$40^{\circ}C$, 110bar 조건에서 초임계 추출장치를 이용하여 타르, 탄화취 등의 유해성분이 제거된 정제 목초액을 간장 및 된장에 첨가한 결과 간장의 경우 정제 목초액의 첨가 농도가 증가할수록 첨가하지 않은 것에 비해 균수가 적어 보존효과가 있었으며, 정제 목초액을 첨가한 간장은 산막효모의 생성이 전혀 없어 품질에는 변화가 없었다. 된장의 경우 정제 목초액을 첨가한 것이 첨가하지 않은 것에 비해 대체로 균수가 적어 보존효과가 있었으며, 된장의 색을 측정해 본 결과 정제 목초액을 첨가한 것은 된장의 갈변이 첨가하지 않은 것에 비해 느리게 진행됨을 알 수 있었다.
다양한 희석액과 보존온도에 따른 강도다리 (Platichthys stellatus) 정자의 냉장보존 효과가 검토되었다. 강도다리 어미로부터 채정된 정액의 spermatocrit와 정자농도는 각각 $72{\pm}5$와 $6.00{\pm}0.98{\times}10^8/mL$였으며, 정장의 삼투질농도와 pH는 각자 $337{\pm}g\;mmol/kg$과 $7.7{\pm}0.1$이었다. 강도다리 정자의 냉장보존을 위해 희석액으로 인공정장(artificial seminal plasma, ASP), Stein's solution (SS), 해산어류용 생리식염수(marine fish Ringer's solution, MFRS)를 이용하여 각각 $0^{\circ}C,\;2^{\circ}C,\;4^{\circ}C$에서 30일간 보존하면서 정자의 활성을 검토하였다. 강도다리 정자의 냉장보존을 위해서 희석액으로는 SS가 가장 효과적이었으며 보존온도는 $0^{\circ}C$에서 정자의 활성이 가장 좋아 30일 동안 높은 운동성을 유지하였다.
목적: 본 연구에서는 샘플착용 미용 콘택트렌즈의 적절한 관리방법을 알아보고자 하였다. 방법: 10대 20대 미용 콘택트렌즈 착용자 50명을 대상으로 한 설문조사를 통해 미용 콘택트렌즈 구입 시 샘플착용 실태를 파악하였다. 또한 샘플착용 미용 콘택트렌즈를 2주, 4주, 6주 동안 착용시 발생하는 그람음성균 및 진균의 오염 정도를 측정하고 적절한 관리방법에 의해 이러한 오염이 방지될 수 있는 지를 알아보았다. 결과: 설문 조사결과, 평균 4.5개의 샘플착용 미용 콘택트렌즈를 시험착용 후 구매하는 것으로 나타났다. 그람음성균 및 진균의 오염은 샘플착용렌즈의 착용기간에 따라 통계적으로 유의하게 증가하였다. 착용시마다 문지르기와 보존액을 교체하는 Group 1과 문지르기를 하지 않은 채 보존액 교체만을 해준 Group 2에서는 그람음성균 및 진균의 증식이 완벽하게 방지되었다. 1주 간격으로 관리를 한 Group에서는 그람음성균 및 진균의 증식이 어느 정도 억제되었으며, 문지르기가 균의 오염 방지에 도움이 되었다. 2주 간격의 관리는 균의 오염 방지에 거의 효과가 없었다. 결론: 착용할 때마다 보존액을 교체해주는 것만으로도 샘플착용 미용 콘택트렌즈에서의 그람음성균 및 진균의 오염을 완벽하게 방지할 수 있었다.
