본 연구에서는 미네랄이 함유된 해양심층수(DSW)가 신장 기능에 미치는 항산화 효과를 세포 모델을 사용하여 확인하였다. DSW 샘플은 최적의 칼슘/마그네슘 비율을 결정하기 위한 목적으로, 각기 다른 칼슘 및 마그네슘 비율을 가진 4가지 샘플-미량 미네랄(TM), 고 마그네슘(HM), 고 마그네슘 저염(HMLS) 및 고 마그네슘 고 칼슘(HMHC)-로 준비되었다. 신장 세포주 HEK293를 2시간 동안 NaCl로 처리하여 ROS를 유도한 후, 마그네슘과 칼슘 등의 미네랄이 서로 다른 비율로 용해된 물로 처리하여 ROS 농도와 항산화 효소 활성 및 단백질을 측정하였다. 물 샘플 중 HMLS는 ROS에 대한 세포에 가장 많은 보호효과를 나타냈다. 세포 내 글루타티온 함량은 HMLS 그룹과 HMHC 그룹에서 가장 높았다. 반면, TM과 HMHC는 항산화 유전자의 mRNA 발현에서 대조군과 유사한 경향을 보였다. 이러한 결과는 DSW가 과도한 나트륨 섭취로 인한 신장의 산화 스트레스를 예방하는 데 도움이 될 수 있음을 시사한다. 또한 ROS 농도와 항산화 마커 측정 결과를 종합하여 볼 때 HMLS와 HMHC가 신장 세포 모델에서 우수한 항산화 효과를 가진 DSW 샘플이라고 판단할 수 있다.
본 연구는 trophic factor supplementation (TFS)이 cold ischemic storage와 rewarming 동안에 신장 세포의 생존에 미치는 효과를 알아보기 위해 실시했다. p44/42와 p38 mitogen activated protein kinases (MAPK) 활성이 TFS에 의해 영향을 받는지를 Western blot을 통해 알아보았다. Apoptotic changes를 알아보기 위해 4',6'-diamino-2-phenylindole (DAPI) 염색을 실시했다. 세포생존도를 알아보기 위해 live assay를 실시하였다. 그 결과, TFS는 cold ischemic storage와 rewarming 동안 증가된 44/42와 p38 MAPK activity를 유의성 있게 감소시켰다 (p<0.05). 또한, cold ischemic storage와 rewarming에 의한 apoptotic cell 수가 TFS에 의해 감소함을 관찰했다. 마지막으로 TFS는 유의성 있게 세포 생존도를 증가시켰다 (p<0.05). 따라서, TFS는 p44/42와 p38 MAPK 활성을 감소시키고 apoptotic change를 억제함으로써 cold ischemia와 rewarming injury로부터 신장 세포를 보호하는 것으로 생각된다.
Testosterone이 serum-free medium에서 배양한 토끼의 신장 근위세뇨관 상피세포의 세포성장과 기능에 미치는 영향을 관찰한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 토끼의 신장 근위세뇨관 상피세포는 testosterone 1 nM의 농도에서 유의한 세포 성장 촉진 효과를 나타내었고, testosterone 10 nM이상의 농도에서는 세포성장이 억제되었다. 2. Testosterone은 serum-free medium에서 성장촉진인자의 하나인 hydrocortisone을 growth supplement로 넣어준 serum-free medium에서 토끼 신장의 근위세뇨관 상피세포의 성장을 촉진시키었다. 3. Testosterone은 hydrocortisone을 growth supplement로 넣어준 serum-free medium에서 토끼 신장의 근위세뇨관 상피세포의 성장을 촉진시키었다. 4. Testosterone은 Northern blot analysis에 의하여 확인한 토끼 신장의 근위 세뇨관 상피세포의 ${\beta}-actin$ mRNA level은 증가되었다. 이상의 결과로 미루어 보아, serum-free 그리고 hormonally defined media에서 testosterone이 토끼의 신장 근위세뇨관 상피세포의 성장 및 기능에 대하여 촉진적으로 작용하는 것은 cellular mecrofilament의 중요한 구성단백의 하나로 밝혀진 ${\beta}-actin$의 합성 증가에 기인하는 것으로 생각된다.
