본 연구에서는 누에 단백질을 미생물발효에 의해 생리활성물질로 개발하기 위한 기초 연구의 일환으로 단백질 분해능이 높은 Bacillus 및 Lactobacillus 균주로 동결건조 및 열풍건조 누에분말을 발효시켜 항산화 활성, 혈전용해 활성, tyrosinase 저해 활성, 단백질 패턴 비교 등을 비교 검토하였다. Native-PAGE 및 SDS-PAGE로 누에 단백질을 분석 한 결과 동결건조 누에분말에서 많은 종류의 밴드가 관찰되었고, B. subtilis 발효에 의해서 단백질 패턴과 양적인 차이가 관찰되었다. 열풍 및 동결건조 누에분말의 주요 미네랄은 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 아연 이였으며, 주요 아미노산은 glycine, alanine, glutamic acid, aspartic acid 및 serine 이였고, 주요 지방산은 linolenic acid, oleic acid 및 linoleic acid 이였다. 혈전용해 활성은 동결 및 열풍건조 누에분말 모두 B. subtilis 균주 5% 접종에서 가장 높았으며, 동결건조 발효누에서 보다 높은 혈전용해 활성이 나타났다. Tyrosinase 저해 효과는 열풍건조 누에분말 보다 동결건조 누에분말의 물 및 70% 메탄올 추출물에서 높았다. DPPH free-radical 소거능은 동결건조 누에분말 보다 열풍건조 누에분말에서 조금 높게 나왔으며, L. hilgardii 균주에 의한 발효누에가 B. subtilis 균주에 의한 발효 누에보다 항산화 활성이 약간 더 높은 것으로 관찰되었으나, 모든 시료에서 시판 항산화제인 BHT 보다는 낮았다. 이상의 실험결과에서 누에 단백질을 생리활성물질로 개발하기 위한 기초 자료를 얻기 위하여 단백질 분해능이 높은 B. subtilis 균주로 발효시킨 발효누에에서 단백질 함량 증가, 전기영동 단백질 패턴 변화, 혈전 용해 활성 및 항산화 활성 증가와 같은 생리활성작용이 강화됨으로써 건강기능식품 소재 개발 가능성이 확인되었다.
인간이 최소 8,500년 이상 이용하고 섭취를 해온 누에는 화학물질과 공해에 매우 민감하다. 뽕나무 밭이나 누에를 키우는 잠실 근처의 농작물 재배용 밭이나 과수원에서 병해충 방제를 위해 살포한 농약이 비산 되면, 매우 적은 양의 농약이 누에의 먹이가 되는 뽕나무 잎을 오염시키거나, 잠실로 침투해도 누에 유충은 섭식을 더 이상 하지 않아서 성장을 멈추고 죽는 특징이 있다(양잠보급과, 2022). 그리고, 누에 유충은 가축 배설물에서 나는 냄새와 차량통행에서 나오는 공해 물질과 먼지에도 매우 민감하므로(양잠보급과, 2022), 정상적으로 성장한 누에는 천연식품으로 간주할 수 있다. 누에제품들에 대한 성분분석결과를 보면 5령3일 동결건조 누에 분말(권해용 등, 2019)과 홍잠 분말(Ji 등, 2016, 2017, 2019)에서는 중금속이 전혀 검출되지 않는다. 그러므로, 누에를 이용하여 제조된 제품들의 안전성은 다른 곤충식품이나 육류에 비하여 매우 높다. 하지만, 누에는 오로지 뽕 나뭇잎 만을 섭취하고, 5령 동안 전 생애 섭취하는 뽕 나뭇잎의 80% 이상을 섭취하기 때문에 단 기간 고강도의 노동이 필요하므로, 제품의 단가가 높은 단점을 가지고 있다. 이러한 문제점을 해결하기 위해서는 누에 사육에 자동화 시스템을 도입해서, 노동력 투입을 줄이면서 품질이 일정한 제품을 생산할 수 있어야 한다. 현재 선진국들은 의생명과학의 발전과 개인 위생의 증진으로 기대수명이 빠르게 늘어나고 있다. 대한민국을 포함한 많은 여러 선진국은 2030년에 기대수명이 90세를 초과할 것이라고 예측되고 있다(Kontis 등, 2017). 