• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.204-204
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• 1994

Ganoderma lucidum의 균사체로 부터 얻어진 G009의 이화학적 특성을 규명하였다. G009는 넓은 범위의 분자량 분포를 가지고 있는 다당체로 분자량 9.4kD의 물질이 주성분이었다 G009의 당의 함량은 약 70%이었고 단백질은 약 2.4%인 것으로 나타났다. G009의 주요 구성당은 glucose, xylose, mannose, galactose 등이었고, glycine, leucine, alanine, valine, isoleucine, proline 등 17종의 아미노산이 확인되었다. 유기원소 분석 결과 G009는 탄소 약 40%, 수소 5.7%, 질소 1.8%의 구성비를 보였으며, 무기원소 분석결과 Ca, Mg, Zn 등이 확인되었다. 이상의 결과로 부터 G009는 9.4 kD의 분자량을 갖는 단백다당체를 주성분으로 하는 당화합물로 추정된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.277-277
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• 1994

Human immunodeficiency virus type (HIV-1 )은 복사에 필수적인 전사촉진단질유전자인 tat를 가지고 있다. 우리는 유전자 재조합기법을 사용하여 tat 유전자와 nef 유전자가 결핍된 HIV-1을 제조하였다. nef, tat-결핍 HIV-1 은 C $D_4$$^{+T}$ 세포에서 전혀 복제를 하지 못하였다. 반면, tat 단백질을 발현하도록 만들어진 재조합 Jurkat-tat세포에서는 복제능력을 다시 회복함을 알 수 있었다. 이러한 nef, tat-결핍 바이러스를 Jurkat-tat 세포에서 두달이상 계대배양했을 때, revertant가 전혀 생기지 않았다. 또한, nef, tat- 결핍 HIV-1 에 chloramphenicol acetyltransferase 유전자를 삽입시키고, 이의 발현정도를 측정함으로써 원형바이러스와 마찬가지로 민감하면서도 안전하고 편리하게 바이러스의 복제를 측정할 수 있었다. nef, tat- 결핍 바이러스는 항 HIV-1 제의 활성도를 측정하고자할 때 원형 바이러스의 대용으로 안전하게 사용될 수 있을것이다.다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.262-262
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• 1994

Ras oncogene의 산물로서 대부분의 암조직이나 transformed human cell에서 거의 공통적으로 발견되는 p21 단백질은 C-terminal processing에 의해 먼저 C-terminal cysyeine에 palmition 된 후 carboxylmethylation 된다. Palmitation은 transforming activity의 요건인 세포막에 대한 친화력을 유지시키기 위한것으로 추측되며, cysteine residue의 carboxylmethylation의 의미는 아직 확실히 밝혀지고 있지 않으나 세포막에 대한 친화력을 증가 시키는 것으로 추측되고있다. 본 연구에서는 S-Farnesylcysteine Methyltransferase의 기질로서 N-acetyl-S-trans, trans-farnesyl-L-cysteine(AFC)을 합성하였으며, 본 실험실에서 계속 연구하여 온 돼지 간장으로 부터 정제한 천연 단백성 Methylation Inhibitor의 S-Farnesylcysteine Methyltransferase 활성에 대한 억제효과를 검색하였다. 천연 단백성 Methylation Inhibitor는 돼지 간조직의 soluble fraction을 열처리하여 Sephadex G-25 column chromatngraphy한 후 reverse phase HPLC로 정제하였다. 본 inhibitor는 약 10개의 아미노산으로 구성된 peptide성 천연물질로 분자량은 1,400 Da 으로서 합성한 AFC를 기질로 하였을 때, 흰쥐 뇌 조직내 S-Farnesylcysteine methyltransferase에 대한 $IC_{50}$/은 0,82 $\times$ $10^{-6}$ M이었으며 또한 human cancer cell line의 S-Farnesylcysteine Methyltransferase에 대해서도 현저한 저해효과를 나타내었다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.250-250
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• 1994

