Neurospora crassa는 성장이 끝나고 분화되는 과정에서 tyrosinase를 생산하며 아미노산류의 기질유사체, 반대사물질, 단백질 생합성 저해제 등에 의해 효소생산이 유도된다. 미생물 균체를 배양시키며 여러가지 유도물질을 사용하여 효소의 생합성을 유도시킨 결과 가장 적합한 유도물질은 cycloheximide였다. 이는 균체의 성장을 크게 저해하는 항생제의 일종이므로 효소 생합성을 최대화시키기 위한 최적의 농도가 존재하였으며, 유도물질의 농도가 일정한 경우에 효소 생산에 최적인 유도시간이 존재하였다.
$\beta$-lactam계 항생물질에 강한 내성을 가지는 세균 Bacillus subtilis J105는 항생물질 존재 하에서 $\beta$-lactamase를 유도생산하여 내성이 더 강해진다. 배지에 항생물질이 존재하지 않을 때는 내성을 유도하는 $\beta$-lactamase의 생산은 15시간 만에 plateau에 달했다. 그러나 배지 중에 ampicillin(500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)이 존재할 때는 배양 25시간 만에 효소 생산이 plateau에 달하나 항생물질 비존재시와 비교하면 효소 활성은 약 20배인 2,900 units/$m\ell$나 많이 생산하는 것을 알 수 있었다. 또한, ampicillin 처리한 것과 무처리 균주를 여러 $\beta$-lactam계 항생물질에 적용하여 MIC를 비교해 본 결과 ampicillin 처리 균주의 MIC가 2~27배 가량 높은 것을 알 수 있었다. 이것은 본 균주가 ampicillin 처리함으로서 $\beta$-lactamase 생산을 유도하여 내성을 증가시킨 것으로 사료된다. 본 내성균주는 penicillin뿐만 아니라 cephalosporin계 항생물질에 대해서도 $\beta$-lactamase 생산을 유도하는 것을 알았다. 그 중에서도 300$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 cloxacillin이 효소생산유도에 가장 최적 농도였다. 항생물질 첨가 시기를 균의 생육시 기별로 조사한 결과 대수증식기가 가장 효과적인 결론을 얻었다. 이상의 결과로 본 내성균주는 다양한 $\beta$-lactam계 항생물질에 의하여 내성이 강하게 유도되는 특이적인 균주임을 시사한다.
I. 서론 : 식생활은 인간의 가장 원초적인 욕구이며 생존을 위한 기본조건입니다. 그러므로 식생활의 기본이 되는 식품은 사람에게 가식성, 영양성, 안전성을 충족시켜야 하며 여기에 생산자의 입장에서는 높은 생산성이 요구되고 있습니다. 이러한 식품의 구비조건은 과거 자급자족의 농경시대에는 생산자가 바로 소비자로서 커다란 문제를 제기하지 않았으나 도시화, 산업화된 현대사회에서는 생산자와 소비자가 다르며 식품은 상품으로서 판매되므로 소비자는 고품질의 안전한 식품을 요구하고 생산자는 수익성이 높은 고생산성의 식품을 상품으로서 생산하기에 이르렀습니다. 축산식품이 상품으로 생산되면서 생산자들은 더 높은 생산성을 요구하게 되었고 이러한 요구에 따라 축산분야에서는 가축 품종의 육종 개량과 함께 생산성을 저해하는 각종 질병의 예방과 치료약제 및 성장촉진과 사료효율을 개산할 수 있는 물질들을 사료첨가제로 개발하여 사용하게 되었습니다. 그러나 이러나 의도적으로 사용한 물질들은 대부분 항생제물질이나 화학적 합성품들로서 가축자체는 물론 생산물에 잔류되어 그 축산물을 이용하는 사람에게 유해작용의 우려를 갖게 하였습니다(의도적 오염). 또한 농작물의 생산성을 높이기 위하여 사용되는 농약들은 경우에 따라서는 샤료곡물에 잔류되어 사료를 통한 오염원ㅇ니이 될 수도 있고 목초지에 산포한 잔류성 농약이 목초를 오염시켜 뜻하지 않게 가축과 축산물을 오염시킬 수도 있습니다. 축산분야에서 잘 알려진 아플라톡신 같은 곰팡이 독소류는 오염된 사료원료에 의하여 가축에 피해를 일으킬 수 있으며 또 우유나 축산물을 통하여 사람에 피해를 줄 수 있습니다. 과학기술의 발달은 많은 공해요인들을 유발시켰으며 산업체에서 요구하는 고순도의 중금속류(수은, 납, 카드뮴 등)는 각종의 과학기계를 제작하는데 필수소재로써 우리의 생활을 윤택하게 하였지만 그 폐기물들은 우리의 생활주변을 오염시켜 그 환경에서 자라는 식물과 동물을 오염시키고 사람의 생활환경도 위태롭게 하고 있습니다.