하지만, 65세 이상의 노인은 하나 이상의 만성질환으로 고통을 받고 있어서 기대수명(또는 기대여명)과 질병없이 건강하게 살아가는 건강수명과는 9년 내외의 차이가 나고 있다(Garmany 등, 2021). 2021년 현재 노인인구의 비율은 16.5%이지만(통계청, 2021), 노인이 사용하는 건강보험 진료비 비율은 2020년에 이미 총 진료비에서 43.4%에 도달하였다(건강보험심사평가원, 2021). 그러므로, 향후 개인과 국가의 의료비용을 절감하기 위해서는 건강수명을 늘려야 한다. 누에의 산물들은 다양한 건강증진 효과가 있고(표1과 2), 인류가 이미 8500년 이상 섭취를 하여온 대부분의 사람들에게는 부작용이 없는 식품이다. 그리고 누에 산물 중 홍잠의 경우는 동물 모델의 건강수명을 증진시켜 줌이 알려져 있으므로(Choi 등, 2017b; Mai 등, 2022; Nguyen 등, 2016; Park 등, 2022), 향후 홍잠을 이용한 새로운 제품을 개발하고 판매하여 대중화되면, 국민들의 건강수명이 증대됨으로서 의료비용의 감소를 가져오고 개인의 행복이 증진될 것이다.
현대 사회는 지금 기능성 식품에 지대한 관심이 높아졌다. 특히 성인병에 좋은 식품들의 연구가 활발히 이루어지는 실정이다(Kim et al 2003). 누에 가루 첨가가 다식의 품질 특성에 미치는 영향을 보기 위해 누에 분말 첨가 비율(0%, 10%, 20%, 30%, 40%)을 달리하여 다식을 제조한 다음, 다식의 수분, 색도 측정, 물성측성, 관능 평가를 한 결과 다음과 같다. 수분 함량은 누에가루 첨가량이 늘어날수록 유의적으로 증가하였다. 누에 가루다식의 색도 측정 결과 L값은 대조군에 비해 누에 가루의 첨가량이 증가할수록 유의적으로 낮아졌으며(p<0.05), a와 b값은 감소하는 경향을 보였다. 누에 가루 첨가 수준에 따른 다식의 물성을 측정한 결과, 경도(hardness)는 첨가량이 많을수록 단단함의 정도가 유의적으로 감소하는 것을 보였으며(p<0.05), 부착성(adhesiveness)은 누에 가루 첨가량이 40%에서 높게 나왔다. 누에 가루 첨가 수준에 따른 다식의 관능 특성을 조사한 결과, 30% 누에 가루를 첨가한 다식이 색, 향, 맛 등의 기호도가 높은 것으로 조사되었고, 씹힘성은 누에 가루를 첨가하지 않은 다식의 기호도가 유의적으로 가장 낮았다(p<0.05). 따라서 누에 분말을30%로 첨가한 다식의 기호도와 전체적인 품질 특성이 가장 적합한 것으로 생각되어지며, 기능성식품으로 우리 전통적인 다식에 누에 가루를 첨가하여 활용되어질 수 있으리라 보여진다.
본 연구의 목적은 누에형질전환 기술을 이용하여 누에체액에서 melittin 항균펩타이드를 생산하는 것으로서, 본 실험에서는 누에유래의 액틴3 프로모터를 이용하여 melittin 항균펩타이드를 발현시켰다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 300개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 11 bloods의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 G2 세대 누에형질전환체를 5령 5일 유충까지 사육 후, 체액을 채취한 후 전처리 하였다. 이 시료를 항균활성검정을 하였고, 총 10마리의 누에를 선발할 수 있었다. 이렇게 선발 된 누에는 서로 교배를 통해서 계대사육을 하였다. 이러한 과정으로 선발된 G3세대 누에형질전환체를 이용하여 앞의 과정과 동일한 방법으로 항균할성을 검정하였다. 그 결과 대조군으로 사용된 시그마사의 melittin(0.016 mg/ml)과 거의 동일한 항균활성을 나타내었다. 이상의 결과에서 melittin 항균펩타이드를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.