세포의 보존은 세포의 배양에 있어서 필수 불가결한 요건으로서 세포주의 다양한 특성에 따라 적합한 방법이 확립되어야 한다. 본 연구에서는 산업용 세포주인 CHO 세포의 단기간 저온보존 기술의 확립을 목표로 진행되었으며 다양한 조건을 통해 가장 안정적인 저온보존 방법을 수립하였다. 저온보존 방법에 있어서 가장 중요한 요인은 온도로서 $4^{\circ}C$ 저온보존이 세포 보존에 필수적인 조건으로 나타났으며 $20^{\circ}C$ 실온보존에서는 세포의 급격한 사멸이 관찰되었다. 보존형태는 용기를 눕힌 상태로 서서히 회전시켜 현탁 보존하는 방법이 용기를 세우거나 눕혀 보관하는 방법에 비해 높은 생존율을 나타내었다. 또한 저온보존 시 새로운 배지로 교환한 후 보존하는 방법이 배양에 사용된 배지를 그대로 사용한 보존 방법보다 세포의 성장 회복율에서 우수한 것으로 나타났다. 하지만 $4^{\circ}C$에서 rolling을 통한 현탁 보존을 할 경우에는 배지의 교환 없이도 안정적으로 세포보존이 가능한 것으로 나타났다. 저온보존에 가장 적합한 세포의 농도는 실험결과 $1.0{\times}10^6{\sim}5.0{\times}10^6cells/m{\ell}$ 범위로 나타났으며 혐기적인 상태로 보존하는 것이 공기가 존재하는 보존방법 보다 비교적 우수한 보존 결과를 나타내었다. 이상의 결과를 바탕으로 무혈청 배지의 저온보존액으로서의 안정성과 첨가물에 의한 보존효율의 향상을 평가하였다. 실험결과 저온보존 후 10일간은 높은 세포 생존율과 함께 정상적인 세포 성장 회복을 보이는 것으로 나타났으며 ${\alpha}$-tocopherol과 retinoic acid를 첨가한 저온보존액의 경우에는 더욱 우수한 세포 생존율을 보임을 확인하였다. 마지막으로 이렇게 확립된 방법을 이용하여 1 L 용량의 저온보존 실험을 수행한 결과, 앞선 실험에서와 유사한 경향의 세포 보존 능력을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 산업용 세포주로 널리 사용되는 CHO 세포의 저온보존은 본 연구에서 확립된 방법을 통해 단기간 동안 안정적으로 수행될 수 있을 것으로 사료되며 대용량 저온보존의 적용 가능성도 확인하였다. 대용량 배양에서의 단기간 보존기술에 대한 연구가 앞으로 더 많이 수행된다면 실제 배양 공정에서도 저온보존 기술의 적용이 가능할 것으로 판단된다.
정액의 ml당 정자수는 $1.13 \pm 0.34 \times 10^{10}$이었고 spermatocrit는 $64.8 \pm 1.4$였으며, 정장의 삼투질농도는 $266 \pm 2$ mOsm/kg이었다. 총 단백질 함량과 총 지질 함량은 정장에 비해 정자에서 높은 값을 보였고, glucose는 검출되지 않았다. 황복 정자를 16일간 $0 \pm 0.5 \circ C$에서 냉장보존 하였을 때, 수정률은 0-0.7%로 보존효과가 저조한 것으로 나타났다. 황복 정자의 냉동보존을 위한 희석액으로는 marine fish Ringer's solution, 동해방지제로는 5% DMSO가 적합하였으며, 이때의 수정률은 $79.3 \pm 7.5$%였다.