토양에서 새로히 분리한 곰팡이를 배양하고 그의 배양액 중에 함암활성을 갖는 물질을 screening한 결과 시험균 B.subtilis에 대해 항균활성을 갖고 glutathoine에 의해 항균활성이 길항되는 물질을 생산하는 B-1123 균주를 얻었다. 생산균주의 형태학적, 배양학적 성상의 관찰 결과 B-1123 균주는 Aspergillus terreus로 동정되었다. 대두분을 질소원으로 한 배지에서 $30^{\circ}C$, 5일간 진탕배양하고 배양여액 중의 활성물질을 ethyl acetate로추출하고 silica gel column chromatography에 의해 정제 하여 연황색 판상결정을 얻었으며 B-1123 물질이라 명명했다.
Myxobacteria는 토양세균으로 활주하여 이동하며, 복잡한 생활사를 갖고 있다. 25년 이상의 연구결과 myxobacteria는 많은 생리활성물질을 생산한다는 사실이 밝혀졌으며, 지금까지 약 80종의 신규물질과 그들의 변이체가 450종이 확인되었다. 이들 물질들은 독특한 기작을 갖고 있는 것들이 많으며, 그 중에는 26종의 electron transport 저해제, 5종의 nucleic acid polymerase 저해제, 10종의 cytoskeleton에 작용하는 물질, 1종의 진균 acetyl-CoA carboxylase 저해제이다. 그러나 아직까지 myxobacteria 유래물질들을 대량으로 생산하기 위한 공정이 완벽하게 성립되어 있지 않고, 이들 물질들을 이용한 제품이 시판되는 상황은 아니지만, 머지않아 myxobacteria가 생산하는 생리활성물질들을 항균, 항암과 같은 질병치료 및 기타 다양한 분야에서 이용 가능하게 될 것이다.
물질확인은 화학물질 등록법에서 수행해야 하는 첫 단계로 올바른 물질확인은 이어지는 유해성 및 위해성 평가를 정확하게 효율적으로 하는데 필수적이다. 이에 톤수별 물질 등록을 모두 마친 EU REACH의 물질확인 절차를 유럽화학물질청 홈페이지 및 관련 지침서와 컨소시움 자료를 참고하여 살펴 보았고 물질확인과 물질의 동질성 확인 그리고 이를 위한 물질확인 프로파일 생성의 중요성을 고찰해보았다. 또한 기기분석에 의한 분석 결과 중 어떤 정보를 어떻게 정리하여 물질확인 프로파일을 생성하는지에 초점을 맞추어 몇 개 주요 유형별 물질을 사례로 제시해보았다. 분석과학은 화학물질 등록법이 정확하고 효율적으로 이행될 수 있도록 첫 단계인 물질확인에서 기여를 할 수 있는데 단, 법에 대한 이해를 기반으로 같은 물질의 등록자들의 분석 결과를 물질확인 프로파일로 최종 정리하여 공동 등록을 하는 등록자들과 관계 당국과 소통하는 것이 필수적이다.
볏짚을 이용하여 acetone-butanol을 생산하기 위해 전처리한 볏짚을 C. acetobutylicum KCTC 1037(ATCC 4259)과 Trichoderma viride로부터 얻은 섬유소 분해효소를 이용하여 동시당화 발효법 (SSF)으로 발효하였다. Ball-mill로 처리한 볏짚을 SSF로 발효한 결과 acetate와 butyrate안을 생산하였으나, alkali로 전처리한 기질은 230 mM 이상의 solvent를 생산하였다. 이와 같은 발효의 차이는 볏짚에는 alkali 처리로 분해되는 물질이 있으며, 이 물질이 solvent 생산을 저해하기 때문인 것으로 판단된다. 이러한 solvent 생산 저해물질은 물이나 유기용매에 불용성으로 lignin 유도체 혹은 잔류농약으로 추측된다.