목적 : 이전 연구에서 단삼 추출액이 강력한 항산화 작용이 있음을 확인한 바 있어 단삼 추출액이 신장세뇨관 세포에서 oxidant에 의한 세포사망 및 DNA 손상을 방지하는 지를 조사하고 이러한 효과가 지질의 과산화를 억제하는 효과에 기인하는 지를 시험하였다. 방법 : 신장 근위세뇨관 세포 유래 세포주인 opossum kidney (OK)세포를 이용하여 세포 사망은 frypan blue exclusion방법을 이용하여 평가하였고, DNA손상 정도는 double stranded DNA의 파괴를 측정하여 평가하였다. Oxidant 약물 모델로는 $H_2O_2$를 사용하였다. 결과 : $H_2O_2$는 적용시 간과 농도에 비례하여 세포 사망을 유도하였다. 단삼 추출액은 0.05% 농도에서 $H_2O_2$에 의한 세포사망 및 DNA 손상을 방지하였다. 이러한 방지효과는 $H_2O_2$ 제거 효소인 catalase와 철 착염제인 deferoxamine에 의해서도 나타났다. 그러나 강력한 항산화제인 DPPD는 $H_2O_2$에 의한 세포 사망이나 DNA손상을 방지하지 못하였다. $H_2O_2$는 세포내 ATP 농도를 감소시켰으며. 이러한 감소는 poly (ADP-ribose) polymerase억제제인 3-aminobenzamide에 의해 방지되었으나 단삼 추출액에 의해서는 영향을 받지 않았다. 3-aminobenzamide는 $H_2O_2$에 의한 세포 사망을 방지하였다. $H_2O_2$는 지질의 과산화를 증가시켰으며, 이러한 변화는 단삼 추출액과 DPPD에 의해 방지되었다 결론 : OK 세포에서 $H_2O_2$에 의한 세포사망과 DNA 손상에는 지질의 과산화가 중요한 역할을 하지 않으며, 단삼 추출액의 $H_2O_2$에 의한 세포 사망과 DNA 손상 방지 효과는 항산화 작용이 아닌 다른 기전에 기인하는 것으로 사료된다.
큐티클리층이 제거된 해바라기(Helianthus annuus L.) 하배축 절편의 오옥신(IAA, $10\;\mu\textrm{M}$) 유도 신장 반응에 있어서 RNA, 단백질 합성 및 세포벽으로의 $H^{+}$ 방출과의 관계에 대해 조사하였다. 하배축의 표피조직 바깥에 있는 큐티클층은 실험에 사용하는 여러 가지 대사억제제에 대해 어느 정도 불투과성 장벽으로 작용하여 억제제의 효과를 저하시키지만, 곱게 간 석영사로 하배축 절편을 문질러서 큐티클리층을 제거하였을 때 억제제들의 효과는 현저하게 증가하였다. 단백질 합성 억제제인 cycloheximide (CHI, $10\;\mu\textrm{M}$)는 5분 정도의 지연시간 뒤에 IAA유도 신장반응을 억제하기 시작하였으며, 신장 반응 4-5분 전(IAA처리 10분 뒤)에 처리하였을 때 IAA에 의한 신장반응을 완벽하게 억제하였다. 그러나 신장률이 정상상태를 유지하고 있는 IAA처리 60분 뒤에 CHI를 처리하였을 때는 신장률이 0에 이르기까지 60분 이상이 걸렸다. RNA합성 억제제인 cordycepin(COR, $200\;\mu\textrm{M}$)은 IAA보다 5분 먼저 처리하였을 때 신장반응을 완전히 억제하였으며, 정상상태의 신장을 완전히 억제하는 데는 70분 이상이 걸렸다. 원형질막 $H^{+}-ATPase$의 활성을 저해하는 vanadate(1 mM)는 IAA유도 신장과 세포벽으로의 $H^{+}$ 방출을 통한 배양액의 산성화를 모두 억제하였다. 또한 CHI는 완벽하게 COR 역시 현저하게 IAA에 의한 $H^{+}$ 방출을 억제하였다. 그러나 산성용액속에서, CHI에 의한 IAA 유도 신장의 억제가 다시 회복되지 않는 것으로 보아 CHI가 단순히 세포벽의 산성화를 억제하여 신장을 저지하는 것 같지는 않다. 이상의 결과에서 해바라기 하배축의 IAA유도 신장 반응의 시작과 세포벽으로의 $H^{+}$ 방출에는 단백질(생장제한 단백질)의 합성이 필요하며 이 단백질은 신장이 시작하기 전에는 존재하지 않고 IAA에 의한 신장 반응 및 분전에 새로 합성됨을 추측할 수 있다. 그리고 COR이 IAA 유도 신장을 억제한다는 것은 IAA에 의한 생장제한 단백질의 합성이 RNA합성 수준에서 이루어진다는 것을 의미한다. 또한 신장 반응에는 세포벽으로의 $H^{+}$ 방출이 필요하나 이는 단순히 세포벽의 산성화를 통한 산성생장의 원인이 되는 것 같지는 않다.
