본 연구에서는 Trichorderma reerri의 cellobiohydrolase (CBH1) gene을 이용하여 분자진화 방법을 이용한 cellulose분해 활성이 증가된 cellulase 변이체를 선별하고자 하였다. 재조합된 벡터가 도입된 균주의 발현을 SDS-PAGE로 확인한 후, 분자 진화에 의한 cellulase 변이체를 trypan blue staining법으로 cellulase 변이체 228-G2를 선별하였으며, cellulose분해 활성을 DNS법으로도 다시 확인 할 수 있었다. Cellulase 변이체 228-G2의 분해활성 증가율은 original CBH I에 비해 약 300%증가 된 것을 확인하였고, DNA sequence를 확인할 결과 1542bp 중 17개의 염기서열이 바뀐 것을 알 수 있었다.
80K에서 사염화탄소 또는 크세논 매트릭스에 의해 희석된 상태에서 $CH_3CN$과 DMF 분자의 이합체의 구조를 적외선 흡수 분광법으로 연구하였다. 시료와 매트릭스 물질을 저온의 KBr트랩창에 함께 퇴적시키고, 순수한 시료와 매트릭스에 희석된 시료의 적외선 스펙트럼을 비교하여 이합체의 구조를 설명하였다. $CH_3CN$의 이합체는 반평행 모양을 그리고 DMF 이합체는 마주보는 선형을 나타내었다. 매트릭스에 희석된 시료에 온도를 상승시키면 순수한 시료와 같은 모양의 적외선 스펙트럼을 보여 주었다.
나노세공체는 고표면적, 균일한 다공성, 분자크기의 세공구조, 높은 흡착용량, 이온교환 특성, 높은 촉매활성, 분자크기의 형상선택성 등의 특징을 갖기 때문에 촉매 및 흡착제로 나노소재 분야에서 가장 오랫동안 활용되어 왔던 중요한 물질 가운데 하나로 정유 및 석유화학 산업을 비롯한 화학산업과 환경 산업에 광범위하게 사용되고 있다. 본 고찰에서는 결정성 나노세공체 가운데 가장 중요한 제올라이트와 최근 연구가 활발한 하이브리드 나노세공체의 산업적 응용 및 기술개발 동향과 향후 발전 전망에 대해 간략히 기술하였다.
콩은 전세계적으로 재배되는 중요한 작물 중에 하나로 최근, 표준유전체 해독과 함께 유전적, 표현형적으로 다양성을 가진 한국핵심집단이 구축됨에 따라 유전체 기반 분자 육종 연구, 유전자 교정 기술을 활용한 새로운 육종 소재 개발 연구가 가속화될 것으로 예상된다. 유전체 정보 기반 작물의 분자 육종 및 생명공학 연구를 통한 성공적인 작물의 개량을 위해서는 식물의 효율적인 조직배양 기술이 수반되어야 할 것이다. 그러나 반수체 생산, 원형질체 배양 및 형질전환 기술과 같은 콩의 조직배양 효율은 아직까지 높지 않고 일부 계통에 한정되어 이루어지고 있다. 본 논문에서는 콩의 분자육종 및 생명공학 기술의 적용을 위하여 다양한 콩 조직배양 기술에 관한 연구 동향을 분석하고 조직배양 효율에 영향을 미치는 요인들에 대한 정보를 제공하고자 하였다.
Peroxidase를 다량 함유하는 식물체를 검색할 목적으로 십자화과 식물 9종에 대하여 효소활성 분포를 조사하였다. 검색한 식물체 중 배추 뿌리에서 본 효소의 활성이 강하게 나타나 배추 뿌리로 부터 본 효소의 정제를 행하였다. 정제된 효소는 분자량 50,000의 단량체로서 pH 7.0, $50^{\circ}C$에서 최적 활성을 나타내었다. phenol 및 phenol이 유도체가 좋은 기질로 작용하였으며 pyrogallol에 대한 $H_2O_2$의 Km 값은 1.6mM이었다. 본 효소는 406nm 에서 soret 흡수대를 나타내어 다른 peroxidase와 마찬가지로 분자내 보결분자단으로 heme을 가지고 있음을 알았다. 정제된 배추뿌리 기원의 효소는 면역화학적, 전기영동적 성질이 horseradish 기원의 peroxidase와 유사하였다.
