• 대한약리학회지
• /
• 제32권3호
• /
• pp.433-444
• /
• 1996

본 연구에서는 열충격에 의한 세포내 단백질 변성을 정량하는 방법을 소개하고 있다. Thiol compound인 diamide [azodicarboxylic acid bis (dimethylamide)]는 단백질변성시 노출된 sulfyhydryl기를 cross-link 시킨다. 정상 상태에서는 노출되지 않는 sulfyhydryl group이 변성된 단백질에서는 노출되기 때문에 diamide에 의한 cross-linking이 선택적으로 일어날 것이다. 그러므로 diamide는 변성된 단백질을 "trap"하는 작용을 할 수 있다. 본 연구진은 세포내 열충격후 고분자 단백질 응집물 (high molecular weight protein aggregate, HAA)이 나타남을 비환원 (non reducing) SDS-PAGE에서 관찰하였고 이를 gas flow counter로 scanning하여 정량하였다. 실험 결과 세포에 열충격을 가한후 diamide를 처리하면 HMA가 열충격 용량의존적으로 증가함을 관찰하였다. 이는 HMA의 양을 측정함으로써 열충격에 의하여 변성된 단백질을 정량할 수 있음을 반증한다. 열내성이 유도된 세포와 그렇지 않은 세포를 비교하였을 때 열내성이 유도된 세포에서는 열충격에 의한 HMA의 형성이 억제됨을 관찰하였다. 열충격후 정상온도에서 회복기를 주면서 시간대별로 diamide를 첨가하고 이때 형성된 HMA양을 측정하여, 단백질 원형복구의 역동성을 실험하였다. 그 결과, HMA는 열내성의 유도 여부와 상관없이 빠르게 없어짐을 알 수 있었다. 그러나 열내성이 유도된 세포에서 HSP70 단항체를 electroporation에 의하여 투여하였을 때 HMA가 현저히 증가하였고, 이는 열내성이 유도된 세포에서는 HSP70의 증가에 의하여 HMA생성이 억제되었음을 나타낸다. HSP70 항체를 이용하여 면역침전을 시행한 결과 변성된 세포내 단백질이 HSP70과 같이 침전됨이 관찰되었다. 이 결과는 HSP70 단백질이 변성된 단백질과 일시적으로 결합하여 정상 상태로 돌아가거나 복구될 수 있도록 도와줄 수 있음을 시사한다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제40권4호
• /
• pp.339-347
• /
• 2012

동물세포배양 유래 생물의약품 생산 공정에서 다양한 외래성 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성 보증을 위한 바이러스 검출시험이 필수적이다. Reovirus (Reo), bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine parainfluenza virus (BPIV)는 동물 세포주와 동물 세포 배양 공정에 오염되는 대표적인 RNA 바이러스이다. 세포배양 유래 생물의약품의 안전성을 확보하기 위해, 세포주, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 Reo, BVDV, BPIV를 동시에 검출할 수 있는 Multiplex Reverse Transcription (RT)-PCR 시험법을 확립하였다. Reo, BVDV, BPIV에 특이적인 primer를 선별하였으며, multiplex RT-PCR 시험법을 최적화하였다. Reo, BVDV, BPIV를 동시에 검출할 수 있는 multiplex RT-PCR 시험법의 민감도는 각각 $7.76{\times}10^2\;TCID_{50}/ml$, $7.44{\times}10^1\;TCID_{50}/ml$, $6.75{\times}10^1\;TCID_{50}/ml$이었다. 확립된 multiplex RT-PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 각 바이러스를 오염시킨 CHO 세포에서 검출 시험을 실시한 결과 각 바이러스를 감염시킨 CHO 세포와 세포배양 상청액에서 각 바이러스를 검출할 수 있었다. 위와 같은 결과에서 확립된 multiplex RT-PCR시험법은 세포주, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 Reo, BVDV, BPIV를 동시에 검출할 수 있는 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.