Chitosan에 Ttichoderma viride 유래의 cellulase를 처리하여 효소분해함으로써 고분자량 chitooligosaccharides를 얻었다. 생산된 올리고당을 HPLC로 분석한 결과 octamer 이상의 것이 전체 올리고당 중 49.3%에 달하는 비교적 고분자 화합물로 구성된 chitooligosaccharides의 혼합물이었다. MTT검색법에 의하여 고분자량 chitooligosaccha- rides의 정상세포주와 암세포주에 대한 세포독성을 실험하였다. 정상세포주인 아프리카 초록원숭이의 신장세포에 대한 $IC_{50}$/(50% 저해농도)값은 1,107.95$\mu$g/ml로 정상세포에 대한 독성은 거의 없었다. 폐암세포주인 A549, 방광암세포주인 J82, 대장암세포주인 SNU-C4, 위암세포인 SNU-1, 유방암세포주인 ZR75-1에 대한 $IC_{50}$/값은 각각 421.06$\mu$g/ml, 417.99$\mu$g/ml, 445.54$\mu$g/ml, 380,65$\mu$g/ml, 460.49$\mu$g/ml로 in vitro 종양세포 증식억제 활성을 나타내었다.
생쥐 신장의 근위세뇨관과 원위세뇨관 세포의 미세구조에 미치는 염화 메틸수은의 독성에 대한 홍삼유출물의 첨독성적 영향을 전자현징경적으로 연구하였다. 염화 메틸수은 처리군의 근위세뇨관 세포에서는 대조군에서 보다 철세 융모가 다소 축소되고 불규칙한 배열을 하였다. Brush border의 인접 부위에서는 작은 경계들이 나타나고 세포질 중앙 부위에서는 치밀체를 함유한 큰 육포들이 관색되었다. Mitochondria는 상당히 팽대되고 기양막은 부분적으로 비후되었으며 다수의 ITsosome이 나타났다. 염화 메틸수은 처리군의 원위세뇨관 세롱에서는 불규칙한 세포 표면, 양사된 세포, 그리고 다수의 ribosome과 소수의 지방사이 나타났으며 mitochondria 는 팽대되고 기고막은 부분적으로 비후되었다. 염화 메틸수은-홍삼추출물 병행 처리군의 근위세뇨관 세포에서는 염화 메틸수은 처리군에서 보다 mitochondria의 팽대 정도가 감소되었으며 육포의 크기와 수도 상당히 감소되었다. 염화 메틸수은-홍모적출물 병행 처리군의 원위세뇨관 세롱에서는 세포 표면이 어느정도 규칙적이고 mitochondria의 정해와 기저막의 비후 정도가 감소되어 정상 세포와 거의 유사하였다.