대두에 존재하는 단백질 분해 효소 저해제로는 Kunitz trypsin inhibitor (SKTI), Bowman-Birk proteinase inhibitor, 그리고 그의 isoinhibitor들이 알려져 있다. SKTI는 분자량이 20K이며 181개의 아미노산으로 구성되어 있다. SKTI의 분자 구조 및 발현 특이성을 밝히기 위하여, 콩에서 순수 분리한 SKTI를 항원으로 사용하여 항체를 제조하였다. 이 항체는 항원으로 사용한 SKTI에 대하여 특이적으로 반응할 뿐만 아니라 기내에서 합성된 그의 전구체와도 특이적으로 반응하였다. 기내에서의 단백질 합성은 미성숙 대두 종자에서 mRNA를 분리한 후, wheat germ extract를 이용하여 실시하였다. 합성된 단백질 중에서 대두에 존재하는 SKTI는 검출되지 않는 반면에 면역침전법에 의해 분자량이 24K인 전구체가 존재하고 있음을 확인하였다. 이와 같이 SKTI는 mRNA로부터 전구체가 합성된 후 post-translational modification에 의해 완전한 SKTI로 변환됨을 알 수 있었다. 또한 SKTI는 대두 종자의 성숙과 함께 발현이 되는 것으로 보아 조직 및 분화 특이성 발현형태를 나타내는 것을 알 수 있었다.
Poly(ethylene glycol)methyl ether(MPEG)와 dimethylphenoxy 팬던트 그룹을 갖는 polybenzoxazoles(PBOs)의 중합 전구체인 poly(o-hydroxyamides)(PHAs)를 저온 용액 중축합에 의해서 합성하였다. 합성된 중합 전구체들의 고유점도는 $0.51\~2.31$의 값을 나타내었다. 중합전구체는 FT-IR, $1H-NMR$, DSC, 그리고 TGA를 이용하여 특성을 조사하였다. MPEG단위를 갖는 PHAs는 MPEG의 분자량이 증가할수록 용매특성이 증가하는데, 특히 분자량이 1100인 MPEG를 갖는 PHA의 경우 aprotic 용매뿐만 아니라 에탄올, 메탄올, H,0에도 용해되었으나, 열적 고리화 반응에 의해 PBOs로 전환되면 어떠한 용매에도 용해되지 않았다. 그리고 MPEG만을 갖는 중합 전구체의 경우, MPEG의 분자량이 증가할수록 고리화 반응온도는 감소함을 확인할 수 있었다.
감귤은 전 세계적으로 가장 많이 생산되는 주요 과수작물이고 비타민 C와 구연산 및 감귤 고유의 플라보노이드를 비롯한 다양한 기능성 성분으로 인해 건강 기능성 식품 소재로도 각광받고 있다. 그러나 긴 유년기와 배우체 불임, 주심배 발생 및 고도의 유전적 잡종성 등 감귤 특유의 생식생물학적 특성으로 인해 교배를 통한 전통 육종의 품종개발에 있어서는 가장 어려운 작물에 속한다. 지구 온난화, 소비자 욕구 변화 등으로 인해 고품질 감귤의 안정적 생산과 품종 다양화를 위한 체계적 육종 프로그램의 도입이 시급한 실정이다. 감귤에서도 분자 육종 프로그램을 통한 품종 육성을 위해 세계적으로 가장 많이 재배되는 스위트 오렌지와 클레멘타인 만다린에 대한 고품질 표준 유전체 정보가 최근에 확보되었다. 표준유전체 서열을 기반으로 다양한 품종 및 교배집단들에 대한 유전체 해독, 비교유전체 분석, GBS 등을 통해 형질연관 마커 발굴, 유전자 기능 연구 등이 이루어질 것으로 전망된다. 아울러 다양한 전사체 분석이 이루어지고 있으며, 유전자 기능 및 유전자 co-expression 네트워크의 이해를 증진할 수 있을 것이다. 유전체 및 전사체 분석을 통해 확보한 대규모 SNP, InDel 및 SSR의 다형성 분자마커 big data를 이용한 고밀도 연관 및 물리 지도 작성이 이루어지고 있고, 궁극적으로 통합지도 작성이 이루어지게 될 것이다. 이를 통해 가까운 장래에 감귤 특이 주요 농업형질 연관 유전자의 정확도 높은 map-based 클로닝 및 빠르고 효율적인 분자표지 선발육종이 이루어질 것이다.
