To study the conditions to enhance success of embryo transfer in the dog, 20 mixed-breed bitches were used for the experiment along with 4 male dogs for mating. The bitches were paired according to synchronism of natural estrus, or the counterpart as donor or recipient was treated with gonadotropin as FSH (follicular stimulating hormone) or PMSG (pregnant mare serum gonadotropin) for induction of estrus to be synchronized with estrus of the other bitch in natural estrus. Embryo recovery was performed in two ways for comparison, either by flushing each uterine horn after ovariohysterectomy or by flushing each horn in the state of non-ovariohysterectomy. In addition, the result of pregnancy according to the embryo stage and the repeatability of the experimental animals as donor or recipient were also investigated. FSH or PMSG was administered to the bitches which had passed over 4 months from last estrus, resulting in estrus-positive in 3 dogs of 6 FSH-treated dogs (50.0%), and in 5 dogs of 9 PMSG-treated dogs (55.6%), determined by proestrus signs and vaginal smear test. Estrus-positive bitches induced with gonadotropin were used as donor or recipient resulting in one embryo-recovered bitch as donor and one offspring-delivered bitch as recipient in 5 PMSG-treated dogs, whereas no result was obtained from 3 FSH-treated dogs. The rate of embryo recovery to be compared with number of corpus luteum was 68.2% in ovariohysterectomized dogs and 55.2% in non-ovariohysterectomized dogs, respectively. The number of dogs from which embryo was collected were 4 dogs of 6 ovariohysterectomized dogs (66.7%) and 6 dogs of 7 non-ovariohysterectomized dogs (85.7%), respectively. The result of parturition was obtained from one dog of 5 estrus-induced recipients, whereas no result was obtained from 3 natural-estrus recipients. The only dog which delivered a male puppy had been transferred 3 morulae and 2 blastocysts. Of 6 repeat-used bitches in canine embryo transfer, 3 dogs showed repeatability either as donor or recipient. These results indicated that inducing estrus of a dog with gonadotropin is feasible in canine embryo transfer to be synchronized with that of a natural-estrus dog, that embryo recovery is also possible in non-hysterectomized dogs, that the estrus-induced dog is also usable as recipient to result in parturition, and that repeat-use of a bitch as donor or(and) recipient is possible in canine embryo transfer.
본 연구는 젖소에 있어서 lipopolysaccharide의 처리가 번식 성적에 미치는 영향을 구명하기 위하여 2003년부터 2005년까지 3년간에 걸쳐 축산연구소 개방형 깔짚우사에서 사육중인 홀스타인 착유우 50두를 대상으로 처리구 및 대조구 각각 25두씩을 공시하였고 분만후 20일째에 1회에 한하여 Bacteroids helcogenes와 Fusobacterium varium으로부터 분리한 LPS $100{\mu}g$을 PBS 용액 35 ml에 희석하여 수정란 이식용 카테타로 자궁내에 주입한 후 발정 발현시 인공 수정을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. LPS 처리후 첫 수정에 의한 수태율은 대조구 및 처리구가 각각 20.0% 및 56.0%로 처리구가 대조구에 비하여 높은 경향을 나타내었다. 2. LPS 처리후 2회 이상 수정에 의한 수태율은 대조구 및 처리구가 각각 40.0% 및 64.0%로 처리구가 대조구에 비하여 높은 경향을 나타내었다. 3. 수태된 개체들의 수태당 종부횟수는 대조구 및 처리구가 각각 $2.0{\pm}0.1$회 및 $1.2{\pm}0.4$회로 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮았다(p<0.05).
To establish the differential diagnosis and treatment method in bovine ovarian cysts, specially ovarian cysts with corpus luteum, serum progesterone concentration, rectal palpation and ultrasonography for measuring the cystic wall thickness and diameter of cyst and corpus luteum were investigated from 1,188 dairy cows with ovarian cysts. The plasma progesterone concentrations were 0.3$\pm$0.4 (mean$\pm$SD) ng/ml in 629 cows with follicular cysts, 3.7$\pm$1.1 ng/ml in 431 cows with luteal cysts, and 3.8$\pm$1.2 ng/ml in 128 cows with coexist of ovarian cysts and corpus luteum, respectively. The cystic wall thickness by ultrasonography were 1.6$\pm$0.4 mm in 629 cows with follicular cysts, 4.2$\pm$1.5 mm in 431 cows with luteal cysts, and 1.6$\pm$0.6 mm in 128 cows with coexist of ovarian cysts and corpus luteum, respectively. The days from initial treatment to insemination in follicular cysts were 28.1$\pm$6.9 days in treatment of GnRH alone, 15.9$\pm$2.9 days in combination of GnRH and dinoprost, and 15.1$\pm$3.1 days in combination of GnRH and cloprostenol. The percentages of cows conceived within 100 days after initial treatment were 61 %, 68% and 73% in treatment of GnRH alone, combination of GnRH and dinoprost, and combination of GnRH and cloprostenol, respectively. The days from initial treatment to insemination in luteal cysts were 3.8$\pm$0.6 days in treatment of dinoprost alone and 3.8$\pm$0.7 in cloprostenol alone. The percentages of cows conceived within 100 days after initial treatment were 69.5% and 68.5% in treatment of dinoprost and cloprostenol, respectively. The days from initial treatment to insemination in coexist of cysts and corpus luteum were 3.7$\pm$0.7 days in treatment of dinoprost alone and 3.8$\pm$0.6 in cloprostenol alone. The percentages of cows conceived within 100 days after initial treatment were 87% and 84% in treatment of dinoprost and cloprostenol, respectively. These results suggest that the best choice for treatment agents in ovarian cysts were combination of GnRH and PGF$_2$$\alpha$ in follicular cysts, and the PGF$_2$$\alpha$ in luteal cysts and in coexist of cysts and corpus luteum, respectively. In conclusion, it is suggest that ultrasonography is useful diagnostic tool for diagnosis and selection of treatment remedy in cystic ovaries of bovine.
