• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 2002.11a
• /
• pp.72-72
• /
• 2002

조류는 발생학적 특성상 수정과 초기 배발생을 제외한 거의 대부분의 개체발생 과정이 난각 속에서 진행된다. 그러므로 수정란에 생명 공학적 기법을 적용하는데 있어서, 포유류의 경우 여러 생명공학 기법이 적용된 수정란은 초기발생을 위한 체외배양 이후 반드시 모체에 이식되어야 하지만, 조류의 경우 인공적인 체외배양 체계가 확립되어 있어야 생명공학 기법이 적용된 수정란을 개체까지 발생시킬 수 있게 된다. 닭의 난자는 난관 누두부에 배란 후 약 15분내에 정자의 침입을 받아 수정되어 난관 팽대부에 도달하면 1세포기 수정란이 된다. 그 후 수정란이 협부에 도달하면 최초로 분할이 일어나기 시작하여, 방란시에는 그 세포수가 60,000개에 이르게 된다. 한편, 계란의 형성 과정에서는 다량의 난황을 포함한 난자가 난관 누두부로 배란되어 정자와 만나게 되면 수정란으로서 계란 형성이 계속되고 정자와 만나지 못하게 되면 무정란으로서 계란 형성을 계속하게된다. 배란된 난자가 난관누두부를 거쳐 난관팽대부에 도달되면 난자는 농후난백에 의해 둘러싸이게 되고 난관혈부에 도달되면 난각막이 형성되고 수양성 난백이 침적하게 된다. 그 후, 난관협부를 지난 난자는 난관자궁부에 도달되면 20시간이상 그곳에 머물면서 난각형성이 진행된 다음 방란된다. 따라서 수정란에 외래유전자를 미세주입하여 형질전환 닭을 생산하기 위해서는 수정란을 암탉의 난관 내에서 최초 분할되기 전에 외부로 끄집어내어야 하며, 수정란에 외래 유전자를 미세주입한 다음에는 다시 암탉의 난관내로 이식해야 하지만 현재까지 그러한 기술은 확립되어 있지 못하다. 그렇기 때문에 모체의 난관 속에서 일어나는 배 발생과 그 이후 개체까지의 발생을 위하여 인공적인 체외배양 체계가 확립되어 있어야 한다. 따라서 본 발표에서는 형질전환 닭을 생산하기 위한 양질의 1세포기 수정란 획득 방법과 획득된 수정란의 체외 배양방법에 관하여 기술적인 측면에서 고찰 해보고자 하며, 그와 같은 배양 기술을 이용하여 외래유전자를 도입한 일련의 결과에 관하여 보고 하고자한다.

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2001.03a
• /
• pp.65-65
• /
• 2001

본 연구는 칡소 귀세포를 공여핵으로 이용한 체세포 복제송아지 생산에 있어서 배양방법이 배발생 및 배반포 발달율에 미치는 영향과 체세포 복제란의 이식후 수태율에 미치는 영향을조사하여 복제송아지의 생산 효율을 제고하고자 실시하였다. 실험에 공시된 공여핵은 칡소 의 귀세포를 회수하여 10%FBS가 첨가된 DMEM배지에서 3-4일 동안 배양하여 monolayar Confluent 형성 후 0.25% trypsin을 처리하여 준비하였으며 공여세포는 적어도 passage가 5회 이상의 세포만을 사용하였다. 복제수정란의 생산은 18-20시간 동안 체외성숙 된 난자의 핵을 제거하고 공여핵을 주입하여 2.2kv/cm, 10$\mu\textrm{s}$의 전압으로 2회 자극함으로 융합하였으며, 융합된 난자는 5$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ ionomycin에서 4분간, 1.9mM 6-dimethyl aminopurine에서 4시간동안 배양하여 활성화처리를 하였다. 핵이식수정란의 배양은 39$^{\circ}C$, 5%$CO_2$ incubator에서 처리구 I은 CRlaa에서 4일간 배양 후 CR2aa배지에서 배양, 처리구II는 CRlaa에 4일간 배양후 CR2aa배지에 cumulus cell과 공배양, 처리구III은 CR2aa 배지에 camulus cell과 함께 배양하였다. 수정란이식은 발정발현 7일째에 비외과적 방법으로 젖소 미경산우에 이식하였으며 이식란수는 2~4개의 핵이식된 수정란을 이식하였다. 임신진단은 45~60일 사이에 직장검사 및 초음파 진단기를 이용하여 실시하였다. 배양방법에 따른 배발생율은 처리구 I에서 92.2 %(83/90)으로 처리구II와 III의 62.4%(63/101)와 77.8%(144/185)에 비하여 높게 나타났으나 배반포 발달율은 처리구II와III에서 65.1%(41/63)와 50.0%(72/144)로 처리구 I의 30.1%(25/83)보다 높게 나타났다. 각 처리구에 따른 수정란 이식후 수태율은 처리구II와 III에서 공히 20%의 수태율을 나타낸 반면 처리구 I에서는 수태가 되지 않았다. 따라서 체세포 복제수정란의 생산에 있어서 배반포 발달율과 수태율을 높이기 위해서는 단순배양보다 공배양이 더 효과적인 것으로 사료되지만 이런 결과가 복제송아지 생산효율에 있어서도 효과적일지는 향후 더 많은 연구가 있어야 할 것으로 사료된다.

