본 연구는 돼지 난포란의 vitrification 동결 시 내동제의 종류 및 농도가 생존율에 미치는 영향과 수정 후 체외발생율을 조사하고자 수행하였다. 1.0, 15, 30 및 40시간 성숙 배양시킨 난포란을 vitirfication 동결보존 후의 MII로의 발생율은 각각 $56.7\%,\;53.3\%,\; 63.3\%,\;65.0\%$였으며, diploid로의 발생율은 $23.3\%,\;18.3\%,\;10.0\%,\;3.3\%$로서 대조군의 ME 단계의 $78.2\%$에 비해 낮게 나타났으며 diploid 단계의 $5.5\%$에 비해서는 높은 체외성숙율을 나타냈다. 체외발생율은 초기의 미숙 난포란일수록 높은 체외성숙율을 나타냈다. 2. 미성숙 난포란을 회수 후 0, 15, 30 및 40시간 성숙 배양시킨 난포란을 vitirfication 동결 후 융해하였을 때 생존율은 각각 $34.0\%,\;26.0\%,\;18.0\%,\; 12.0\%,\;10.0\%$로서 비동결 난포란의 $60.0\%$에 비해 낮게 나타났지만 비교적 양호한 생존율을 나타냈다. 3. 0, 15, 30 및 40시간 성숙 배양시킨 미성숙 난포란을 vitrification 동결 융해 후 수정시켰을 때 체외수정율은 $60.0\%,\;54.0\%,\; 48.0\%,\;38.0\%$였으며, 배반포로의 체외발생율은 각각 $26.0\%,\;18.0\%,\; 8.0\%,\;4.0\%$로서 비동결 대조군의 $78.0\%$와 $38.0\%$에 비해 낮은 체외수정율과 체외발생율을 나타냈다. 4. 돼지 난포란을 EDS와 ETS 액으로 vitrifiestion 동결운해 후 $0\~15$ 시간 배양한 다음 체외수정시켰을 때 체외 수정율과 발생율은 각각 $50.0\%,\;22.0\%$ 및 $46.0\%,\;18.0\%$로서 대조군의 $74.0\%$와 $38.0\%$에 비해 낮게 나타났다.
본 연구는 돼지 인공수정 시 1 회 주입하는 정자농도가 번식성적에 미치는 영향을 구명하기 위하여 활력이 70%이상인 정자수 기준으로 80㎖ 병당 30.0×10/sup 8/80㎖, 25.0, 20.0, 17.5, 15.0, 12.5, 10.0 및 7.5로 농도를 각각 조절하여 12시간 간격으로 2회 인공수정하고 분만율 및 산자수를 조사하였다. 본 실험에 사용된 액상정액은 축산기술연구소 돼지 인공수정 센타의 종모돈중 통일품종 정액을 BTS(Beltsville thawing solution) 보존액으로 혼합하여 5개 농장의 암돼지에 인공수정 하였으며, 정자농도는 광전비색계(Spectronic-20, USA)를 이용하여 측정하였다. 분만율은 72.3%-89.3%로 농도별로 통계적인 유의차는 인정되지 않았다. (중략)
본 연구는 종부형태가 이유한 암돼지의 번식성적에 미치는 영향을 조사하기 위하여 이유후 4-6 일경에 자연발정이 발현되어 수정적기라고 판단되는 암돼지에 12시간 간격으로 각각 자연종부 2회, 인공수정 2회 및 혼합교배(자연종부 l회+인공수정 1회)의 형태로 나누어 종부하고 분만율과 산자수를 조사하였다. 분만율은 자연종부 78.5%, 인공수정 76.3% 및 혼합교배 76.0%로 나타나 종부형태간에 유의적인 차이가 없었으나 총산자수는 자연교배 9.89 두와 인공수정 10.04 두의 단독 종부 형태 보다 혼합종부형태가 10.26두로 높게 나타났다(P<0.01). (중략)
본 연구는 이유한 경산돈의 발정동기화방법이 번식성적에 미치는 영향을 조사하기 위하여 대조구(자연발정), T1(Regumate+PMSG+hCG), T2(PMSG+hCG) 및 T3(PG600)처리구로 발정을 유기한 후 12시간 간격으로 2회 인공수정 하여 수태율, 분만율 및 산자수를 조사하였다. 본 실험에 사용된 액상정액은 축산기술연구소 돼지인공수정센타의 종모돈 5두 정액을 혼합하여 이용하였으며, BTS(Beltsville thawing solution) 보존액으로 1회 주입 정자농도를 3.0$\times$$10^{9}$이 되도록 조절하였다. 수태율은 72구가 95.2%, 73처리구가 93.6%로 발정동기화 유도하지 않는 대조구의 91.3%보다 다소 높은 수태율을 나타내었으나 통계적인 유의차는 없었으며, T1 동기화 방법이 87.2%로 가장 낮은 수태율을 나타내었다(P<0.05). 분만율은 T2처리구가 90.4%로 가장 높았으며(P<0.05), T3구는 수태율은 높았으나 분만율이 가장 낮게 조사된 것은 임신 확인 후 각종 사고로 인한 조기 도태 매각 때문인 것으로 분석되었다. 복당 평균 총산자수는 대조구에 비하여 발정 동기화유도 처리구 모두 증가하였으나 통계적인 유의차는 인정되지 않았다.