Estrus was induced in 13 anestrus Korea Jin-do bitches by intramuscular injection of pregnant mare serum gonadotropin (PMSG) in a dose of 500 lU once daily for ten consecutive days, followed by an additional single intraveneous injection of 1,000 lU of human chorionic gonadotropin (hCG) on the tenth day. Day-changes of vaginal epithelial cells during the hormone treatment were investigated in each experimental bitches and compared with the those of spontaneous estrus bitches. The first days of vulval bleeding and male acceptance after PMSG treatment were on Day 6.0$\pm$ 1.5 (mean$\pm$ SD) and Day 9.0$\pm$ 1.9, respectively. And in all of 13 bitches, vulval swelling and perineal reflex were shown. The mean durations of proestrus and estrus were 2.9$\pm$ 1.4 (mean$\pm$ SD, range ; 1-6) and 11.5: 1.7 (range ; 8-14) days, respectively, that is, duration of proestrus was significantly shorter than that of the spontneous estrous bitches but duration of estrus was longer than that of the spontaneous estrous bitches. Characteristic features of vaginal cytology during the estrous cycle were the high proportions of large intermediate cell, superficial cell, anuclear cell and erythrocyte in proestrus, superficial cell and anuclear cell in estrus and parabasal cell, small intermediate, large intermediate cell, and leukocyte in diestrus, respectively. The comification index (Cl) was significantly high proportion in proestrus and estrus, when Day 0 was timed from the first day of male acceptance, the Cl was first increased above 80% on Day 0 and maintained above 80% until Day 0 to Day 5 during 6 days and showed a peak on Day 2. Also it was maintained above 90% until Day 2 to Day 3 during 2 days. These results indicated that all 13 ekperimental bitches showed positive estrus detection by the estrus behavior and vaginal smear test after treated with PMSG and hCC. It suggested that vaginal cytology was used to estimate the optimal mating and ovulation time, in consideration of the day when the Cl was maintained above 80% in estrus-induced Korea Jin-do bitches.
돼지에서 액상정액을 이용한 인공수정이 번식성적에 미치는 영향을 구명하기 위하여 축산기술연구소 종축개량부 (충남, 성환) 돼지 인공수정센터에서 사육중인 인공수정용 종모돈을 이용하여 1995년부터 2000년까지 액상정액을 이용한 인공수정시 종모돈의 품종, 인공수정 횟수, 계절 및 정자농도가 번식성적에 마치는 영향을 조사하여 돼지 인공수정시 번식성적 향상과 실용화에 기여하고자 본 연구를 실시하였다. 액상정액 인공수정시 정액을 생산한 종모돈의 품종 (Landrace, Yorkshire, Duroc)간 번식성적은 유의차가 인정되지 않았다. 발정당 2회 또는 3회 인공수정 시에도 번식성적에 차이가 없었다. 인공수정을 실시한 계절별로 번식성적을 조사하였으나 계절간 차이점은 발견할 수 없었다. 액상정액 인공수정시 1회 주입정자의 최저농도를 구명코자 활력 70% 이상인 정자수를 기준으로 80 ml 병당 정자농도를 3.0, 2.5, 2.0 및 $1.5{\times}10^9$로 조절하여 인공수정한 결과 수태 율, 분만 율, 총산자수 및 생존산자수에서 통계적인 유의차가 인정되지 않아 1회 주입정자농도는 운동성 정자 기준으로 $1.5{\times}10^9/80ml$ 이상으로 조절하면 인공수정에 실용적으로 사용할 수 있음을 보였다.
