식품공정에 있어서 비가열 살균 기술로 개발되고 있는 고전압 펄스 전기장(pulsed electric fields, PEF)을 과실주스의 품질 향상에 응용하고자 pilot-scale의 고전압 펄스 전기장 살균장치를 개발하였으며, 이것을 과실 주스의 모델로 선정한 사과주스의 대표적 오염지표균 또는 품질을 저하시키는 미생물 중 Escherichia coli, Bacillus subtilis, Rhodotorula minuta에 적용시켜 세포의 생리특성을 조사하였다. 내염성, 자외선 흡수 물질, 세포염색, 세포의 회복도, 세포의 표면구조 등을 조사함으로서 PEF의 미생물 생리특성에 대한 영향을 규명하고자 하였다. E. coli, B. subtilis, R. minuta를 40 kV/cm, 84 pulse, $10{\mu}s$ pulse duration의 PEF 조건에서 처리하여 내염성을 조사한 결과 1 log cycle 정도의 생존율 감소를 나타내었다. PEF 처리에 의한 세포 내부 성분의 유출 여부를 살펴본 자외선 흡수물질 측정결과 260 nm, 280 nm에서 모두 PEF 처리 세포가 무처리구에 비하여 현저하게 증가된 흡수물질 농도를 나타내었다. PEF 처리된 R. minuta를 세포 염색하여 관찰한 결과 세포막이 터져서 개열됨에 따라 염색시약이 세포 내, 외부로 고루 염색되어 세포 본래의 형태를 관찰할 수가 없었다. PEF 처리후 세포의 회복도는 무처리구에 비하여 E. coli와 B. subtilis가 약 5시간, R. minuta가 약 8시간 정도 지연된 lag time을 보였다. 그리고 PEF 처리후의 E. coli, B. subtilis, R. minuta는 정상적인 세포와는 달리 세포막이 상당한 손상을 입어 허물어진 상태를 관찰할 수 있었다.
저자들은 최근 면역기능이 저하되지 않은 50세 남자환자의 폐장에 국한되어 발생한 효모균증을 세침흡인 도말소견으로 진단하고 이의 세포도말 소견을 보고하는 바이다. 세침흡인 도말배경내에는 녹색 내지는 염색되지 않으며 굴절되어 보이는 다양한 크기의 둥글거나 난원형이면서 그 주변에 투명한 운륜을 갖는 균체가 다수 산재되어 관찰되었다. 균체의 크기는 $5{\sim}15{\mu}m$이었으며 Gomori methenaminesilver 염색상 발아성 홀씨가 잘 관찰되었다. Mucicarmine 염색상 피막은 연분홍색으로 염색되었다.
CHO 세포를 재료로 ENU와 MNU를 여러농도로 처리한후 시간 경과에 따른 염색체 이상율을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) ENU와 MNU에 의한 염색체 이상 빈도는 처리 후 시간의 경과와 농도에 따라 상이한 현상을 나타냈다. (2) ENU 처리군에서는 염색체 이상형은 염색분체 절단이 대부분이었으나 고농도군 ($10^-3 M$)에서는 처리 후 24시간에 염색분체 교환이 염색분체 절단을 능가하였다. (3) MNU 처리군에서는 염색체 이상형은 염색분체 절단이 대부분이었으나 $10^-4$ M 이상에서는 처리후 12시간부터 염색분체 교환이 염색분체 절단을 능가하였다.
본 연구는 체외생산된 소 배반포기배의 inner cell mass (ICM) 세포에서 epidermal growth factor-receptor (EGF-R)의 발현 유무를 immunosurgery와 indirect immunofluorescence (간접 면역 형광방법)을 이용하여 조사하고자 실시하였다. 본 실험에 사용된 ICM 세포는 체외수정 후 7∼8일째에 회수된 소 배반포기배로부터 immunosurgery 방법을 실시하여 얻어졌으며, 회수된 ICM세포는 live/dead 염색방법을 통한 생사 유무와 EGF-R 발현 유무 조사에 공시되었다. 특히, 배반포기배에 대한 immunosurgery를 위해 trophectoderm 세포에 대한 rabbit anti-bovine trophectoderm cell antibody (RABTE)를 제조하여 사용하였다. 결과를 요약하면 다음과 같다. ICM세포의 회수율은 RABTE와 guinea pig serum (complement)에 각각 15∼30분과 15∼60분동안 처리했을 경우 16.7∼74.2%였으며, 또한 처리시간이 각각 30분과 30분일 때 가장 높은 회수율(74.2%)을 얻었다. Immunosurgery 후 얻어진 ICM세포의 생존 유무를 조사하기 위해 live/dead 염색 방법을 이용하였던바, ICM세포의 생존율은 complement가 60분 처리된 군(69.3%)을 제외한 모든 처리군에서 84.0∼91.6%의 높은 생존율을 나타냈다. 또한, 회수된 ICM세포에 대한 EGF-R의 존재를 확인하였다. 따라서, ICM세포에서의 EGF-R의 발현은 인위적으로 첨가된 EGF의 이용 가능성을 높임으로서 체외에서의 착상전 배 발달을 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.