자연계로부터 Vibrio sp.에 항균활성을 갖는 균을 검색하여 분리하고 분리균의 동정결과 Pseudomonas aeruginoso로 동정되었으며, 분리한 균의 항균성 물질의 최적 생산조건을 검토하며, 항균성 물질을 정제하여 그 안정성과 항균작용기작에 대해 조사한 결과 pH와 열에 대한 광범위한 안정성을 보였으며, 항균물질이 V. cholerae non-O1 ATCC 25872 세포에 대해 뚜렷한 용균작용을 하는 것을 관찰하였다.
우리 지역 토양환경에 도착해 살고 있는 토착 길항미생물을 분리, 선발, 육종하여 다시 지역모양으로 돌렸을 때 우점 능력이 크고 적응력이 큰 토착 생물방제균을 선발하고자 경북 경주지역에서 자연농법을 수행하고 있는 저병해경작지로부터 토착 길항미생물을 분리하였다. 이들 중 고추역병균 Phytophthora capsici의 생육을 강력히 길항하는 항생물질과 siderophore를 동시에 생산하는 복수 길항기작의 토착 길항세균 Pseudomonas fluorescens 2112를 선발하였고, 이 균주로부터 우선 항진균성 항생물질을 생산, 정제한 후 그 특성을 조사하였다. 이 항생물질은 산성 pH 조건에서는 매우 안정하였으나 알칼리성 용액에서는 불안정한 물질로 판단되었고, 또한 열에 비교적 안정하여 $80^{\circ}C$까지 30분동안 열처리하여도 항균활성을 50% 정도 유지하였다. P. fluorescens 2112로부터 이 균주의 중요 생물방제 기작인 항진균 항생물질을 단일물질 수준으로 분리하여 그 구조를 분석해 본 결과 선발된 균주가 생산하는 항생물질은 다른 Pseudomonas sp. 에서도 생산되는 것으로 알려진 2,4-diacetylphloroglucinol로 동정이 되었다. 고추역병균 P. capsici의 생육을 억제하는 토착 길항세균 P.fluorescens 2112가 생산하는 항진균 항생물질의 항균범위를 조사해 본 결과 다양한 식물병원성 진균에 방제력을 가지는 광범위 항생물질임을 확인 할 수 있었지만, Fusarium 속에 대해서는 큰 활성을 볼 수 있었다. 이 항진균 항생물질을 이용해 저해기작을 고추역병균 P. capsici의 포자를 대상으로 radioisotope labelling precursor [$^{3}$ H] Leucine, [$^{14}$ H] Glucose, [$^{3}$ H] Adenine 등으로 조사한 결과, 그 길항기작이 RNA 합성 저해로 추정되었다.
항종양 물질의 탐색 및 연구 작업이 미생물을 대상으로 행해져 온것은 이미 오래전부터 이며, 기존의 연구 발표된 것들을 볼때 미생물 스크리닝의 증요성은 점차 증대되어가고 있다. 이에 본 연구에서는 국내 토양에서 방선균 약 1000여주를 분리하여 항종양 물질을 생산하는 방선군의 분리, 동전하고, 그 생산물질의 특성을 밝히고자 하였다. 방선균의 분리는 전국 각지에선 채집한 토양시료 각 1 g 씩을 80 $^{\circ}C$에서 90분간 건조처리한후 멸균된 증류수를 이용하여 각 단계별로 희석하여 Starch nitrate casein agar와 Glycerol asparagine agar를 사용하여 방선균을 분리하였다. 분리된 방선균을 Yeast extract-malt extract 액체 배지에서 7일간(160 rpm/28 $^{\circ}C$) 배양하였다. 여기에서 얻어진 배양액을 이용하여 항종양능을 확인한기 위해서 암세포주인 L1210주와 P388 D$_1$주, 정상 세포주로는 Vero 세포주를 이용한 MTT colorimetric assay를 이용하였다. 이들 실현에 대한 결과로써 S-104, 117, 409의 세 균주의 항종양물질 생산 균주를 분리하였다. 이들 균주가 생산하는 물질들은 기존의 시판 항암제인 Adriamycin에 비해 높게 나타났으며, 이들 균주의 동정은 ISP의 기준에 의하여 행하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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