본 연구는 소형 개의 불임 해결과 체외수정란을 생산하기 위한 방안의 하나로써 난자의 형태, 번식주기, 배양시간 및 활성화 처리가 난포란의 체외성숙 및 체외발생에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 신선, salt 및 4$^{\circ}C$에 보존한 난소로부터 채취한 난구세포부착 난자와 나화 난자로 각각 체외수정시켰을 때 16세포기로의 발생율은 14.3%, 5.0% 및 7.5%, 2.8%, 5.7% 및 0.0%로써 난구세포 부착난자군의 체외발생율이 나화 난자군에 비해 높게 나타났다. 2. 발정주기를 inactive, follicular, luteal 단계로 구분하여 채취한 난포란을 각각 체외배양시켰을 때 GV 및 MII로의 발생율은 11.3%와 9.4%, 50.7%와 26.7%, 16.9%와 13.8%였고, 16세포기로의 체외발생율은 0.0%, 10.7%, 1.5%였다. 3 신선한 난구세포 부착 난자를 각각 24, 32, 48시간 성숙배양 후 체외수정시켰을 때 분할율은 8.6%, 15.8%, 23.5%였으며, 16세포기로의 체외발생율은 각각 0.0%, 5.3%, 11.8%로써 48시간 배양군이 가장 높은 발생율을 나타냈다. 4. 활성화 처리 및 비활성화 처리 난자를 각각 체외수정시켰을 때 분할율은 각각 42.5%, 22.2%였고 16세포기로의 체외발생율은 각각 15.0%, 6.7%로써 활성화 처리 난자군이 비활성처리 난자군에 비해 높은 발생율을 나타냈다.
본 연구는 사람의 조혈촉진 유전자(hEPO)가 도입된 형질전환 돼지를 생산하기 위해 사계절동안 수행하였다. 약 8∼15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600 주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 1,500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과배란을 유도하였다. 미세주입을 위한 유전자는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터에 hEPO 유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리후 23두의 공란돈으로 부터 650개의 난자를 회수하였으며, 이 중 83.1%(540/650)는 DNA 미세주입을 위해 전핵을 관찰할 수 있는 1-세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세주입 된 543개의 난자를 19두의 수란돈에 이식하였으며 7두의 임신돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다. 생산된 자돈 47두로부터 꼬리조직으로부터 분리된 DNA의 PCR 검정 결과 수컷 1두가 형질전환 양성반응을 나타내어 2.13%의 형질전환율을 나타내었으며, 이러한 연구의 결과는 생체반응기(bioreactor)연구에 있어서 형질전환 돼지생산의 성공적이며 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다.
본 연구는 섬유소분해효소 유전자(CelD)가 도입된 형질전환 돼지를 생산하기 위해 사계절동안 수행하였다. 약 8∼15개월령의 순종의 랜드레이스경산돈 및 미경산돈 126두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG600 주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 1000IU의 PMSG와 750IU의 hCG를 주입하므로서 과배란을 유도하였다. 미세주입을 위한 유전자는 Rat elasterase promoter에 CelD유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리후 91두의 공란돈으로부터 1,422개의 난자를 회수하였으며 이중 95.6% (1,359/1,422)는 DNA미세주입을 위해 전핵을 관찰 할 수 있는 1세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세주입된 725개의 난자를 35두의 수란돈에 이식하였으며 13두의 임신돈으로부터 65두의 자돈을 생산하였다. 한편 수란돈당 수정란 이식수가 임신율에 미치는 영향을 조사한 결과 약 21∼24개의 수정란을 이식한 구에서 임신율이 50%로 타구의 20.0%(20개 이하)와 33.3%(25개 이상)보다 높았으며, 꼬리조직으로부터 분리된 DNA의 PCR검정결과 65두중 5두가 형질전환 양성 반응을 나타내어 7.69%의 형질전환율을 나타내었다 따라서 본 연구는 생체반응기를 통한 형질전환 돼지생산을 위한 유용한 정보를 제공하게 될 것이다.
돼지에서 동결정액을 이용한 인공수정이 번식 성적에 미치는 영향을 구명하고자 축산기술연구소 종축개량부 (충남, 성환)의 돼지 인공수정센터에서 사육중인 종모돈을 이용하여 1995년부터 2000년까지 인공수정을 실시하였다. 동결정액을 이용한 인공수정시 종모돈의 품종, 인공수정 횟수, 정자농도, 농장 및 연도가 번식성적에 미치는 영향을 조사하였다. 동결정액이 인공수정에 영향을 미치는 요인을 알아보기 위하여 5$m\ell$ maxi-straw에 포장된 동결정액을 이용한 인공수정시 번식성적을 조사한 결과 종모돈의 품종 (Landrace, Yorkshire, Duroc)간 차이가 없었다. 1회 발정당 수정횟수는 2회 수정과 3회 수정시 차이가 없었으며, 1회 주입정자 농도도 5.0, 4.0 및 3.0$\times$$10^{9}$ /dose 처리간에 차이가 없었다. 그러나 양돈장의 관리방법과 인공수정사의 기술은 수태율과 산자수에 영향을 주었다. 1995년부터 1999년까지 5년간 농장에서 매년 인공수정한 결과수태율은 68.3~74.6%, 분만율은 61.7~67.6%, 총산자수는 8.7~9.6두 그리고 생존산자수는 8.1~8.7두로 각각 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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