• 대한치과교정학회지
• /
• 제34권6호
• /
• pp.506-513
• /
• 2004

본 연구는 하치조신경의 수술적 절단이 치주인대공간에서의 파골세포에 미치는 영향을 평가하기 위하여 시행하였다. 이를 위하여 실험동물을 젊은 쥐 군 과 성 쥐 군으로 구분하여 좌측 하악골에는 하치조신경절단을 시행하여 실험측으로, 우측하악골은 가수술측으로 사용하였다. Bundle 골 표면에 위치한 파골세포의 수 그리고 파골세포의 골 흡수 활성도를 조직 형태적으로 측정하였다. 또한 Substance P 면역반응 신경섬유의 분포 변화를 치주인대와 치 수조직에서 평가하였다. Substance P 면역반응 신경섬유는 양군 실험측에서 고갈됨으로서 하치조신경의 수술적 절단이 성공적이었다는 것을 확인 할 수 있었다 실험측에서 파골세포의 수가 젊은 쥐 군 과 성 쥐 군 모두에서 유의하게 감소하였다(p<0.01과 p<0.05). 그러나 파골세포의 골 흡수 활성도는 양군 모두에서 실험측과 가수술측 사이에 차이를 나타내지 않았다(P>0.05). 성 쥐 군에서 파골세포의 수가 젊은 쥐 군에 비해 유의하게 감소되었으며 (p<0.01), 파골세포의 골 흡수 활성도에서는 변화가 없었다(p>0.05). 이들 결과를 통하여 감각신경인 하치조신경의 절단과 연령증가는 치주인대 공간에서 Bundle골 표면의 파골세포의 수를 감소시켰으며 골 흡수 활성도에는 영향을 주지 않는 것으로 나타났다.

• 한국수산과학회지
• /
• 제32권4호
• /
• pp.420-426
• /
• 1999

한국 양식산업에서 중요한 어종인 넙치 (Paralichthys olivaceus) 포르말린으로 처리한 E. tarda를 항원으로 하였을 때의 면역반응 분석을 위하여 ELISPOT 기법을 적정화시킨 후 넙치의 각 장기에 있는 총 항체생성세포와 특이 항체생성세포를 계수하는데 응용하고자 하였다. 전신과 비장의 항체생성세포를 2.5시간 이상 96 well plate에 배양하면 충분히 분석이 가능하였다. 그러나 총 또는 특이 항체생성세포 분석을 위하여 과량의 토끼 항 넙치 면역글로불린 또는 E. tarda 항원을 plate에 coating하는 것은 오히려 ELISPOT법의 감도를 감소시키는 것으로 나타났다. ELISPOT법의 특이성은 단백질 합성 억제제인 cycloheximide를 처리한 임파세포에서 총 항체생성세포가 발견되지 않는 것으로서 입증할 수 있었다. 특이 항체생성세포 수의 최대치는 면역 3주째에 나타났으며 이후 계속 빠르게 감소하여 7주째는 거의 발견되지 않았다. 이러한 반응은 신장과 비장에서 유사하게 나타나 임파장기에 따른 차이점은 발견할 수 없었다. 면역 후 2주와 3주 사이에 혈청내 특이 항체량 또한 빠르게 증가하여 ELISPOT법으로 분석된 특이 항체생성세포 수의 변화와 일치함을 발견할 수 있었다. 그러나 증가된 혈청내 특이 항체량이 면역 5주부터 실험 종료 시점까지 계속 높은 수준으로 유지되고 있는 것은 급격한 감소를 보이는 특이 항체생성세포의 동력학적 변화와는 명확히 구별되는 점이었다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제36권9호
• /
• pp.1099-1105
• /
• 2007

오만둥이의 세포독성 효과를 알아보기 위해 신선한 오만둥이를 분쇄하고 동결건조하여 분말 형태로 제조한 후 시료 5 g당 메탄올, 에탄올, 아세톤, 물을 각각 100 mL씩 첨가하여 용매별 추출물을 제조하였다. 이 용매별 추출물을 대장암 세포주인 HT-29 cell에 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 각각 처리하여 형태학적인 변화를 관찰한 결과 대조군에 비해 아세톤 추출물에서 세포의 수가 감소하고 그 형태가 응축되는 현상을 관찰할 수 있었고, 이 결과를 바탕으로 100, 250, 500 ${\mu}g/mL$ 농도로 MTT reduction assay를 실시한 결과 아세톤 추출물을 500 ${\mu}g/mL$ 농도로 처리했을 때 6%의 암세포만이 생존하는 것으로 나타나 형태학적인 실험결과와 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 아세톤 추출물을 헥산, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트 그리고 물로 분획물을 조제하여 대장암 세포주인 HT-29 cell에 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 각각 처리하여 형태학적인 변화를 관찰한 결과 헥산 분획물에서 세포의 형태변화가 가장 크게 나타났으며 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 MTT reduction assay를 실시한 결과에서도 5.1%의 암세포만이 존재하는 것으로 나타나 헥산 분획물이 가장 높은 세포독성 효과를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 다른 암세포주에 대한 영향을 알아보기 위해 헥산 분획물을 SW620, HeLa 및 MCF-7 세포주에 농도별로 처리한 결과, 250 ${\mu}g/mL$ 농도에서 10% 내외의 암세포 생존율을 보여 높은 세포독성 효과를 나타내었으며 특히, HeLa 세포주에서는 생존율이 5.8%로 나타나 매우 높은 활성을 보였다. 이상의 결과를 종합하여 미루어 짐작해 볼 때 오만둥이에 함유된 불포화 지방산 등의 지용성 물질이 암세포주의 성장 억제에 중요한 역할을 하리라 생각된다. 따라서 오만둥이 추출물은 다양한 암세포주에 대해 활성을 가지는 해양생물로서의 잠재적인 가능성을 가진다는 것을 확인할 수 있었다.

