• Journal of Acupuncture Research
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• v.26 no.3
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• pp.49-58
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• 2009

목적 : 본 연구는 봉약침의 주요성분인 멜리틴이 전립선 암세포주인 DU-145 세포성장에 어떤 영향을 미치는지를 알아보기 위하여 시행하였다. 방법 : 멜리틴이 DU-145의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위한 cell viability 측정으로는 WST-1 assay를, 세포자멸사의 관찰에는 DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole)와 TUNEL staining assay를 시행하였으며, 세포자멸사 조절단백질(calpain, Bax, caspase-3, -9, cleaved caspase-3, cleavaged PARP, cleaved caspase-9, Bcl-2, XIAP, cIAP2, Akt, p-Akt, MMP-2, MMP-13)의 관찰을 위하여 western blot analysis를 시행하였다. 결과 : 1. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었다. 2. 세포자멸사 관련 단백질 중 분리된 caspase-3, caspase-9은 유의한 증가를, Bcl-2, p-Akt, XIAP, cXIAP는 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 멜리틴이 인간 전립선암세포주인 DU-145의 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 나타낸 것으로, 전립선암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 도움이 될 것으로 기대된다.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.25 no.2
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• pp.59-74
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• 2008

목적 : 이 연구는 봉약침의 봉독과 그 주요성분인 멜리틴이 $NF-{\kappa}B$의 활성억제와 세포자멸사 관련 단백질의 발현 조절을 통하여 세포자멸사를 유도하고 전립선 암세포주인 LNCaP 세포의 성장을 억제하는지를 확인하고 해당 기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 LNCaP의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay, CCK-8 assay를 시행하였고, 세포자멸사의 관찰에는 DAPI, TUNEL staining assay를 시행하였으며, 세포자멸사 조절단백질의 변동 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 $NF-{\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA를 시행하였으며, LNCaP에서 봉독이나 멜리틴과 $NF-{\kappa}B$의 상호작용을 관찰하기 위해 transient transfection assay를 시행 시 세포생존율과 $NF-{\kappa}B$의 활성 변동을 측정하였다. 결과 : LNCaP 세포에 봉독이나 멜리틴을 처리한 후, 전립선암세포의 성장, 세포자멸사의 유발, 세포자멸사 관련 단백질의 발현, $NF-{\kappa}B$의 활성, $NF-{\kappa}B$의 p50 치환 후 $NF-{\kappa}B$의 활성과 LNCaP 세포 증식에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. LNCaP 세포에서 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었고, 세포자멸사 관련 단백질 중 분리된 PARP, caspase-9, Bax는 유의한 증가를, Bcl-2, p-Akt, MMP 13, XIAP, cXIAP는 유의한 감소를 나타내었다. 2. LNCaP 세포에서 봉독이나 멜리틴을 처리한 후 $NF-{\kappa}B$의 활성의 유의한 감소를 나타내었다. 3. LNCaP 세포에서 $NF-{\kappa}B$ p50를 치환하여 작용기를 없애고 봉독이나 멜리틴을 처리하였을 경우에도 $NF-{\kappa}B$의 활성의 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 봉독이나 멜리틴이 $NF-{\kappa}B$의 활성 억제를 통하여 인간 전립선암세포주인 LNCaP의 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 입증한 것으로 전립선암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 도움이 될 것으로 기대된다. 다만 그 기전에서 봉독이나 멜리틴은 기존연구와 달리 $NF-{\kappa}B$ p50의 작용기와 직접적으로 상호작용을 하지는 않는 것으로 보이므로 심화 연구를 요한다.

• The Journal of the Korean life insurance medical association
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• v.25
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• pp.49-62
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• 2006

