자연발효된 청국장으로부터 혈전용해활성을 가지는 세균 Bacillus licheniformis HK-12를 농화분리하여, 배양기간 동안 생산된 혈전용해활성을 가지는 단백질에 대해 프로테옴 분석을 실시하였다. B. licheniformis HK-12를 액체 영양배지에 접종하여 얻어진 배양상등액을 피브린 평판법(fibrin plate method)을 사용하여 효소활성을 측정하였다. 그 결과, HK-12의 혈전용해 활성은 대조구인 plasmin보다 약 2.3배정도 높은 활성을 나타내었다. 효소는 배양상등액을 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex chromatography 등을 수행하여 분리정제하였으며, 정제된 혈전용해효소의 분자량은 SDS-PAGE를 통해 약 23 kDa로 측정되었다. 배양시간에 따른 HK-6의 세포외 단백질의 변화를 2-D PAGE 분석을 통하여 분석하였다. 그 결과 36시간배양 후에 가장 현저하게 유도된 spot #1을 분리하였으며, MALDI-TOF MS를 이용하여 단백질 동정을 실시한 결과, 유도된 단백질의 아미노산 서열은 $^1EKKIEKYREEEORLK^{15}$으로서, serine protein kinase (PrkA) (AAU22526)로 확인되었다.
복숭아(Prunus persica)의 약(葯)을 보다 효과적(效果的)으로 Callus를 유기(誘起)시키기 위해서 몇 가지 생장조절물질(生長調節物質)을 넣은 Nitsch배지(培地)에 치상(置床)하였고 분화(分化) 및 증식(增殖)을 위해 역시 몇 가지 생장조절물질(生長調節物質)을 넣은 MS 배지(培地)에 이식(移植)하였다. 배양시(培養時) 사용(使用)된 Tetrad기(期)의 약(葯)은 화뢰를 $4^{\circ}C$의 냉장고(冷藏庫)에 50~60일간(日間) 저장(貯藏)했다가 사용(使用)하였으며 약색(葯色)의 변화(變化), Callus의 유기양상(誘起樣相), Callus유기상태(誘起狀態) 및 Callus의 생장조절물질(生長調節物質)에 따른 생육상태등(生育狀態等)을 행(行)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 치상(置床)된 약(葯)은 배양후(培養後) 2~3일경(日頃)부터 갈변(褐變)하기 시작하여 5~6일(日) 내(內)에 모두 흑갈색(黑褐色)으로 변색(變色)되었으며 변색(變色)되지 않은 약(葯)은 생장조절물질(生長調節物質)을 첨가(添加)하지 않은 배지(培地)에서만 다수(多數) 관찰(觀察)되었다. 2. Callus는 갈변(褐變)한 약(葯)에서 약(葯)의 봉합선(縫合線)이 파열하면서 유기(誘起)되었다. 3. BA는 복숭아 약(葯)으로 부터 Callus유기(誘起), 증식(增殖) 및 엽록소형성(葉綠素形成)에 월등(越等)히 뛰어난 효과(效果)를 나타냈으며 BA 0.5mg/l가 가장 좋았다. 4. BA 0.5mg/l는 IAA 또는 2.4-D와 혼용(混用)되었을 때도 Callus 증식(增殖)에 있어 뛰어난 효과(效果)를 나타냈다. 5. pH 4.5로 적정(滴定)하고 $CaCl_2{\cdot}2H_2O$를 250mg/l로 개량(改良)한 Nitsch 배지(培地)에서만 Callus가 유기(誘起)되었다.
본 연구에서는 식물플랑크톤 종조성, 동물플랑크톤 증식 및 먹이망 구조에 미치는 빛 : 영양염 비에 대한 영향을 알아보았다. 실험조건은 빛 에너지의 강약과 동물플랑크톤 유무(약광 LL, 약광+동물플랑크톤 LLZ, 강광: HL, 강광+동물플랑크톤: HLZ)등의 다양한 방법으로 조절하였다. 배양시간에 따른 식물플랑크톤의 총 현존량을 모든 배양조건에서 유사한 경향을 보였으나, 종조성은 배양조건에 따라 차이를 보였다. 녹조류(Staurastrum spp., S. dorsidentiferum, Coelastrum cambricam, Chlorella sp., Krichnerialla sp.)는 강광의 조건에서, 규조류(Melosyra granulata, Synedra acus, Fragilaria arotonensis)는 약광의 조건에서 우점하는 것으로 나타났지만, 남조류(Phormidium sp.)는 포식자에 의한 영향을 크게 받는 것으로 조사되었다. 강광 조건에서의 평균 POC 농도(20일 이후)는 약광의 조건보다 약 2배 높은 농도를 보였다. 반면에 seston의 P/C비는 약광의 조건이 강광의 조건보다 높게 나타났다. 배양시간에 따른 동물플랑크톤의 총 현존량은 강광의 조건이 약광의 조건보다 높게 나타났다.