본 연구는 체외수정에 의해 생산된 생쥐 배반포기배를 vitrification 방법으로 동결보존하였을때 높은 생존율을 얻기 위한 적정조건을 검토하고자 실시하였다. 배반포기배를 생산하기 위하여, B6CBA F1 (C57BL/6, (표현불가)${\times}CBA/N$, (표현불가)) 계통의 생쥐 미수정란에 $1{\times}10^6$ spermatozoa/ml 농도의 정자로서 수정을 유도하였으며, 이후 $37^{\circ}C$, 5% $CO_2$배양기내에서 96시간동안 체외배양하였다. 배양 4일째의 배반포기배는 발달상태에 따라 early, middle 그리고 hatching blastocysts로 구분하였다. 본 실험에 사용된 동결보존액은 30% Ficoll과 0.5mol의 sucrose가 첨가된 mDPBS 용액에 40%의 ethylene glycol를 첨가한 EFS 40 (Zhu et al., 1993) 이었고, 수정란은 $25^{\circ}C$의 상온에서 먼저 20% ethylene glycol에 노출된 후 EFS 40 용액으로 옮겨 액체질소에 침지하는 2단계 동결법에 의해 동결보존되었으며, 급속융해하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 체외수정율과 배양 4일째 배반포기까지의 배발달율은 각각 89.4%와 86.1%였다. 2. 20% ethylene glycol에서 5분간 평형된 후 EFS 40 용액에 냉동보존된 후 융해된 난자의 생존율은 20% ethylene glycol에 0, 1, 3분간 평형된 난자의 생존율에 비해 유의하게 높았다. 3. 배반포기배를 20% ethylene glycol에서 5분간, EFS 40 용액에 1분간 차례로 노출한 다음 체와배양하였던 바, 배양 24시간째 생존율은 $82.9%{\sim}88.4%$ 였다. 본 연구 결과, 체외수정, 배양된 생쥐 배반포기배는 20% ethylene glycol과 EFS40에 대한 노출만으로는 난자의 생존성에 나쁜 영향을 미치지 않는 것으로 미루어 보아 배반포기배의 초자화 동결이 가능함을 시사하였다. 따라서 동결 융해 후 높은 생존율은 상온에서 난자를 2단계 즉, 20% ethylene glycol에 5분간 평형시킨 후 EFS 40 용액에 노출하여 1분내에 LN2에 직접 침지하는 간편한 동결방법으로 얻을 수 있었다.
미꾸라지 (Misgurnus mizolepis) 정자에 electroporation 처리를 통해 난과 인공수정시킨 후 수정율, 부화율, 초기 생존율 및 유전자 이식 효율을 조사하였다. pRSV/luc을 reporter유전자로 이용하여$0\~1$ 625 V/cm의 field strength와 $0\~1,000$${\mu}F$의 capacitance 범위의 electroporation을 시도한 결과, 실험군간에 수정율, 부화율, 초기 생존율에서 유의한 차이는 나타나지 않았다. 유전자 이식 효율을 PCR 분석으로 조사한 결과, $0\~20\%$로 나타났으며 elertroporation조건에 따라 큰 차이는 관찰할 수 없었다. 그러나 pMT/hGH의 경우, 대조군 및 처리군 모두에서 homology sequence에 의한 nonspecific amplication이 관찰됨으로서 PCR을 이용한 transgene의 검색이 불가능한 것으로 나타났다
위성 항법 보정 시스템(DGPS)을 설치하거나 운영하기 위해서는 시스템 커버리지에 대한 예측이 필요하다. 그러나 기존에 제안된 ITU-R 유효 대지 도전율을 이용하여 커버리지를 분석할 경우, 실제 측정된 결과와 오차가 많이 발생하기 때문에, 본 연구에서는 수정된 유효 대지 도전율 값을 이용하여 DGPS의 기준국 커버리지를 분석하였다. 수정된 유효 대지 도전율은 ITU-R 유효 대지 도전율을 기본으로 하였으며, 예측된 전계 강도와 측정된 전계 강도간의 오차를 최소화하기 위해 통계저인 방법을 이용하여 수정되었다. 다음으로 중파 대역 감쇠 모델과 수정된 유효 대지 도전율을 이용하여 현재 운용중인 DGPS의 서비스 영역을 예측하였으며, 다양한 분석을 통해 시스템의 안정성을 확인하였다.