• 한국약용작물학회지
• /
• 제7권2호
• /
• pp.129-137
• /
• 1999

Fritillaria pallidiflora의 전분체 미세구조와 신구인경의 세포간 대사물질의 이동을 전자현미경으로 관찰하였다. 기존의 인경과 새로 형성된 인경세포내 전분체는 내부 막구조에 있어서 뚜렷한 차이를 나타내었을 뿐만 아니라 대사물질의 세포간 이동도 활발히 이루어지고 있음을 관찰할 수 있었다. 엔도사이토시스와 엑소사이토시스 현상이 세포막에서 관찰되었으며 대사물질의 세포간 이동을 위해 원형질 연락에 있어서 염류수송 경로가 형성됨을 알 수 있었다. 또한 일단의 소포체들이 원형질 연락의 말단에 위치하고 있었는데 이는 세포간 물질 이동에 이들이 관여하고 있음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 F. pallidiflora의 신구 인경형성과 발달에 미치는 기작을 연구하는데 유용하게 이용될 수 있는 것으로 생각된다.

• Applied Microscopy
• /
• 제35권2호
• /
• pp.73-80
• /
• 2005

사람 무릎관절의 윤활막을 대상으로 정상과 퇴행성관절염 시의 윤활막의 변화와 tenascin의 발현을 면역전자현미경적 방법으로 비교, 관찰한 결과 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다. 1. 정상의 윤활막과 비교하여 퇴행성관절염 시에 윤활막이 두터워지는 것은 주로 윤활분비세포의 수적인 증가에 의한 것임을 알 수 있었다. 2. Tenascin에 대한 면역금의 관찰 결과 정상의 윤활막을 구성하는 세포에서는 면역금의 표지가 관찰되지 않았다. 3. 퇴행성관절염 시 윤활막의 윤활분비세포 과립세포질 세망에서 면역금의 표지가 관찰되어 tenascin의 분비세포가 윤활분비세포임을 확인할 수 있으며, 윤활세포 사이의 바탕질의 아교섬유에서도 tenascin의 표지가 관찰되었다. 이상의 결과를 종합해 보면, 퇴행성관절염 시에 윤활막이 두터워지는 것과 병변의 진행과정에, 윤활분비세포의 수가 증가와 tenascin의 발현 증가가 관련성이 있는 것으로 생각된다.

• 한국식품저장유통학회:학술대회논문집
• /
• 한국식품저장유통학회 1994년도 정기총회 및 제4차 학술발표회
• /
• pp.7-8
• /
• 1994

한국산 표고버섯 균사체를 액체배양하여 천연항암물질로 알려진 단백다당체를 추출한 후 그 물질의 특성에 대하여 검토하였다. 균사체의 최적 재양조건을 TGY배지로 조사한 바 온도 $25^{\circ}C$, 배양초기 pH4.0, 교반속도 300rpm, 균사배지 접종량을 10.0%로 하고 산소 통기량을 1.0volume of ait/volume of medium/mimute으로 하였을때 가장 양호한 조건이였으며, 대량생산 하기 위한 SCM배지에서 최적의 C/N비는 13.1오써 7일간 배양하였을때 18.8g/L의 균사령을 얻었으며, 이때 생산수율은 0.46으로 나타났다. 발효가 끝난 배양액에서 균사, 여액 그리고 배양액의 전체에서 단백다당체를 분리한 결과 각 분획에서 단백다당체가 각각 0.55%, 0.12%, 0.69%가 회수되어 배양액 전체에서 단백다당체를 추출하는 것이 바람직하며, 추출방법으로 열수추출, glass bead추출 및 cellulasa처리를 하여 단백다당체의 수율을 비교한 결과 0.25-0.5mm glass nead로 30분간 균사체를 분쇄한 다음 열수추출을 1시간을 하였을때 990mg/100ml의 단백다당체를 얻을 수 있었다. 고단백다당체를 1차 단백질 가수분해 효소로 분해하고, EDAE cellulose 및 Sepadex G-100 column chromatography로 정제한 후, TLC/FLD, ultracentrifugation한 결과 순수한 물질임을 알 수 있었다. 단백다당체의 항암효과 조사중 in vitro배양에서 $P_{388}$과 $L_{1210}$에 대한 단백다당체의 활성단위 1 unit는 1mg정도였으며, 인체의 장암세포인 HCT-48, HRT-18, HT-29 밀 간암세포인 Hep G2 대한 생육저해 단위는 각각 4.4, 3.6, 6.6, 2.6mg이었다. HCT-48과 Hep G2 세포의 크기 분포도는 대조군에 비하여 시간이 경과함에 따라, 그리고 단백다당체의 농도가 증가함에 따라 peak가 작은 size 쪽으로 이동하였다. 또, 단백다당체를 첨가 배양한 HCT-48과 Hep G2세포의 현미경 관찰에서 본래의 암세포 형태가 변형되고 크기가 감소하며 세포사이의 경계막이 흐트러지면서 세포수가 감소하고 사멸하였다. In vivo실험에서는 대조군보다 단백다당체를 첨가한 군에서 항체 형성능력이 대조군에 비하여 형질세포가 2배로 증가하였다. 단백다당체의 화학적 성분 분석에서 다당함량은 46.1%이면 구성다당류는 glucose, galactose, mannose, xylose로 구성되었고 단백질의 함량은 7.28%이며, 구성아미노산은 15종의 아미노산으로 되었다. 또 무기물은 Na, K, Zn, Ca등의 순으로 이루어 짐을 알 수 있었다.