지질성 종자(해바라기, 피마자, 잣나무)와 전분성 종자(완두, 옥수수)를 대상으로 배유와 자엽세포내의 저장지질의 형성, 분포 및 구조적 변화 등과 지질가수분해효소의 활성부위 및 세포내 분포양상 등을 세포화학적 방법을 이용하여 조사하였다. 채종후의 지질 및 전분성 종자의 배유와 저장성 자엽세포에는 구형의 단백과립과 지질소구인 스페로솜, 전분과립 등의 저장물질이 널리 분포하였으며 세포내소기관은 드물게 관찰되었다. 활면소포체에서 형성되어 방출된 소포들과 스페로솜의 초기 단계로 여겨지는, 전자밀도가 낮은 막성의 과립들은 염색상이 스페로솜의 그것과 동일하였다. 조면소포체에서 방출된 전자밀도가 높은 과립들은 원형질막의 인접부위에서 관찰되었다. 지질염색반응 결과, 일반적인 미세구조의 염색상과는 상이하게 단백과립내의 단백질보다는 구형의 스페로솜의 전자밀도가 높고 균일함이 확인되어 스페로솜의 주요 구성성분은 지질임을 알 수 있었다. 스페로솜과 활면소포체에서 방출하는 물질을 함유한 소포는 염색상이 동일하였다. 지질가수분해효소는 분해과정이 진행중인 스페로솜의 기질과 막 주변부, 그리고 원형질막 부근에서 강한 활성을 보였다.
목 적 : 인유를 탐식한 폐포 대식세포는 면역세포화학 반응에 관여하며, 기존의 염색법에서보다 면역세포화학기법에 의해 잘 관찰될 수 있음을 규명하여, 인유 흡인을 확인할 수 있는 진단에 활용하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 총 64마리의 백서를 대상으로 소량(0.05 mL)의 모유를 코를 통하여 기도에 흡인시킨 후 지정 시간별로 기관을 도관한 다음, 기관지폐포 세척을 실시하여 얻은 세포에 대하여 면역세포화학적 염색과 Oil Red O 염색을 실시하고 폐포 대식세포들의 탐식 정도를 관찰하였다. 결 과 : 인유 흡인 2시간 후에 Lactalbumin에 대한 양성 대식세포가 관찰되었으며 8시간에 최고이었고 24시간에 감소하였으며 48시간에도 양성 대식세포가 관찰되었다. 그러나 Oil Red O 염색에서 폐포 대식세포들의 검출률은 미미하였다. 결 론 : 본 실험의 결과는 소량의 인유 흡인을 면역세포화학적 기법에 의하여 기관지폐포 세척 액에서 검출할 수 있다는 것을 시사하는 것이었다.
본 연구의 목적은 세포핵의 3차원 염색질 질감 특성값이 암의 진행정도를 인식하는데 있어 유용한 특성값인지 평가하는데 있다. 특히, 제안한 방법이 악성이라고 진단된 세포진 도말 표본에서 정상으로 보이는 세포의 염색질 패턴에서의 미세한 차이를 인식할 수 있는지 살펴보고자 한다. 분류등급 정상(Normal), 저등급 편평 상피내 병변(LSIL, Low grade Squamous Intraepithelial Lesion), 고등급 편평 상피내 병변(HSIL, High grade Squamous Intraepithelial Lesion)에서 각각 100개씩의 세포 볼륨데이터로부터 3차원 GLCM(Gray Level Co occurrence Matrix)에 기반한 질감 특성값과 3차원 Wavelet 변환에 기반한 질감 특성값을 추출하고 분류기를 생성한 후 각 분류기에 대한 분류정확도를 비교하였으며, 2차원 세포진 영상에서의 세포핵 질감 특성값과 비교하기 위해 동일한 실험 볼륨데이터의 투영된 2차원 영상을 이용하여 같은 방법으로 2차원 세포핵 질감 특성값을 추출하고 분류기를 생성한 후 분류정확도를 비교하였다. 2차원 세포핵 질감 특성값과의 비교연구에서 3차원 세포핵 질감 특성값이 등급별 분류에 있어 보다 효율적인 것을 확인 할 수 있었으며 이는 3차원 염색질 질감 특성값이 자궁경부 세포의 정량화에 대한 정확성과 재현성을 개선할 수 있음을 의미한다.