인간의 태반성 성선자극 호르몬(HCG) 또는 성선자극 호르몬-방출 호르몬 유도체(GnRH-a) 단독 주사와 HCG+GnRH-a, GnRH-a+prostaglandin E sub(2) (PGF sub(2)), GnRH-a+pimozide를 복합적으로 주사하여 성숙한 암컷 쏘가리에서 배란 유도 실험을 하였다. 호르몬과 유도체의 반응 효과는 배란후 인공 수정하여 수정율과 배체형성율을 측정하여 결정하였다. 일반적으로 GnRH-a 실험군이 HCG 실험군에 비해서 수정율과 배체형성율 및 부화율이 높았다. HCG(5,000 IU/kg)+(GnRH-a(10 ${\mu}$g), GnRH-a(10 ${\mu}$g/kg)+PG$F^2$(500 ng/kg) 및 GnRH-a(10 ${\mu}$g/kg)+pimozide(1-5 mg/kg)에서 89% 이상의 높은 부화율을 보였다. 본 연구에서 사용된 성성숙 호르몬과 자극물질로 처리된 모든 암컷에서 배란이 유도되었지만, HCG+GnRH-a+dopamine과 GnRH-a+PG$F_2$+indometacin 처리군에서는 배란이 억제되었다. 이들의 결과는 산란시기에 여러 가지 성성숙 호르몬과 관련된 호르몬과 성성숙 억제물질(GRIF)이 분비된다는 점을 시사한다.
본 연구에서는 동결정액을 활용한 농가에서 사육중인 교잡종 염소의 인공수정 효율을 조사하고자 실시하였다. 교잡종 염소들의 인공수정을 위하여 전기자극을 주어 정액을 채취한 후 동결정액을 조제하고 정자농도, 정자활력, 융해 후 정자의 활력을 조사하였다. 그 결과 교잡종 염소 수컷의 개통별 정액채취량은 2.5~3 ml 내외였고 정액의 농도는 21~25 × 108/ml로 나타났다. 동결된 정액을 융해 하였을 때 정자의 활력도 90% 이상으로 높게 나타났다. 동결정액을 활용하여 교잡종 염소 사육 3 농가에서 인공수정을 실시한 후 임신진단 키트(IDEXX Rapid Visual Pregnancy Test kit)로 임신유무를 조기에 진단한 결과 각 농가별 인공수정 후 수태률은 A농장 45%, B농장 50%, C농장 68%로 조사되었다. 또한 인공수정 후 약 150일 후 출산한 교잡종 염소들의 번식성적을 조사한 결과 C농장이 68%로 분만율이 가장 높게 조사 되었고 A농장이 45%로 가장 낮게 조사되었다. 일반적으로 인공수정 후 수태율과 분만율은 약간의 차이가 나타나는 경향이 있는데 본 실험에서는 인공수정 후 임신을 조기에 진단한 결과와 분만된 개체의 분만율이 동일하게 조사되었다. 본 연구의 결과 동결정액을 활용한 교잡종 염소의 인공수정시 농가별 효율의 차이는 있으나 인공수정 효율이 45~68% 범위로 조사되었다. 본 연구결과는 일반 염소 사육 농가뿐만 아니라 축산연구기관에서 염소의 개량과 번식을 위한 기초 자료로 활용 될 수 있을 것이다.
dbcAMP에 의해 성숙이 억제된 생쥐난자의 수정능을 조사하기 위해 본 실험을 행하였다. dbcAMP로 일시 성숙이 억제되었던 난자를 배양액내에서 정자와 섞고 24시간 배양한 후 발생한 2세포기의 배아형성, 정자의 관입, 전액형성을 조사하여 2세포기로 배아발생이 진척된 것을 수정율의 기준으로 정하였다. dbcAMP를 처리하지 않은 난자는 약 53.3%의 수정율을 보였으며,dbcAMP가 함유되 배양액에서 배양한 후 기본 배양액에서 성숙시킨 난자들의 수정율은 dbcAMP의 처리시간에 비례하여 낮으나, 정자의 관입은 정상적으로 일어났다. 전자현미경적 관찰에 의하면 dbcAMP 처리는 난자의 미세구조에 어떠한 변화도 야기하지 않았다. 따라서 dbcAMP를 사전처리하여 성숙을 억제한 난자라할지라도 어느 정도의 수정능력을 보유하고 있다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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