Streptococcus sanguis와 여타 구강세균의 PZ-peptidase의 생산을 연구하였다. 세척한 온전한 세균세포를 효소윈으로, 그리고 PZ-pentapeptide를 효소의 기질로 사용하였다. 이 연구에서 책택한 균의 배양조건에서, S. sanguis에서는 넓은 범위의 효소활성도가, 실험실 균주와 신선한 분리균주에서 검출되었는데, 그 값은 O.5~7.9Unit/mg protein 이었다. Streptococcus mµtans와 Lactobacilli는 낮은 효소활성을 보였고 S. mutans의 경우 그 값은 0~0.5Unit/mg protein이었다. Streptococcus mitis와 Streptococcus salivarius는 다른 세균과 비교할 때 중등도의 효소활성을 갖고 있었고, Actiηomyces의 균주들은 S. sanguis처럼 넓은 범위의 활성도 (0~9.8 unit/mg protein)를 지니고 있었다. 본 논운에서 취급한 구강세균이 생성하는 PZ-peptidase가 사람의 타액단백질의 분해에 참여할 수 있는 가능성을 더불어 고찰하였다.
광학활성 styrene oxide는 친전자성반응, 친핵성반응, 산 염기반응, 산화 환원반응 등 다양한 반응을 유도할 수 있어 광학활성 중간체로 널리 사용될 수 있다. Styrene monooxygenase (SMO)를 생촉매로 이용하여 styrene의 side-chain 이중결합에 입체선택적으로 에폭사이드 링을 도입시켜 광학활성 styrene oxide 유도체를 제조할 수 있다. 다양한 기질 특이성을 가진 신규 SMO 생촉매 개발, 이상계 반응 시스템, in situ 분리 공정, multimeric oxygenase 효소발현 및 안정화 기술 개발, NADH 등 cofactor regeneration 등에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있어, 미생물유래의 SMO를 생촉매로 활용하는 광학활성 styrene oxide 유도체 제조 기술의 상업화가 기대된다.
잔디밭 및 초지에서 많이 발생하는 다년생 포복성 잡초인 토끼풀을 효과적으로 방제할 수 있는 새로운 미생물제초제를 개발하기 위하여 토끼풀 및 유사 잡초의 병반으로부터 980여주의 곰팡이 균주를 분리하고 각 균주에 대한 제초활성 검정을 통하여 토끼풀에 대한 제초활성이 우수한 F40362, F40496 및 F40497 3균주를 선발하였다. 선발된 3 균주는 동정한 결과 모두 Penicillium속에 속하는 균주이었다. 각 균주의 포자현탁액을 사용하여 토끼풀에 대한 활성을 검정하였을 때 $1{\times}10^7$ 포자수/ml 농도에서 제초활성이 나타났으며 포자현탁액으로서는 멸균수보다 이들 각 균주의 배양액을 사용하는 것이 효과적이었다. 한편 동일 농도에서 대조식물인 한국 들잔디에 대하여 병해는 없었다.
Streptomyces melanosporofaciens로 동정된 strain 88-GT-161 균주는, 그람양성세균 및 식물병원성 곰팡이에 각각 항균활성을 나타내는 phthalate 유도체 및 염기성 마크로라이드의 새로운 항생물질을 생산하는 것으로 밝혀졌다. 이들 활성물질들의 분리. 정제과정에서 in vitro 및 in vivo(포트 시험) 항균활성을 조사하였으며, phtahalate 유도체 항생물질은 IR, NMR, 질량분석 스펙트럼 조사를 통하여 bis(2-ethylexyl) phthalate(dioctyl phthalate)로 동정하였다. Dioctyl phthalate가 Streptomyces sp.에 의하여 생산되며 생합성된 이 화합물이 항균활성을 가진다는 사실이 보고된 것은 이것이 처음이다.
본 연구에서는 cellulase를 보다 경제적으로 생산하기 위해 다양한 리그노셀룰로스계 폐기물 기질에 대해 cellulase 생산을 검토, 비교하였으며 가능성이 높은 기질에 대해 대량 생산 실험을 수행하였다. 폐 신문지는 0.2% NaOH를 사용하여 전처리한 경우 FPase와 CMCase의 최대활성이 각각 0.25 IU/mL, 4.6 IU/mL로 좋았으나, 폭쇄재 및 당화잔사 등 다른 기질의 최대활성인 0.6∼0.8 IU/mL, 5.5∼6.5 IU/mL에 비해 매우 낮았다. 30 L 발효기를 이용한 cellulase 생산 실험에서 FPase 최대활성은 lactose와 폭쇄재에서 각각 0.75 IU/mL, 0.72 IU/mL로서 당화 잔사의 최대 활성인 0.58 IU/mL에 비해 30% 높았으나 CMCase는 당화 잔사에서 최대활성이 6.3 IU/mL로 폭쇄재를 기질로 하였을 때 보다 15%높았다.