생명공학의 시대로 일컬어 지고 있는 오늘날, 재생의학 분야에서는 난치성 질환 치료를 목적으로 활발한 연구가 진행되고 있다. 특히, 줄기세포를 이용한 세포 대체치료 관련 연구는 최근 국내 황우석 박사의 체세포 핵이식 배아세포주 확립에 이르기 까지 괄목할 만한 발전을 보여 주고 있다. 이와 관련해 생명보험산업에 적잖은 파장이 예상되며, 생명보험사 내부적으로 기존에 판매된 상품의 사차손 관리와 함께 급속도로 발전하는 줄기세포 연구에 직접적으로 대응하는 상품개발, 언더라이팅, 지급 심사 등 보험사 내외에서의 전방위적인 변화가 필요하다는 문제 제기가 있다. 줄기세포란 조직 분화 과정에서 볼 수 있는 세포이며 근육 뼈 뇌 피부 등 신체의 어떤 기관으로도 전환할 수 있는 만능세포로서, 간 폐 심장 등 구체적 장기를 형성하기 이전에 분화를 멈출 배아 단계의 세포를 말한다. 한편, 성체줄기세포는 조직이나 기관의 분화된 세포들 사이에서 발견되는 미분화 세포로써, 자기 스스로 증식할 수 있으며, 조직이나 기관의 특수한 기능을 가지고 있는 세포로 분화할 수 있는 능력을 가진 신체줄기세포를 말한다. 배아줄기세포와 생체줄기세포를 통한 장기이식 등 난치병 정복은 윤리적, 사회적으로 많은 논란이 예상되며, 기술적으로도 해결해야 할 문제점들이 산적해 있기 때문에 아직은 요원한 것이 사실이다. 현재 유럽 대부분의 나라와 미국에서는 인간 배아의 복제가 금지되어 있으며, 일본 정부는 연구용 배아 복제를 제한적으로 허용하고 있다. 하지만, 우리 나라의 경우 2005년 1월에 '생명윤리 및 안전에 관한 법'이 발효되었지만 정부는 관련 부작용에 대한 깊은 고찰 없이 전폭적인 지원들 약속하고 있는 실정이다. 줄기세포 연구의 발달로 인해 인류가 난치병 치료의 첫 장을 열었다고 하더라도 그 영향이 당장 보험사에 미친다고 할 수는 없다. 왜냐하면 앞으로 이러한 신기술이 실제 의료행위에 적용되기 위해서는 여러 단계의 안정화 작업과 임상시험이 필요한데 이러한 작업이 기술적으로 어렵고 그 시간도 만만치 않게 걸리기 때문이다. 또한, 보험사의 보장은 크게 사망/수술/입원/암/기타보장으로 구별할 수 있는데, 줄기세포 연구의 발달과 관련이 있는 보장이 제한되어 있어 보험사에 미치는 영향이 당장 우려할 만한 수준이라 할 수 없다. 하지만 만약 치료용 줄기세포 배양으로 인한 장기 기관의 이식이나 손상세포의 대체 등과 같은 의학신기술의 예상 외로 급격하게 발전한다면 보험사의 Risk 관리에 상당한 저해요인으로 작용할 것으로 판단된다. 특히 진단 입원 수술로 대표되는 생존보장에 대한 사차 Risk 및 사차손의 급증이나 역선택 증가는 보험사의 경영수지 악화를 유발하여 보험산업 전반에 위험으로 작용할 수도 있다. 따라서, 장기적인 안목으로 업계 공동의 대응이 필요하고, 각 사에서도 상품개발, 언더라이팅, 지급심사 간의 긴밀한 협조가 요구된다. 생명보험산업의 Risk 관리는 기존의 시장환경에 영향을 받는 비차, 이차중심에서 보험회사가 어느 정도 관리를 통해 적정규모를 유지할 수 있는 사차로 그 중심축이 이동하고 있다. 보험산업이 계속 활력을 갖고 성장하기 위해서는 체계적인 Risk나 관리가 핵심일 것이며, 보험사의 사차 Risk의 중요성이 더욱 커져 가고 있는 현실에서 거시적으로 의학신기술 발달 등 위험요인에 대해 미리 분석하고 이에 대한 대비책 마련이 필요할 것으로 판단된다.

• Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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• v.28 no.4
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• pp.709-727
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• 2001

The pattern of programmed cell death(PCD) has been examined during the early developmental period of development in mouse embryos, from embryonic day 4.5(E4.5) to E11.5 Embryos from Balb/c breedings were harvested at various embryonic stages between E4.5 and El1.5. Cell death was analysed by in situ terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling(TUNEL) staining in tissue sections and whole embryos. At the blastocyst stage(E4.5), a very few apoptotic cells were found in the inner cell mass of the blastocyst. In the early egg cylinder stage(35.0-5.5), a few apoptotic cells were detected in the embryonic ectoderm, the embryonic endoerm and the proamniotic cavity. In the advanced egg cylinder stage(E5.5-6.5), TUNEL-posifive cells were observed in the extra-embryonic ectoderm and extra-embryonic endoderm as well as in the embryonic ectoderm, embryonic visceral endoderm and proamniotic cavity. In the streak stage(E6.75-7.75), many TUNEL-positive cells were found in the ectoplacental cone. In contrast, only very few apoptotic cells were found in the chorion and extra-embryonic endoderm in extra-embryonic regions. In intra-embryonic region, a few apoptotic cells were randomly found in the embryonic ectoderm, mesoderm and visceral endoderm. At the early somitogenesis stage(E8.0-8.5), most apoptotic cells were observed in the most cranial portion of neural fold (neural ectoderm and adjacent ectoderm). At the mid somitogenesis stage(39.0-9.5), the otic placode first showed TUNEL-positive at this stage. Small number of TUNEL-positive cells were also first seen around optic placode and branchial arches. Three streams of TUNEL-positive cells were clearly seen in the cranial region at 59.5-9.75. At E10.5, apoptotic cells were localized in the developing eye, the junctional portion of medial nasal, lateral nasal and maxillary processes, the lateral portion of branchial arches, the junction of bilateral mandibular processes, and apical ectodermal ridges of limb buds. At E11.5, apoptotic cells were noticeably decreased in most area, except the developing limbs and several somites in the tail region. In this study, the global temporospatial pattern of PCD throughout early development of mouse embryos was discussed. It may provide the basis for further studies on its role in the morphogenesis of the embryo.