진정성 cyclopeptide인 sanjoinine-A의 진정작용을 분자 수준에서 밝히고자 sanjoinine-A의 ionophore 활성과 칼슘 결합 단백질인 calmodulin과의 결합을 CD와 NMR을 이용하여 연구하였다 sanjoinine-A는 칼슘과 마그네슘에 대하여 ionophore 활성이 있었으며 calmodulin과 두 단계로 결합한다는 것을 알 수 있었다. sanjoinine-A는 칼슘의 유무에 관계없이 calmodulin과 결합하였으며 CD와 NMR 스펙트럼상에서 현저한 변화가 있었다. sanjoinine-A가 calmodulin과 결합시 생체 내에서 활성 상태인 칼슘결합 calmodulin에 비하여 a-helix 구조비율이 감소하였으며 칼슘결합 loop에서 수소결합을 하고있는 amide 수소들의 exchange rate가 현저히 빨라졌다. sanjoinine-A는 calmodulin과 결합하여 칼슘결합 loop 주위의 공간구조를 변형시켜 그 활성을 변화시키는 것으로 보인다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.213-213
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• 1994

배풍등, 등혹 및 ginsenoside Rh$_1$의 간암세포에 대한 세포독성작용, 인삼 Rh$_1$의 세포보호작용, 비파의 ursolic acid 생체방어기전 활성화 및 산화억제작용, ononin의 radical 제거능을 검토하였다. 그 결과 배풍등 CHCl$_3$분획 및 등혹 CHCl$_3$분획의 간암세포에 대한 강한 세포독성작용을 나타내었으며 배풍등 CHCl$_3$은 sarcoma 180 이식 종양조직의 성장을 유의성있게 억제하였다. Ursolic acid는 지질과산화, 단백질 산화억제와 catalase, GSH S-transferase를 활성화시켰다. 인삼 saponin은 SOD 및 nonprotein-SH를 증가시키고, 지질과산화를 억제시켰다. Ginsenoside Rh$_1$ 및 Rh$_2$는 각각 radical에 대한 세포보호작용과 간암세포 세포독작용을 나타내었다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1996년도 춘계학술대회
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• pp.224-224
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• 1996

홍삼 총 사포닌 투여군은 대조군과 비교시 total free radical 및 malondialdchydc 농도는 유의상 있게 감소되었으며, 단백질의 carbonyl 농도는 다소 감소하는 경향을 나타내었다. 그리고 홍삼 총 사포닌 투여군의 경우 Cu, Zn-SOD, catalasc, GSII reductase 등의 항산화 효소와 nonprotein-SH가 대조군 보다 증가되었다. 홍삼 총 사포닌의 구성성분들인 ginsenoside Rb$_1$, Rb$_2$, Rc, Rd, Re, Rg$_1$, Rh$_1$, Rh$_2$, Rf 중 ginsenoside Rh$_2$는 catalase 활성을 대조군보다 유의성있게 증가시켰으며, ginsenoside Rh$_1$ 및 Rc의 경우 GSII peroxidase 활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 그리고 Cu, Zn-SOD의 경우 ginsenoside Rc는 대조군보다 유의성있게 감소시켰으며, GSII reductase의 경우 유의성있는 변화는 관찰되지 않았다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.66-66
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• 1993

혈액 세포 형성 과정인 조혈 작용은 콜로니 자극인자 (Colony Stimulating Factor, CSF)라 불리는 몇 종류의 당 단백질에 의해 조절된다. 이들 자극인자 중, GM-CSF는 다계통에 작용하는 조절인자로서 과립구와 거식세포의 생성을 조절한다고 알려져 있다 한편 GM-CSF는 생체내에서 백혈구의 형성을 조절하는 인자이기 때문에 골수이식을 한 환자 및 화학요법이나 방사선 치료를 받는 암환자에게서 발생하는 백혈구의 감소현상을 완화시키는 역할을 한다. 혈액의 보조화와 관련하여 의학적 효능을 나타낼 것으로 간주되는 GM-CSF를 유전자 재조합 기술로 효모에서 발현, 정제하여 물리화학적 특성 및 역가를 측정하는 것이 이 연구의 기본목적이다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.145-145
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• 1993