누에의 인공사료에 있어서 옥수수의 수병을 조직유원으로서 이용할 수 있지를 알기 위해서 옥수수의 수병을 함유한 인공사료가 누에의 성장에 미치는 영향을 조사하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 옥수수의 수병을 함유한 인공사료는 누에의 섭식에 주는 나쁜 영향은 없는 것 같다. 2. 옥수수의 수병을 함유한 인공사료는 누에의 성장 및 견질에도 주는 나쁜 영향은 없는 것 같다. 3. 이상의 결과를 종합해 볼 때, 옥수수의 수병은 누에의 인공사료에 있어서 하나의 총섬유원으로 적당할 것 같다.
누에 인공동류에 망초, 결명차, 방둠산이 및 동부의 엽분말을 혼입하여 조제한 동료로 누에를 동육한 결과와 그 누에의 체액 중장 견사선등의 전기영동상 및 공식식물의 성분분석내용을 다음과 같이 요약한다. 1. 기본누에인공동료에 망초, 결명차, 방둠산이, 동부의 엽분말을 건물동으로 2-5%정도 혼입한 구에서 섭식과 소화가 조장되었으며 누에의 각종 실용형질도 양호한 경향이었으며 특히 동부와 방둠산이는 첨가효과가 두드러지게 나타났다. 2. 4종의 공식식물엽분말을 2-4종씩 여러 조합으로 혼입한 동료로 누에를 동육한 결과 누에의 섭식과 소화에 대한 각식물성분간의 상승효과는 인정되지 아니하였다. 3. 누에의 채액, 중상 및 견사선의 Esterase Protease Phosphatase의 전기영동상은 처리간에 다소 차이가 인정되었다. 일반적으로 섭식과 소화가 양호한 구에서는 1-2개의 영동대가 더 검출되는 경향이 있었다. 4. 공식식물성분은 상엽에 비해서 전분조지방조단백질무기염류등의 함유율이 현저히 높았으며 섭식에 직접 관여하는 휘발성성분은 찾아내지 못하였다.
본 연구는 해충에 대한 생물적 방제제로서 유용한 곤충병원성 선충의 효율적 검색과 in vitro에서의 대량 증식 가능성을 조사하였으며 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 토양으로부터 곤충병원성 선충의 검색을 위한 trap용 곤충으로는 꿀벌부채명나방보다 누에가 감수성이 높았다. 2. Sterinernema, Rhabditidae, Diplogastroidae과 계통의 선충은 꿀벌부채명나방 유충에서의 증식은 5만 마리 이하였으나, 누에 유충에서는 15만에서 35만 마리의 선충 증식이 일어났으며, 누에 번데기에서는 25만 마리 이상의 선충이 증식되었다. 누에 증식에 있어 누에 번데기를 사용했을 때가 가장 우수하였다. 3. Sterinernema, Rhabditidae, Diplogastroidae과 계통의 선충에 대한 증식률은 열풍건조 번데기의 흡수처리 후 배양 및 기타 천연물 인공배지에서 증식은 가능하였으나 살아있는 누에 유충보다는 증식률이 낮았다. 4. 이상의 결과로 토양으로부터 곤충병원성 선충을 분리하는데 누에를 이용한 trap이 매우 우수하였으며, 선충의 증식에 있어 누에 유충 및 번데기가 효과적인 것으로 판단된다.
국내 분리주의 BmNPV를 이용한 전이벡터 pBm-KSK1에 외래 유전자로서 E. coli $\beta$-galactosidase 유전자를 클로닝하여 제작한 재조합 바이러스 BmK1-lacZ의 발현 증대를 위해 재조합 바이러스 감염세포주에 누에 체액의 첨가에 따른 발현효율을 조사하였다. 재조합 바이러스의 배양세포주에서 외래 유전자 발현에 대한 누에 체액의 첨가 효과는 FBS가 2% 또는 5% 일때 누에 체액 2%의 소량 첨가만으로도 누에체액이 첨가되지 않았을 때에 비해 약 2배 이상 높은 발현량을 확인하였으며, 그 보다 FBS가 전혀 첨가되지 않고 단지 누에 체액 2% 첨가만으로도 FBS 첨가시와 마찬가지의 높은 발현량을 보여 누에 체액에 의한 FBS의 대체 효과를 나타내었다.