본 연구에서는 보다 효율적인 동결 보존법을 수립하기 위하여 현재 사용되는 동결 보존액과 동결방법을 정자의 운동성 측면에서 비교해 보았다. 즉, 세 종류의 조성이 다른 동결보존액인 TYB, dithiothreitol을 첨가한 TYB+DTT, KS II 등이 동결보존 전후에 있어 운동성에 미치는 영향을 조사하였으며, 또한 vapor freezing 방법과 computerized freezer를 사용한 동결방법이 정자 운동성에 미치는 영향을 알아보았다. 정자의 분석은 현미경적 방법과 두 종류의 컴퓨터 정자 자동측정기인 SAIS와 Hamilton Thorn을 사용하여 동결 전 후의 정자 운동성과 VCL, VSL, VAP, ALH, LIN 등의 sub-motility 패턴을 측정하였다. 정액성상이 정상인 군에서 동결보존액을 비교한 실험결과는 TYB군과 TYB+DTT군, 그리고 KS II군의 융해 후 운동성이 각각 28.3%, 23.0%, 34.8%로 KS II군이 우수하였고, 동결방법을 비교한 실험에서는 vapor freezing 군과 computerized freezing 군의 융해 후 정자 운동성이 각각 27.8%, 33.2%로 유의차는 없었다. 또한 무력정자증을 보인 정액군에서는 TYB군과 TYB+DTT군, 그리고 KS II군에서 융해후 정자 운동성이 각각 13.6%, 10.0%, 18.5%로 여기 KS II군이 우수하였으며, vapor freezing군과 computerized freezing군의 융해 후 정자 운동성은 12.8%, 12.9%로 유의차가 없었다. 이상의 결과로 보아 운동성이 정상인 정액군과 무력정자증을 보이는 정액군에서 KS II를 사용해 동결하는 것이 TYB나 TYB+DTT를 사용하는 것보다 운동성 있는 정자를 회수하는데 더 효율적이며, 동결방법 측면에서는 vapor freezing 방법과 computerized freezing방법간에 큰 차이가 없음을 볼 수 있었다.
건국대학교 축산대학 부설 양어장에서 사육중인 50마리의 무지개 송어 수컷에서 채취된 정액을 각각 1989년 12월부터 1990년 12월까지 $-20^{\circ}C$와 $-40^{\circ}C$에서 1년 1989년 12월부터 2월까지 2개월동안 $-196^{\circ}C$인 액체질소탱크내에서 그리고 1990년 12월부터 2월까지 $-20^{\circ}C,\;-40^{\circ}C,\;-70^{\circ}C$에서 2개월 동안 동결보존후, $-13^{\circ}C$ 냉수에 해동시켜 20분간 원심분리기에서 정자를 분리시킨 다음 Tyrode 용액으로 50배 정도 희석시킨 후의 정자의 생존율 및 운동성과 신선한 난자와 인공수정시킨 후의 수정률 및 부화율을 조사한 결과는 다음과 같다. 동결보존전과 해동후의 정자의 생존율을 비교해 볼 때 전반적으로 생존전과 큰 차이 없이 생존율이 높게 나타났다. 3가지의 항동해제로 동결보존시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨 후의 수정률은 모두 $99\%$ 이상으로서 이러한 수치는 $99\%$ 이상을 나타내는 대조구와 차이가 없었고, $-20^{\circ}C,\;-40^{\circ}C,\;-70^{\circ}C$\;-196^{\circ}C와 같이 서로 다른 온도에서도 수정률은 대조구와 큰 차이 없이 나타났다. 1M의 DMSO의 항동해제로 $-196^{\circ}C$에서 2개월 동안 동결보존시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 수정률 및 부화율은 BSA가 포함된 희석액이 각자 $96\%$ 및 $8\%$ 이고, 포함되지 않은 희석액은 각각 $98\%,\;10\%\;$로서 BSA가 포함되지 않은 경우에서 부화율이 약간 높게 나타났다. 1M DMSO의 항동해제로 2개월동안 동종보존시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으펄 인공수정 시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-196^{\circ}C$에서 $10\%,\;-40^{\circ}C$에서 $34\%,\;-70^{\circ}C$에서 $35\%$로 나타났다. 1M의 methanol의 항동해제 동결보존시친 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-20^{\circ}C$에서 $22\%,\;-70^{\circ}C$에서 $28\%$로 나타났다. 1M glycerol의 항동해제로 동결보존시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-20^{\circ}C$에서 $22\%,\;-70^{\circ}C$에서 $33\%$로 나타났다. 1.5M DMSO의 항동제로 2개월동안 동결보존 시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-20^{\circ}C$에서 $27\%,\;-40^{\circ}C$에서 $36\%,\;-70^{\circ}C$에서 $35\%$로 나타났다. 1.5M glycerol의 항동해제로 2개월동안 동결보존시킨 후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-20^{\circ}C$에서 $34\%,\;-40^{\circ}C$에서 $31\%,\;-70^{\circ}C$에서 $31\%$로 나타났다. 1.5M methane의 항동해제로 2개월동안 동결보존시킨후 해동된 정자가 포함된 희석액으로 인공수정시킨지 24일 이후의 부화율은 각각 $-20^{\circ}C$에서 $28\%-40^{\circ}C$에서 $29\%-70^{\circ}C$에서 $28\%$로 나타났다. 신선한 정자의 중편부는 2본의 중앙섬유소, 9본의 외측조대섬유, 미토콘드리아초로 구성되어 있다. 동결보존시 정자는 편모의 구부러짐, 정자경부의 핵막의 이탈, 핵내용물이 유출되는 손상을 입었다.