본 연구에서는 전통적으로 담석증, 신장치료 등의 한약제로 많이 사용하는 대왕을 여러 용매를 사용하여 얻은 대왕추출물 분액에 대한 세포독성을 여부를 MTT 정량법, NR 정량법, SRB 정량법을 이용하여 조사하였다. 1. 추출 용매 methylene chloride, ethyl acetate, butanol, water로부터 얻은 대왕추출물 모두 처리농도에 따라 세포에 미치는 영향이 증가하였다. 2. Butanol을 용매로 사용하여 얻은 대왕추출물 분액이 다른 3가지 용매로부터 얻은 대왕추출물보다 세포에 미치는 영향이 크게 나타났고 water를 용매로 사용하여 얻은 추출물이 A498 세포주에 미치는 영향이 가장 낮게 나타났다. 3. Butanol을 추출 용매로 하여 얻은 대왕추출물이 A498 세포주에 미치는 영향이 가장 컸는데 그 추출물에 대한 MTT50, NR50, SRB50값은 각각 0.63mg/m1, 0.65mg/ml, 0.68mg/ml이었고, 가장 영향이 적은 water의 경우 MTT50, NR50, SRB50값은 각각 0.84mg/m1, 0.82mg/m1, 0.80mg/ml이었다. 4. 정량방법 간의 대왕추출물에 대한 반응은 MTT 정량법이 가장 민감하게 나타났다.
메기(Silurus asotus)의 기아 시 생존율, 생식소 중량지수(gonadosomatic index; GSI), 간 중량지수(hepatosomatic index; HSI) 및 장 중량지수(intestinosomatic index; ISI)와 신장세포, 장 상피세포 및 간세포의 조직학적 변화를 조사하였다. 생존율은 섭이군이 92.2±0.47%, 기아군이 74.4±2.59%를 보였으며, GSI, HSI 및 ISI는 기아군에서 가장 낮은 값을 나타내었다(p<0.05). 신장세포 핵의 높이, 장 상피세포 핵의 높이, 간세포 핵의 크기 및 간세포의 크기는 섭이군에서 가장 높은 값을 보였으며(p<0.05), 신장세포핵의 높이, 장 상피세포 핵의 높이 및 간세포 핵의 크기는 기아군에서 가장 낮은 값을 보였다(p>0.05). 멜라닌대식세포(melano-macrophages; MMs)는 기아 동안 신장에서 증가함을 관찰하였다. 신장의 MMs 증가 및 간세포의 수축현상은 메기의 기아 상태를 식별하는 지표로 이용할 수 있으며, 본 연구의 결과는 메기의 영양 상태 확인을 위한 기초 자료로서 의미가 있을 것으로 사료된다.
보리호위축병(BaYMV)에 의한 보리의 생육 피해 및 세포학적 변화를 조사하였다. 보리호위축병에 이병된 포장의 보리는 생육 및 수량 구성요소가 피해를 받은 것으로 조사되었다. 보리호위축병에 의해 간장은 건전주에 비해 25cm 작아져 36%의 간장 단축율을 보였으며, 이 줄기신장의 억제는 $m^2$당 수수와 수당립수 등을 감소시켰다. 이들 생육의 피해로 인해 이병포장에서의 수량은 건전포장에 비해 70%이상 감소된 것으로 조사되었다. BaYMV에 감염된 보리 잎에는 전형적인 Bymovirus의 pinwheel형의 세포내 봉입체의 형성이 확인되었다. 또한 BaYMV는 줄기 신장과 관계가 있는 줄기와 추수도, 그리고 마디조직의 세포 신장에 영향을 미치는 것으로 조사되었다. 특히, 줄기의 세포는 표피세포의 길이나 유관속 조직 크기와 같은 세포 생장에 큰 피해를 받은 것으로 조사되었다. 추수도 조직에서는 섬유조직과 cortex 세포의 크기에서 뚜렷한 차이를 보였으며, 마디 조직에서는 건전주의 조직 전체 크기가 이병주에 비해 1.5배 정도 큰 결과를 보였다. 이들 결과는 BaYMV의 감염은 세포의 신장이 억제에 영향을 미치고, 이는 보리의 줄기 신장과 생육을 억제하게 되어 결국 수량 감소를 일으키는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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