Rhizopus oryzae를 액체배양하는 동안, $\alpha$-amylase, acid phosphatase 그리고 alkaline phosphatase와 같은 분비효소의 분비능에 대한 계면활성 제의 촉진효과를 조사하였다. 그 결과 집락의 형태적인 변화를 볼 수 있었는바, 0.18mM SDS 처리구에서는 작은 pelletal형, 0. 48mM DOC 처리구에서는 pulpy형, 계면활성제를 처리하지 않은 시험구에서는 사상형의 집 락을 나타내었다. SDS를 첨가함으로써 $\alpha$-amylase는 9배, acid phosphatase는 25배의 활성도 증가가 유도되었다. DOC첨가 시험구에서 alkaline phosphatase 활성도는 배양액에서 11배 증가가 나타났을 뿐 아니라 세포질에서도 역시 상승하였다.
바이러스 감염은 감염된 숙주세포에서 활성산소를 유도할 수 있으며, 항산화제들은 많은 바이러스에 대해서 항바이러스 능을 갖는다고 보고되었다. 본 연구에서 cytopathic effect (CPE) reduction 방법에 의한 항바이러스 활성 평가에서 gallic acid는 현저하게 CPE형성을 감소시키면서 coxsackievirus B3 (CB3)와 coxsackievirus B4 (CB4)에 대해 항바이러스 활성을 나타내었다. 그러나 rabavirin은 CB3와 CB4에 대해 CPE를 막지 못하면서 약한 항바이러스 활성을 나타내었다. 그럼으로 gallic acid의 CB3와 CB4에 대한 항바이러스 활성은 항산화제 효능 때문인 것으로 사료된다.
Allomyces macrogynus를 대상으로 꼬리홀씨와 팡이실에서 tetrahydrobiopterin의 세포내 농도와 그 생합성 효소들의 활성을 비교분석하였다. 습윤중량의 세포를 기준으로 비교하였을 때 biopterin은 홀씨에 비해 팡이실에서 14배 정도 많은 양이 검출되었다. 그 생합성에 관여하는 GTP cyclohydrolase I(GTPCH), 6-pyruboyltetrahydropterin synthase(PTPS), sepiapterin reductase(SR)의 효소활성을 ammonium sulfate 단백질 농축액에서 분석한 결과 GTPCH와 PTPS의 활성은 팡이실에서 꼬리홀씨에 비해 약 2배 정도 높은 값을 보여주었다. 반면 SR의 활성은 오히려 꼬리홀씨에서 10배 정도 높은 것으로 분석되었다. 그리고 Northern blot 분석 결과 SR의 전사물도 꼬리홀씨에서 훨씬 많이 검출되었다. 이러한 결과들은 tetrahydrobiopterin이 Allomyces macrogynus의 팡이실 분화단계에 관여하고 있음을 추정케하는 한편 SR의 생리활성과 관련된 의문을 제기하고 있다.
방선균은 필라멘트 형태를 띤 대표적인 그램 양성 세균으로서, 다양한 자연환경에 존재하는 대표적인 토양 미생물이다. 방성균이 항생제를 포함한 다양한 구조의 많은 유용 생리활성물질을 생성하며, 이들의 생합성 시기가 세포의 배양상태 및 생장속도와관련이 있다는것은 이미 주지의 사살이다. 비록 방선균은 액체 배양 시에는 정체기((stationary phase)나 낮은 생장속도하에서만 항생제를 생성하며, 고체 배양 시에는 aerial mycelia 로 형태적분화(morphological differentiation)를 시작함과 동시에 생합성을 시작한다고 알려져 있으나, 각 방선균 및 항생제의 종류에 따른 특징적인 조절 기작은 매우 다양한 것으로 알려져 있다. 따라서 특징적인 조절 기작은 매우 다양한것으로 알려져 있다. 따라서 본 총성레서는 항생제 생합성이 조절되는 기작을 지금까지 밝혀진 방선균의 여러 생리적 인자 및 생합성 조절 유전자를 중심으로 정리해 보고자 한다. 항생제 생합성에 관하여 다양한 생리적 인자와 조절 유전자의 특정 및 이들의 상호관계에 대한 종합적인 이해는, 방선균 유래 항생제 조절 기작의 체계적인 규명뿐만 아니라, 방선균을 이용한 유용 생리활성물질의 생산성 향상에도 응용될수 있다는 점에서 매우 중요하다.
17-케토스데로이드 (안드로스트-4-엔-3, 17-다이온 (AD), 안드로스타-1, 4-다이엔-3, 17-다이온(ADD))는 스테로이드 약물제조의 출발물질로 그 중요성을 인정받고 있다. 이 중요한 17-케토스테로이드를 기질 콜레스테롤로부터 다량 얻기 위하여 미생물을 이용한 방법을 검토하였다. Arthrobacter simplex 균주를 이용하여 이 균주의 전환활성을 증가시키기 위한 배지조성, 저해제의 영향, 계면활성제의 영향, 균액중균의 농도의 영향, 흡착제의 영향 및 식물성기름의 영향등을 검토하였다. 위의 실험결과과 기질농도 0.1%에서 70% 이상의 전환수율을 얻을 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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