서 비교적 안정하였으며, 열 안정성이 특히 우수하여 $100^{\circ}C$ 2시간의 가열에 활성이 그대로 유지되었다. 분자량은 약 270으로 측정되었으며, $220^{\circ}C~230^{\circ}C$ 부근에서 용융되지 않고 decomposition 되는 성질을 나타내었다. 저해제는 lipoxygenase와 complex를 형성하여 효소를 효율적으로 저해하였다.
감자(Solannum tuberosum) 괴경에 A. rhizogenes를 접종하여 암소에서 배양한 결과 2-4주 후에 hairy root가 유도되었다. 유도된 hairy root는 opine 분석을 통해 agropine과 manopine이 검출되어 형질이 전환되었음을 확인하였으며, 발생이 진행됨에 따라 단백질은 전차 감소 되었고, 전분은 점차 증가함을 보였으며, GS.II의 활성 또한 발생단계에 따라 증가함을 보였다. $Ca^{2+}$ channel blocker 인 verapamil 처리구에서는 약 60% 정도 GS II의 활성이 감소 되었으며, calmodulin inhibitor인 chloropromazine 처리구에서는 GS II의 활성에 별 영향을 미치지 않았다. 한편 peroxidase 활성은 3주 동안 배양한 callus에서 가장 높았으며, peroxidase 양상은 hairy root에서는 pI 5.4, 5.9의 band가 나타난 반면, 3주 동안 배양한 callus에서는 pI 6.4, 7.1, 7.4의 새롱룬 band를 얻었다.
최근 지구온난화로 인해 국제적으로 이산화탄소 저감에 대한 연구가 진행되고 있으며 특히, 이산화탄소의 분리 및 유용물질 전환 등의 다양한 방법에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 이산화탄소를 메탄으로 전환시키는 생물학적 반응은 acetotrophic methanogen, hydrogenotrophic methanogen 등의 미생물이 관여한다. 본 연구에서는 hydrogenotrohpic methanogen을 이용하여 메탄으로 전환하고자 하였다. 이를 위해 이산화탄소와 수소의 체류시간에 대한 연구를 진행하였으며, 선행 연구로 혐기성슬러지의 혼합배양균으로부터 hydrogenotrophic methanogen을 우점종화 하기 위해 고정층 반응기를 이용하여 이산화탄소와 수소 가스를 주입하여 고농도로 배양하였다. 그 결과, 반응기내의 이산화탄소의 메탄전환 균주로써 수소를 환원제로 이용하는 hydrogenotrophic methanogen이 배양되었음을 확인하였다. 이산화탄소와 수소가스의 체류시간에 따른 이산화탄소의 생물학적 메탄 전환 실험 결과, 약 4시간에서 이산화탄소의 저감률이 99%이었으며, 체류시간이 2시간, 1.5시간인 경우 이산화탄소의 저감률은 각각 71%, 68% 이었다.
대표적인 azo계 반응성 염료인 Remazol Black B에 대한 탈색능이 우수한 신규 백색부후균인 Phanerochaete sp. EJ-31L의 탈색 특성을 평가해 보았다. 보조 탄소원 농도, 질소원, pH 등의 배양조건이 염료 탈색율에 미치는 영향을 분석한 결과, 3%(w/v)의 sucrore, 0.05%(w/v)의 $(NH_4)_2SO_4$를 첨가한 배지에서 pH 6.5의 조건에서 탈색능이 우수하였다. 혐기적 조건에서는 호기적 조건 대비 27% 수준의 탈색 효율을 보였으며, 진탕배양에서의 탈색율이 정치배양 대비 2배이상 높아 Phanerochaete sp. EJ-31L은 호기적 조건에서 탈색능이 우수함을 알 수 있었다. 초기 Remazol Black B 농도 50 ppm에 대한 회분식 처리시 약 95% 이상의 탈색율을 보여 향후 azo계 염료 처리용 생물공정에 백색부후균인 Phanerochaete sp. EJ-31L을 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
이 논문은 이소플라본과 골조직의 관계에 대하여 발표된 역학조사, 사람과 동물을 대상으로한 실험, 조직세포연구, 세포배양에서의 연구들을 포괄하고 있다. 가장 중요한 결론은 적절한 양을 투여했을 때 이소플라본, 특히 제니스테인과 다이드제인은 골밀도 증진에 효과가 있다는 것이다. 쥐를 대상으로 한 실험에서 적정 골밀도 향상 효과를 나타내기 위한 이소플라본의 invivo 투여량은 에스트라디올보다 보통 1000배가 높았다. 또한 적정 투여량보다 낮거나 높은 농도에서는 이소플라본은 뼈에 유익한 효과가 없었으며 그 때문에 이중적인 효과를 발휘한다. 유사 조골세포를 배양한 결과 중 in vitro실험에서 제니스테인의 효과는 관찰되었으나 다이드제인의 효과는 나타나지 않았다. 일반적으로 대두와 대두제품에 존재하는 이소플라본은 동물이나 사람이 적정한 양으로 섭취하였을 때 약한 에스트로겐 효과를 발휘하지만 고농도에서는 오히려 해로운 효과가 관찰될 수도 있다. 제니스테인에 대한 세포수준의 연구에서는 고농도 투여시에는 정상적인 세포기능의 소실을 유도하기도 한다고 제안되었으며, 반면 다이드제인은 같은 농도에서 유사 조골세포에 유익한 효과를 발휘한다고 하였다. 사람이 식이로부터 섭취하는 양은 부작용을 초래할 정도가 되기는 힘들다. 따라서 이소플라본은 적정한 양으로 섭취했을 때 사람의 골질량을 유지하거나 골질량을 증가시키는 잠재적인 능력이 있음이 분명하다.
쥐 간세포를collagenase perfusion method에 의해 분리한 뒤 collagen coated dish와floating collagen membrane에서 일차배양하여 간세포의 분화기능을 조사하였다. 두 경우 모두 간세포의 생존율은 5일 이후부터 점차 감소하였거나 간세포에 의한 암모니아 처리기능과 albumin생성기능은 약 7일간 유지되었다. 또 이러한 분화기능에 유지는 ollagen coated dish보다floating collagen membrane이 유리한 것으로 나타났다.
Polyethylene glycolCPEG)의 재조합 효모 배양 에서의 세포성장과 glucoamylase 생산에 대한 영향에 대하여 조사하였다. PEG 첨가에 의하여 세포성 장은 영향을 받지 않았으나 재조합 glucoamylase의 생산은 증가되었다. 최척의 PEG 분자량은 6000이었으며 최척의 농도는 1g/L이었다. 이러한 최척의 값을 이용하여 PEG 첨가배지에서 첨가하지 않은 배지보다 약 23%의 세포외 glucoamylase 활성의 증가를 보였다.
분리된 미생물 중 염색폐수의 색도 제거능이 우수한 3균주(RA1, RA2, YA1)을 선별하여 실험에 이용하였다. 동일한 조건에서 실험한 결과 YA1이라 명명한 균주가 약 53%의 색도제거율을 보여 가장 우수한 균주로 판명되었고, 최적의 배양조건을 탐구하는 연구를 수행하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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