• Journal of Life Science
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• v.34 no.6
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• pp.365-376
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• 2024

The present study assessed the cytotoxic effects on cell growth and senescence in human cancer (A-549, AGS, HCT-116, MDA-MB-231, and U 87-MG) and normal (MRC-5 and mesenchymal stem cells) cell lines treated with efavirenz (EFA), an inhibitor of non-nucleoside reverse transcriptase (RTase). Following EFA treatment, the half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) values were approximately 15 µM, and the IC₅₀ value was significantly (p<0.05) lower in the cancer cell lines, compared to normal cell lines. After determining the IC₅₀ values against EFA, each cell line was treated with 15 µM EFA for up to one week. Significant (p<0.05) decreases in endogenous RTase and telomerase activity were observed in the cancer cell lines. RTase and telomerase activity were absent or detected at very low levels in both EFA-untreated and treated MRC-5 and MSC normal cells. The cell doubling time (CDT) was also significantly (p<0.05) prolonged by the decreased cell growth rate in the EFA-treated cancer cell lines compared to the untreated cell lines. Furthermore, EFA-treated cancer cells displayed a high number of cells with a high intensity of senescence-associated ß-galactosidase activity (SA-ß-gal activity), compared to the untreated cells. The present study showed that inhibition of RTase activity induces cellular senescence and arrests cell growth in human cancer cell lines; however, normal cell lines showed greater tolerance against EFA. RTase treatment could offer optional chemotherapy for cancer treatment in human cancer cell lines with high RTase activity.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2001.10a
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• pp.32-36
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• 2001

난소의 재형성 과정은 난소 내 여러 조절인자들에 의해 조절되는 성장 및 퇴행 과정을 반복하는 특징을 가지고 있다. 황체는 주기적 성장과 퇴행을 보이며 과립세포의 세포자멸사 (apoptosis)를 통해 황체의 퇴행이 일어나게 된다지. 이러한 세포자멸사 과정은 난소의 정상 생리에 매우 중요하다. ATP 는 자율신경으로부터 세포외 유출을 통해 분비되어 근육 수축, 신경전달체계, 외분비 및 내분비 호르몬의 분비, 면역반응, 염증, 혈소판 응집, 동통 및 심장기능의 조절 등 매우 다양한 생물학적 기능에 영향을 미친다. 이러한 작용은 세포 표변에 존재하는 purinoceptor를 통해 이루어지는 것으로 알려져 있다. ATP는 일반적으로 세포 내에서는 에너지원으로서 작용하나 세포외부에 존재하는 ATP의 경우에는 조절물질로 작용하여 어떤 세포에 있어서는 세포용해를 일으키기도 하며, 어떤 세포에서는 세포자멸사를 유발하기도 한다. 세포 내에 존재하는 ATP는 세포의 주요한 에너지원으로 사용되며 살아있는 세포에서는 세포막을 통과하지 못하는 반면 세포 외에 존재하는 ATP는 말초신경계 혹은 중추신경계에 있어서 매우 중요한 신경전달물질로 작용하고 있다. (중략)

• Proceedings of the Korean Vacuum Society Conference
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• 2012.02a
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• pp.452-452
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• 2012

저온 플라즈마를 발생시키는 대기압 마이크로-플라즈마 젯(Micro-plasma jet)을 이용하여 플라즈마와 세포와의 상호작용에 대한 연구를 진행하였다. 실험에 사용된 세포는 인체의 방광암 세포(Human bladder carcinoma cell, EJ)이며, 플라즈마 처리 후 bioassay를 통하여 세포 예정사 효과를 확인하였다. 수십 kHz (low frequency)의 펄스파 전압을 인가하여 발생시킨 플라즈마는 형성 기체로 헬륨을 사용하였고, 광 방출 분광법으로 산소의 첨가량에 따른 활성 종들의 변화를 비교해 보았다. 플라즈마 처리 후에는 DAPI staining을 통하여 세포 예정사에서 형성되는 apoptotic body를 확인하였고, 세포막 외부로 이동하는 Phosphatidic Serin (PS)과 결합하는 Annexin-V assay를 통하여 apoptosis rate를 측정하였다. 이를 바탕으로 암세포에 미치는 플라즈마 활성종의 영향을 분석하였다.

• Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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• v.6 no.1
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• pp.1-9
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• 2003

Purpose: To investigate the relation of the gastric epithelial cell proliferation, apoptosis and genotypes of H. pylori in children. Methods: Histologic grading by updated Sydney system, PCNA immunostaining, TUNEL method and the genotypes (cagA, picB and iceA) by PCR were performed in H. pylori positive (N=20) and negative (N=20) gastric biopsy specimens. Results: PCNA index was significantly different between H. pylori positive children ($77.4{\pm}13.12$) and H. pylori negative children ($52.3{\pm}12.20$) (p=0.000). There were positive correlations between PCNA index and H. pylori density (r=0.624, p=0.000), polymorphonuclear neutrophil activity (r=0.460, p=0.005) and chronic inflammation (r=0.433, p=0.009). Apoptosis index of H. pylori positive children ($0.70{\pm}0.411$) was significantly higher than of H. pylori negative children ($0.14{\pm}0.201$) (p=0.000). Positive correlations between apoptosis index and H. pylori density (r=0.691, p=0.000), polymorphonuclear neutrophil activity (r=0.585, p=0.000) and chronic inflammation (r=0.535, p=0.001) were noted. As PCNA index increased, apoptosis index significantly increased (r=0.527, p=0.001). The positive rates of genotypes were cagA 90%, picB 75%, iceA1 60% and iceA2 15%, respectively. There were no significant correlations between the status of the genotypes and PCNA index, apoptosis index, the endoscopic findings and the histologic findings. Conclusion: PCNA index and apoptosis index in H. pylori positive children were higher than in H. pylori negative children but were not related to H. pylori genotypes. This study suggested that correlatively increased gastric epithelial cell proliferation and apoptosis are important to pathogenesis of H. pylori infection in children.

• Journal of Life Science
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• v.17 no.8 s.88
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• pp.1063-1067
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• 2007

The Bcl-2 family proteins play critical roles in regulation of apoptosis, and the balanced interaction of pro- and anti-death members is a key factor in determining the cell fate. Noxa, a BH3-only Bcl-2-family member, has been originally identified as a target gene of p53. To understand the mechanism by which human Noxa (hNoxa) regulates the cell death, we screened the hNoxa binding partner using the yeast two hybrid screening and found that anti-death protein Mcl-1 binds to hNoxa. The binding of hNoxa to Mcl-1 was confirmed by immunoprecipitation in human colon cancer cell line HCT 116 cells. Mcl-1 significantly inhibited the hNoxa-induced cell death in HCT 116 cells. During the cell death induced by hNoxa, Mcl-1 protein was degraded. Its degradation was inhibited by z-VAD-fmk, a pancaspase inhibitor, suggesting caspase is responsible for Mcl-1 degradation in response to hNoxa. Together, the results indicate that hNoxa binds to Mcl-1 that is degraded by cas-pases during hNoxa-induced cell death.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.26 no.3
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• pp.39-48
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• 2009

목적 : 이 연구는 봉약침의 주요성분인 멜리틴이 NF-${\kappa}$B의 활성억제를 통하여 세포자멸사를 유도하고, 전립선 암세포주인 DU-145 세포의 성장을 억제하는지를 확인하고 멜리틴의 NF-${\kappa}$B 활성억제기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : 멜리틴을 처리한 후 DU-145의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay를 시행하였고, 세포자멸 사의 관찰에는 DAPI stairung assay를 통한 세포형태관찰을 시행하였으며, 염증관련유전자 발현 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 NF-${\kappa}$B의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA와 luciferase assay를 시행하였으며, DU-145에서 멜리틴과 NF-${\kappa}$B의 상호작용을 관찰하기 위해 transient transfection assay를 시행 시 세포생존율과 NF-${\kappa}$B의 활성 변동을 측정하였다. 결과 : DU-145 세포에 멜리틴을 처리한 후, 전립선암세포의 성장, 세포자멸사의 유발, 염중관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성, NF-${\kappa}$B의 p50 치환 후 NF-${\kappa}$B의 활성과 DU-145 세포 증식에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었다. 2. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 염증관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성에 유의한 감소를 나타내었다. 3. DU-145 세포에서 NF-${\kappa}$B의 p50와 IKK들을 치환하여 작용기를 없애고 멜리틴을 처리하였을 경우에도 세포활성 및 NF-${\kappa}$B의 활성의 유의한 감소를 나타내었다.