본 실험에서는 돼지 액상정액의 보존일령에 따른 생존율과 활력도를 CASA를 이용하여 조사하고, 이어 IVF 후 전핵 형성율과 배 발생율을 비교하여 액상정액의 보존일령이 돼지 체외수정율에 미치는 영향을 조사하였다. 돼지 난포란을 10% pFF, 0.1 ㎎/㎖ cysteine, 10 IU/㎖ PMSG, 10 IU/㎖ hCG, 10 ng/㎖ EGF가 첨가된 TCM-199 배양액에서 22시간 동안 배양한 후, 성선자극 호르몬이 배제된 배양액에서 추가로 22시간 동안 배양하여 성숙을 유도하였다. 희석제(BTS)로 희석된 액상정액은 17℃에서 보관하였다. (중략)
채취한 정액에 대하여 희석액의 배율을 달리하고 보존온도를 다르게 하여 3시간 보존 후 정자의 운동성 및 수정률을 조사한 결과, 정자 운동성은 5$^{\circ}C$ 냉장보존 온도에서 희석배율에 따른 차이를 보이지 않았으나, $25^{\circ}C$ 상온보존에서는 정액과 희석액이 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율이 정자 운동성이 현저히 높았고(P<0.05), 35$^{\circ}C$ 고온보존에서도 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율이 정자 운동성이 현저히 높은 것으로 나타났다(P<0.05). 5$^{\circ}C$에서 3시간 냉장보존 후 인공수정을 하였을 때 1:1~1:6의 희석배율에 따른 수정률의 차이를 보이지 않았고, $25^{\circ}C$ 상온보존에서도 희석배율에 따른 수정률의 차이를 보이지 않았으나, 35$^{\circ}C$의 고온보존에서는 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율에서 수정률이 현저히 향상되었다(P<0.05). 이상의 결과로 보아 여름철 고온시는 1:1의 희석배율보다는 1:3 이상의 희석배율을 사용함이 좋을 것으로 사료된다.
바지락 발생배의 냉동보존을 위한 동해방지제의 효과를 규명하기 위하여4종의 보존액, dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, glycerol 및 1,2-propanediol을 사용하여 발생배의 생존율을 조사한 결과로, 생존율의 범위는 0-64.3%였고, 대조구의 생존율은 82.3%을 보였다. 발생배의 냉동보존을 위한 프로그래 동결 과정은 최초 25℃에서 10분 동안 유지하다가 자동 냉동보존 프로그램 장치에 의하여 -12℃까지 분당 -1℃씩 조정하였으며 -35℃까지는 분당 -2℃씩 하강시켜 액체 질소통에 스트로우를 넣어 해동 후 관찰한 결과, 바지락 생존율은 DMSO(dimethyl sulfoxide) 2.0M 실험구에서 64.3%로 가장 좋은 결과를 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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