• Journal of Embryo Transfer
• /
• v.21 no.2
• /
• pp.147-156
• /
• 2006

The objective of this study was to supply excellent genetic resources to livestock farms by transferring embryos produced by genetically superior Korean cows (Hanwoo). Eighty Hanwoo donors were superovulated with gonadotropin ($Folltrpin^(R)\;or\;Antorin^(R)$) for 4 days combined with or without progesterone releasing intravaginal device (CIDR) insertion. The collected fresh or frozen-thawed embryos were transferred to 226 farm recipients. In this study, the effect of CIDR insertion in combination with gonadotropin ($Folltrpin^(R)$) treatments initiated at the random stage of estrous cycle on embryo production was evaluated and compared to conventional superovulation protocol. Moreover, the effect of gonadotropin ($Antorin^(R)$) dose in CIDR-treated Hanwoo donors on the embryo yield was determined. In addition, the effects of embryos (fresh vs. frozen-thawed), embryo transfer person, seasons and farms on the pregnancy rate were evaluated. In Hanwoo donors, CIDR insertion in combination with $Folltrpin^(R)$ treatments regardless of estrous detection resulted in increased numbers of total ova (6.5 vs. 5.8) and transferable embryos (3.9 vs. 3.2) compared to the conventional superovulation protocol (p<0.01). In CIDR-treated Hanwoo donors, the higher dose of $Antorin^(R)$ (36 vs. 28 mg) resulted in the increased number of transferable embryos (8.3 vs. 5.4, p<0.05). The embryos (fresh 43.9% vs. frozen-thawed 23.1%) and embryo transfer person (53.9 vs. $0{\sim}16.7%$) significantly affected the pregnancy rate after embryo transfer (p<0.01). These results suggest that CIDR-based superovulation protocol may be effectively used for production of superior Hanwoo embryos and, multiple ovulation and embryo transfer in Hanwoo might be effectively applied for livestock improvement if pregmancy rate with frozen-thawed embryos and embryo transfer skill would be improved.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.26 no.2
• /
• pp.125-132
• /
• 2002

This study was conducted to examine the effects of electric stimulation conditions on in vitro developmental ability of procine embryos after somatic cell nuclear transfer, The porcine ear cell was cultured in vifro for confluency in serum-starvation condition (TCM-199＋0.5% FBS) for cell confluency. The zona pellucida of IVM oocytes were partially drilled using laser system. Single somatic cell was individually transferred into the enucleated oocyte. The reconstructed embryos were electrically fused with 0.3M mannitol. After electric fusion, the embryos were activated and cultured in NCSU-23 medium containing 10% FBS at 39$^{\circ}C$, 5% $CO_2$ in air for 6 to 8 days. Nuclear transferred(NT) oocytes which fused at a field strength of 1.90kv/cm showed a higher (P<0.05) fusion rate(49.5%, 50/101) compared to 2.10 kv/cm(25.8%, 24/93) or 2.50kv/cm(30.3%, 27/89). After electric activation, the cleavage rate of NT embryos was 48.0(24/50), 66.6(16/24) and 70.3% (19/27), respectively and these were not different. There was no significant difference in fusion rate by duration and pulse of electric stimulation. In cleavage rate, however, more NT embryos(76.3%, 45/59) cleaved at 60 $\mu$sec twice than other embryos(49.1 to 56.5%) with different conditions of electric stimulation(P<0.05). NT embryos activated at a field strength of 1.50kv/cm showed a higher developmental rate(9.8%, 5/51) than those embryos activated at 1.25kv/cm(0%) or parthenotes(6.4%, 7/109). These results suggest that some factors such as field strength, duration and pulse of electric stimulation could be affected to in vitro developmental ability of nuclear transplanted porcine embryos.

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 2005.10a
• /
• pp.106-106
• /
• 2005

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 1997.05a
• /
• pp.16-17
• /
• 1997

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 1997.05a
• /
• pp.18-26
• /
• 1997

• 월간낙농육우
• /
• v.30 no.6
• /
• pp.143-145
• /
• 2010

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 2001.05a
• /
• pp.7-8
• /
• 2001

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
• /
• 2006.06a
• /
• pp.71-105
• /
• 2006