동충하초 포자 현탁액을 누에에 경피 접종하고 발병경과를 관찰하여 누에의 형태적 변화와 균사체 형성 번데기의 형태 및 성분변화를 조사하였다. 누에 유충 때 발병 치사된 누에는 불완전세대를 거쳐 분생포자를 형성하고 번데기 때 병사한 번데기는 균사체를 형성하고 자낭포자를 생산하는 완전 세대의 동충하초가 되었다. 발병하지 않은 건강한 번데기와 균사체 형성 번데기의 성분변화는 유리아미노산, 구성아미노산, 지방산, 핵산물질, 모두 차이가 있었다.
본 연구에서는, 무분별하게 사용되고 있는 민간요법의 과학적인 접근의 일환으로 인슐린 비의존형 당뇨환자를 대상으로 당뇨치료약물을 복용하는 당뇨군과 당뇨치료약물을 복용하지 않는 당뇨군 그리고 정상군으로 나누어 각군 모두에게 누에분말을 복용시켜 혈당 및 혈중 당화헤모글로빈, 인슐린, 그리고 혈중 지질농도에 미치는 영향을 관찰하여 요약하면 다음과 같다. 1) 신장, 체중, BMI, 둔부둘레는 세군간에 차이가 없었다. 허리둘레는 기존의 당뇨치료약물과 누에분말을 동시에 투여받는 당뇨군에서 다른 두 군에 비해 유의적으로 높아 WHR은 당뇨치료 약물을 동시에 복용한 당뇨군>누에분말만 복용한 당뇨군>정상군의 순으로 나타났다. 누에분말을 투여받는 동안 체중의 변화는 관찰되지 않았다. 2) 당뇨군과 정상군 사이에 열량 및 열량구성비에는차이가 없었으며, 연구 진행동안의 유의적인 변화도 관찰되지 않았다. 실험기간동안 총열량 섭취량은 남자의 경우, 권장량의 87.7%, 여자의 경우, 권장량의 86.2% 를 섭취하고 있었다. 하루동안 누에분말로 공급된 단백질 함량은 0.279이었으며 식이로의 단백질섭취는 남녀 각각 권장량의 97.5%. 108.3%를 섭취하고 있었다. 총 열량구성비는 남자의 경우 탄수화물 단백질. 지방이 68 : 15 : 17, 여자의 경우 69 : 16 : 15이었다. 3) 당뇨치료 약물을 누에분말과 동시에 복용한 당뇨군에서 누에분말 복용후 공복시 혈당이 7.4%, 식사후 2시간의 혈당이 19.4% 감소하는 경향이었고, 누에분말만 섭취한 당뇨군은 누에분말 복용후 혈당이 공복시 9.7%, 식사후 2시간시 23.4%의 감소경향을 나타냈다. 공복시와 식사후 2시간의 혈당 모두 누에분말 섭취후에도 정상범위보다 다소 높았으나, 혈당감소율(%)은 당뇨치료약물을 동시에 복용한 당뇨군에 비해 누에분말만 섭취한 당뇨군에서 큰 경향이었다. 정상군의 혈당에 는 큰 변화가 없었다. 4) 당뇨치료 약물을 동시에 복용한 당뇨군이 누에분말만 복용한 당뇨군에 비해 당화 헤모글로빈이 낮았고 정상군은 더 낮았다. 4주동안 누에분말 복용 후 당화헤모글로빈의 변화는 관찰되지 않았다. 5) 본 연구 대상자들의 공복시 인슐린 농도는 당뇨치료 약물을 동시에 복용한 당뇨군에서 누에분말만 복용한 당뇨군과 정상군에 비해 높았다. 누에분말 복용에 따른 공복시 인슐린 농도의 유의적인 변화는 관찰되지 않았다. 6) 누에분말 복용에 따른 각 군간의 혈중 지질 농도의 유의적인 변화가 관찰되지 않았다. 혈중 중성지방의 농도는 당뇨치료 약물을 동시에 복용한 당뇨군의 경우 8.5%, 누에분말만 섭취한 당뇨군의 경우 9.0% 그리고 정상군은 3.4%가 감소되는 경향을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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