본 연구에서는 흰쥐 발바닥에 complete Freund's adjuvant(CFA)를 투여한 후 염증부위에서 관찰되는 비만세포의 분포양상 및 미세구조를 zinc selenium autometal-lography$(AMG^{ZnSe})$로 염색한 후 광학 및 전자현미경으로 관찰하였다. 광학현미경으로 관찰된 CFA투여에 의한 염증성 반응은 피하층에 국한되어 있었으며, zinc함유 비만세포는 주로 피하조직의 혈관 주변에 분포하고 있었다. AMG 염색에 의한 흑갈색을 띠는 과립이 세포질을 채우고 있었으며, 많은 비만세포의 경우 세포막이 파괴되어 과립이 주위조직으로 퍼져 관찰되었다. 전자현미경으로 관찰된 zinc함유 비만세포는 불규칙한 외형을 띠었으며, 표면에는 작은 돌기들이 관찰되었다. AMG염색에 따른 은입자(silver grains)가 세포질내 과립에 국한되었으며, 높은 전자 밀도의 동질성 기질로 구성되어 있었으며, 경계막으로 싸여 있었다. 세포질내 세포소기관 중에서 특히 골지 복합체가 잘 발달되어 있었으며, 형질내세망과 사립체는 비교적 적게 가지고 있었다. 이들 세포의 핵은 비교적 작고 둥글고, 세포의 중심부에 위치하였으며, 이질염색질로 이루어져 있었다.
Tbr2는 T-box family 전사인자의 하나로써 뇌의 발달, 전구세포의 증식, 그리고 CD8+ T 세포와 자연살상세포의 분화와 기능에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 마우스에서 pilocarpine을 이용하여 경련중첩증을 유도한 후 나타나는 병리기전에 Tbr2의 연관성을 확인하였다. 경련중첩증은 해마의 CA3, hilus 그리고 조롱박피질 등에서 뚜렷한 신경세포의 손상을 유발하였다. 흥미롭게도 Tbr2를 이용한 조직 염색에서 경련중첩증 2일 후에 CA3와 조롱박피질에서 면역반응성이 뚜렷하게 증가하는 것을 관찰하였다. 또한 CA3와 조롱박피질에서 Tbr2를 발현하는 세포는 미세아교세포와 단핵구, CD8+ T세포 또는 자연살상세포 등 백혈구의 표지물질인 CD11b 와 이중염색되는 것을 발견하였다. Tbr2와 CD11b에 동시에 염색된 세포는 아메바 모양의 형태를 갖추고 있는 것을 발견하였다. 게다가 혈관 내피세포에서 발혈되는 platelet endothelial cell adhesion molecule-1(PECAM-1)과 이중 염색한 결과 Tbr2를 발현하는 세포가 CA3 지역의 혈관내에 다량 존재하는 것을 확인하였다. 이상의 결과를 종합할 때 Tbr2를 발현하는 세포는 뇌 조직으로 이주하는 백혈구일 가능성이 높음을 보여준다. 이러한 결과는 경련중첩증에 따른 신경병리기전에 Tbr2가 관여할 가능성이 높음을 처음으로 제시하였다.
토양으로부터 세포의 adcnosinedeaminase를 생산하는 두종의 방선균 J-845S주와 J-326TK 주름 분리하여 각각 Streptomycs sp. J-845S와 Nocardioides sp. J326TK로 동정하였다. Streptomyces sp. J-845S는 그람염색 양성, 비항산성균으로 기균사의 흰색계열의 간상형의 비운동성의 포자를 형성하였으며, 포자의 표면은 평할하였고 나선상의 포자연쇄를 형성하였다. 균사체의 분자는 양호하였다. 세포벽 구성성분을 분석한 결과 LL-diaminopimelic acid를 함유하는 cell wall type I 이었으며, phospholipid type II였다. Nocardioides sp. J-326TK는 그람염색반응 양성, 항산성염색반응 음성이었으며, 균사체는 불규칙한 간상 또는 구사으이 절편으로 분절되었다. 기균사의 분자는 그다지 인정되지 않았으며, 포자형태의 긴 elements의 표면은 평할하였다. 세포벽 구성성분을 검토한 결과 cell wall type I과 phospholipid type I으로나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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