일반적으로 단백질의 정제를 위한 가장 효과적인 방법은 affinity chromatography법으로 알려져 있다. 본 연구에서는 베타 수용체의 순수정제를 위한 효과적인 affinity matrix를 제조하고 이의 특징을 확인함으로써 수용체 정제를 위한 기초를 수립하고자 하였다. Bisoxirane reagent인 1,4-butanediol diglycydyl ether를 Sepharose CL-4B gel과 반응시켜 탄노원자 10개 길이의 spacer arm을 부착시켰다. 여기에 sodium persulfate, dithiothreitol을 연속적으로 사용하여 -SH기를 도입시긴 추 free radical 반응을 이용하여 베타수용체 길항제인 alprenolol을 부착시킴으로써 affinity gel을 제조하였다. alprenolol치 부착반응을 위한 최적온도는 4$0^{\circ}C$로 나타났으며, semimicro Kjeldahl 질소 분석법을 적용하여 gel을 분석한 결과 ml당 0.4-0.6 $\mu$ mol의 alprenolol이 결합하였음을 확인하였다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1995년도 춘계학술대회
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• pp.98-98
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• 1995

독사 또는 곤충의 독 30여종을 대상으로 SNU-1 위암세포에 대하여 MTT test를 실시한 결과 세포 독성 활성이 제일 높은 킹코브라(Ophiophagus hannah)의 venom을 가지고 세포 독성 물질을 정제하였다. Gel Filtration Chromatography와 Anion Exchange Chromatography로 정제한 4번째 peak만이 MTT/SRB test결과 IC$_{50}$ value 0.947$\mu\textrm{g}$/ml이었다. 음이온 교환 크로마토그라피로 정제한 단백질을 PRO-RPC로 더 분리하여 순수한 단일성분을 얻었으며 맹장암, 대장암, melanoma, fibrosarcoma 세포에 대해 독성을 확인하였고, 광학 및 전자 현미경에 의해 암세포의 분화와 성장이 억제됨을 재확인하였다. 또한 thymidine uptake asaay에서 암세포의 증식이 억제되었고, 또한 EDTA, $Zn^{++}$, $Ba^{++}$ 첨가로 세포 독성 활성이 증가되었다. (중략)

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.55-55
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• 1993

Farnesyl Protein transferase(FPT)는 발암유전자 ras의 단백질 산물인 p$^{21}$의 post-translational modification의 첫 단계인 ras-farnesylation에 관여하는 효소로 본 연구에서는 정제된 FPT와 E. coli에서의 발현 system을 이용하여 FPT의 구조와 기능을 밝히고 이를 FPT 방해제의 설계에 이용하고자 한다. Bovine testis에 존재하는 FPT를 30%-50%의 Ammonium sulfate로 fractionation하고, DEAE-Sephacel, Sephacryl S-300 column을 통과시킨 후 peptide(KKCVIM) affinity column을 이용하여 순수 정제하였다. 정제된 효소의 분자량은 gel-filtration에 의해 100KDa으로 추정되었고 SDS-PAGE 결과 49KDa과 46KDa의 두 subunit로 구성되었음이 확인되었다. 효소활성에는 $Mg^{2＋}$ 와 $Zn^{2＋}$가 필수적이며 최적 pH는 7.0이었다. Yeast의 FPT의 두 subunit 유전자는 Yeast genomic DNA를 template로 사용하고 각 subunit에 specific한 합성된 primer들과 vent polymerase를 이용하여 Polymerase chain reaction을 통하여 얻었다. 두 유전자를 pBluescriptII SK＋ vector를 변형시킨 두 vector, pBSK＋4와 pBChl＋4에 재조합 시킨 후 E.coli에 transformation시켜 발현시켰다. 현재 정제된 Bovine FPT와 E. coli에서 발현된 Yeast FPT의 chemical modification과 site-directed mutagenesis를 통하여 FPT의 active site와 substrate binding site에 관한 연구를 진행시키고 있다.