Seo, Young-Kwon;Song, Kye-Yong;Seo, Seong-Jun;Kim, Young-Jin;Park, Jung-Keug
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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pp.369-371
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2003
젤형 인공피부의 약한 물성을 보완하기 위해 스폰지형 인공피부가 개발되었으나 다공성 표면구조 때문에 세포의 배양이 어려운 문제점이 남아 있었다. 이 다공성 구조를 섬유모세포의 장기 배양으로 ECM으로 채우기 위해서는 3주이상의 긴 시간이 필요하며 그 위에 상피층 배양하기 위해서는 2주 이상의 시간이 추가로 소요되기 때문에 환자에게 이식할 적절한 시기를 놓칠수가 있다. 따라서 본 연구결과로 단기일 내에 전층 인공피부를 배양함으로서 적절한 이식시기를 맞출수가 있으며 이러한 기저막이 부착된 스폰지구조는 물성도 향상되어 이식시 조작이 쉽고 볼합이 가능한 장점이 있다.
최근 시설재배에서는 염류 집적 및 토양전염성 병해충 등으로 인한 연작장해를 회피하기 위하여 수경재배로 전환하는 농가가 급속히 증가하고 있다. 우리나라의 수경재배면적은 '98년 23 ha에서 2000년 1,000 ha로 급속히 증가하고 있는데, 이중 약 12%는 담액수경이나 박막수경의 순수 수경재배 방식이 차지하고 있으나 대부분이 고형배지를 이용한 비순환방식이다. 배양액의 비순환방식은 토양이나 지하수의 오염이 염려되지만, 순환방식의 경우에는 배양액 성분의 조정이나 배양액의 소독 등재처리가 필요하여 농가에서는 기피하고 있는 실정이다. (중략)
미생물이 하는 생산하는 대사길항물질을 screening 한 결과 최소검정배지상에서 Gram 양성균과 Gram 음성균에 다같이 강한 항균작용을 나타내고 L-aspar tic acid와 L-g1utamic acid에 의하여 길항당하는 물질 N-2292를 생산하는 방선균을 분리하였다. 본 생산균을 분류동정한 결과, Streptomyces albulus 로 보거나 혹은 그 유연균으로 동정하였다. N-2292물질의 배양조건을 검토하여 최적조건에서 대량 배양하고 주로 ion 교환수지, Dowex 50을 사용하여 활성물질을 분리정제하였으며 배양액 약 10ι에서 약 40mg의 백색분말을 얻었다. 본물질은 그 의 이화학적 성질로 보아 indole 화합물을 함유하는 peptide 양 물질임을 추정할 수가 있었다. 생물학적 성질은 최소검정배지상에서 Gram 양성 및 Gram 음성세균에 항균력을 나타냈다. 이러한 항균력은 L-Asp. 및 L-Glu.의 첨가에 의해서 조해당하였다.
우리나라 포도원에서 가장 많이 발생하여 피해를 주고 있는 grapevine leafroll-associated 3 Closterovirus (GLRaV-3)를 대상으로 기내 배양묘를 이용한 바이러스 순화 및 진단효율성을 검토하였다. 바이러스 감염주의 절간을 기내배양하여 증식시킨 기내 배양묘를 1개월 간격으로 계대배양하면서 배양묘를 ELISA 검정한 결과 고농도의 바이러스가 검출되었으며 배양묘의 부위별로 잎, 줄기 및 줄기 유래의 callus 조직에서 모두 고농도로 검출되었다. 또한 포장에서 재배되고 있는 포도나무의 잎이나 엽병조직에 비해 기내 배양묘의 조직을 사용하였을 때 높은 농도의 정제 바이러스를 얻을 수 있었으며, 전자현미경에 의한 dip 검경에서도 사상형 바이러스 입자가 관찰되었다. RT-PCR 진단에서는 기내 배양묘 조직을 사용하였을 때 포도 유엽조직과 엽병+중륵조직에 비해 검출효율이 높았다. 기내 배양묘의 잎조직을 이용하여 ELISA와 RT-PCR 검정감도를 비교한 결과 ELISA에 비해 RT-PCR 검정이 약 1,000배 감도가 높았다.
Fructose와 galactose를 배지에 동시에 사용하였을 때 catabolite repression에 의한 PAFS생산성 저해 현상을 극복하기 위해서 본 연구에서는 두 가지 탄소원의 공급량과 유속을 달리하는 유가식 배양으로 PAFS 생산성을 향상시키고자 하였다. 또한 통계적으로 성공률이 매우 높다고 밝혀진 실험방법에 의해 모균주로부터 고생산변이주를 선별하여 생산성이 가장 우수한 것으로 판명된 AP-20 균주를 생물반응기를 이용한 회분식 배양 및 유가식 배양 실험에 이용하였다. 생물반응기에서의 유가식 배양이 회분식 배양에서보다 PAFS생산성이 약 4배 이상 향상되었음을 확인할 수 있었다. 또한 생산균주의 배양생리학적 특성으로서 Pseudomonas aeruginosa는 galactose를 이용해서 세포성장과 이차대사산물 생합성과 관련된 유전자의 발현을 하고 fructose를 이용하여 PAFS를 생합성하는 것으로 추론되며, 너무 느린 탄소원의 공급은 세포성장에 제한요소로 작용하여 이차대사산물의 생합성을 저해하는 것으로 판단되었다. 한편 유가식 배양일지라도 배양 조건에 따라 그 생산성이 뚜렷이 차이가 나는 것으로 관찰되었다 즉 galactos의 초기량이 20g/L이고 fructose 30g/L를 0.032 mL/min의 속도로 공급했을 경우의 PAFS생산량을 100%로 정의했을 때, 초기부터 40 g/L의 galactose가 존재하고 20 g/L의 fructose를 0.032 mL/min의 속도로 공급한 경우에 PAFS생산성이 약 580%향상된 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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