• 대한한방부인과학회지
• /
• 제18권1호
• /
• pp.45-54
• /
• 2005

이 연구는 SKBR3 인간 유방암세포주에 대한 귀전우 메탄올추출물(CME)의 증식억제 효과, 세포사 유발 효과 및 항산화 활성을 확인하기 위해 이루어졌다. SKBR3 유방암세포주는 48시간동안 다양한 농도($0{\sim}20{\mu}g/m{\ell}$)의 CME가 제공된 곳에서 배양되었고, MMT 측정법을 이용하여 세포생존율을 평가하였다. CME의 50%에서 효과를 나타내게 하는 약물농도인 $ED_{50}$ (effective dose 50%)은 $6.5{\pm}0.3{\mu}g/m{\ell}$) 이며, 투여량이 증가함에 따라 농도에 의존하여 세포증식이 억제되는 것으로 나타났다. 또한 CME의 증식억제 효과는 유방암세포주의 세포사와 관련됨의 세포의 형태학적 변화와 올리고뉴클레오솜 DNA 파편의 확인을 통해 알 수 있었다. 또한 다양한 농도와 배양시간에서 CME가 ROS의 생산을 억제한다는 것을 확인할 수 있었다. 이런 결과들은 귀전우의 메탄올추출물이 SKBR3 인간 유방암세포주에 대해 강력한 증식억제 효과와 강한 항산화 효과를 나타낼 뿐만 아니라 세포사를 유도하는 효능을 가지고 있음을 시사한다. 이러한 효능은 약물에 대한 노출시간과 투여량에 의존하였다. 따라서 귀전우는 다양한 기전에 의해 유방암 세포에 대한 억제효과를 가질 수 있을 것으로 인식할 수 있다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제29권4호
• /
• pp.371-380
• /
• 1991

간흡충 피낭유충의 경구감염 또는 간흡충 성충의 대사산물의 피내주사로 감작한 근교계 nude 및 DS 마우스의 복강삼출세포와 혈청이 간흡충 감염에 대한 면역을 동승(syngeneic) 마우스에 이입하는지 여부를 구명하기 위해 대조군 마우스에서의 EpG, 부하충체수 및 모장당 plaque 형성세포수를 기준으로 감작군에서의 그 성적과 비교하였다. Challenge 감염후 EpG의 변동은 감작군과 비감작 대조군 마우스와 nude 및 DS 마우스와의 사이에 유의한 차를 인정할 수 없었다. 간흡충 성충의 회수률에서는 감작군과 비감작 대조군 사이에 유의적 차를 인정할 수 없었으나 nude 마우스는 DS 마우스에 비하여 다소 높은 회수률을 나타내었다. 비장에서 plaque 형성세포는 복강 삼출세포 $5{\times}10^5$와 Group II DS 마우스의 혈청 0.1 ml를 복강에 감작한 제4군에서만 소수 검출할 수 있었다. 이상의 성적으로 미루어 보아 세포성 면역계에 결손이 있다고 알려진 근교계 nude 및 DS의 복강삼출세포와 혈청에 의해서는 간흡충에 대한 면역이 이전되지 않음을 확인하였다.