키위는 세계적으로 1970년대 이후 상업화되어 최근 재배가 급속히 확대되고 있는 신종 과수이며, 국내에서도 재배와 소비량이 급격히 증가하고 있다. 키위는 자웅이주 낙엽성 덩굴 식물로 과피에 털이 있고 과육색이 다양한 특성을 가지고 있으며 배수성도 다양하나, 산업적인 품종 구성은 매우 단순하다. 독특한 식물적 특성에 기인한 진화 및 생물학적 관점은 물론 다양한 품종의 효율적 개발의 요구에 따라 최근 유전체 해석 및 활용 연구가 활발히 진행되고 있다. 키위 유전체 draft 서열과 엽록체 서열이 Illumina HiSeq 기반으로 각각 2013년과 2015년에 해독 되었으며 gene annotation 연구가 계속적으로 진행되고 있다. 과거 ESTs 기반의 전사체 분석에서 최근 RNA-seq 기반의 전사체 분석으로 전환되어 과일의 아스코르브산 생합성, 과육색 발현 및 성숙, 그리고 나무의 궤양병 저항성 관련 유전적 발현조절과 유전자 발굴 연구가 중점적으로 진행되고 있다. 전통육종의 효율을 증대하기 위한 분자표지 개발 및 유전자지도 작성에 있어서는 이전의 RFLP, RAPD, AFLP 기반의 연구에서 벗어나 NGS 기반의 유전체 및 전사체 정보의 해독에 의한 SSR 및 SNP 기반의 농업적으로 중요한 형질연관 분자마커 개발 및 고밀도 유전자지도 작성이 연구되고 있다. 그러나 국내 연구는 아직 제한적인 수준에서 진행되고 있다. 향후 키위 유전체 및 전사체 분석 연구는 가까운 장래에 실질적으로 분자육종에 적용될 것으로 전망된다.
본 연구는 콩의 Glycine tomentella와 G. max 뱀콩의 종간교잡으로부터 얻은 $F_1$식물체의 검증을 위하여 형태적, 세포 유전학적, 그리고 분자유전학적 연구를 하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. $F_1$ 식물체의 암술과 수술, 꽃 색깔, 그리고 생육습관 등의 형태적 특징들은 G. tomentella의 특징들을 따르거나 중간적 특성을 나타내었다. G. tomentella (2n=38) 와 G. max 뱀콩(2n=40)의 $F_1$식물체의 염색체수는 2n=39를 가지고 있었다. Esterase와 peroxidase의 동위효소 반응의 결과에서도 $F_1$ 식물체는 G. tomentella과 G. max 뱀콩의 중간적인 밴드유형을 나타내었다. RAPD 분석결과 62 primers들로부터 얻은 $F_1$ 식물체 밴드양상이 모두 G. tomentella와 G. max 뱀콩 양친으로부터 물려받은 것들로 판명되었다. 형태적, 세포학적 그리고 분자유전학적 결과들을 종합하여 볼 때, 본 연구의 G. max와 G. tomentella의 종간교잡으로부터 얻은 $F_1$ 식물체는 진정 $F_1$ 교배체로 판명되었다. $F_1$ 식물체의 임성회복을 위한 연구와 RAPD 분석에서 나타난 모계유전양상(OPA02, OPA09)과 부계유전양상(OPD05)을 보인 결과에 대한 지속적인 연구를 위한 노력이 요구된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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