The present study was carried out to investigate the effects of maturation media on penetrability of pig oocytes by liquid boar sperm coincubated with different sperm concentrations in a modified Trisbuffered medium (mTBM). Follicular oocytes collected from ovaries of prepubertal gilts were matured in a modified TCM-199 (mTCM-199) medium, modified Waymouth MB 752/1 (mWaymouth MB 752/1) medium or NCSU-23 medium. Oocytes (30~40) were transferred into each well of a Nunc 4-well multidish containing 0.5 $m\ell$ maturation medium. The spermich portion of ejaculates with greater than 90% motile sperm were used in the experiment. The semen was cooled 22 to 24$^{\circ}C$ over 2 h period. The semen was diluted with Beltsville Thawing Solution (BTS) extender at room temperature to give 2$\times$10$^{8}$ sperm/$m\ell$ in 100 $m\ell$ plastic bottle. Liquid boar semen of 30 $m\ell$ in 100 $m\ell$ plastic bottle was kept at 17$^{\circ}C$ far 5 days. The sperm with greater than 70% motility after day 5 of storage were used for in-vitro fertilization (IVF). After 44 h maturation of immature oocytes in 5% $CO_2$in air at 38.5$^{\circ}C$, cumulus cells were removed and oocytes (30~40) were coincubated for 6 h in 0.5 $m\ell$ mTBM fertilization medium with five different (1$\times$10$^{6}$ , 2$\times$10$^{6}$ , 4$\times$10$^{6}$ , 6$\times$10$^{6}$, 10$\times$10$^{6}$$m\ell$) sperm concentrations. At 6 h after IVF, oocytes were transferred into 0.5 $m\ell$ NCSU-23 culture medium fur further culture of 6 h. At 12 h after IVF, sperm penetration, polyspermy and male pronuclear formation of oocytes were evaluated. Oocytes of NCSU-23 maturation medium decreased polyspermy and increased male pronuclear formation compared to those of mTCM199 and mWaymouth MB 752/1 maturation media. Of oocytes matured in NCSU-23 medium and inseminated in mTBM medium with 2~4$\times$10$^{6}$$m\ell$ sperm concentrations, 50.8~50.9% showed sperm penetration, 13.3~19.5% polyspermy and 43.9~45.4% male pronuclear formation. In conclusion, we found out that oocytes matured in NCSU23 medium and inseminated in mTBM medium showed superior invitro fertilization compared to those matured in mTCM199 and mWaymouth MB 752/1 maturation media and inseminated in mTBM medium. The optimum sperm concentrations for in-vitro fertilization of oocytes matured in NCSU-23 medium by liquid boar semen stored at 17$^{\circ}C$ for 5 days were 2~4$\times$10$^{6}$$m\ell$.
Jung, Y.;Lee, H. J.;Lee, S. H.;Park, S. S.;Hong, K. C.
Journal of Embryo Transfer
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v.10
no.2
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pp.139-144
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1995
10% ethanol에 의한 처녀발생유가 및 체외수정된 돼지 난포란을 CZB와 CRlaa 에서 배양하여 배발달율을 조사하였다. 또한 CZB에 각기 다른 농도의 cholesterol (0$\mu$g/mL, 2$\mu$g/mL, 5$\mu$g/mL, 10$\mu$g/mL)을 첨가한 후 체외수정된 돼지 난포란을 배양하여 배발달률을 조사하였다. CZB 구는 BOEC와 공배양하였다. 처녀발생유가 48시간 후 2~8세포기로 발달한 난자의 비율은 CZB 구가 32.2%, CRlaa구가 16.8%였으며, 192시간후 상실배로 발달한 난자의 비율은 CZB구가 5.75%, CRlaa구가 0%였다. 체외수정 48시간 후 2~8세포기로 발달한 난자의 비율은 CZB 구가 42.4%, 81%, CRlaa 구가 17.6%였으며, 192시간 후 상실배로 발달한 난자의 비율은 CZB 구가 5.81%, CRlaa 구가 0%였다. 각기 다른 농도의 cholesterol이 첨가된 CZB구에서 상실배로 발달한 난자의 비율은 각각 0,10,0.45,0%였다.
Jeong, E. S.;Kweon, O. K.;Lee, B. C.;Hwang, W. S.;Nakao, T.;Moriyoshi, M.;Nakada, K.
Journal of Embryo Transfer
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v.11
no.1
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pp.51-69
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1996
본 실험은 촉진 및 호르몬 측정으로는 알기 힘든 난소의 정상 혹은 병리학적 형태 및 변화를 알아보기 위하여 실시하였다. 실험에서 도살장으로부터 채취된 난소 100개를 수침법으로 초음파 사진을 찍고 그 실제 단면과 비교하였다. 그리고, 홀스타인 50두에서 직장 벽을 통해 난소를 초음파로 관찰하여 난소의 정상 상태 및 병적 상태를 조사하였다. 이 기초 실험을 바탕으로 하여 홀스타인 소 1두를 과배란 처리하여 42일간 난소의 형태 및 변화를 직장 벽을 통해 초음파로 관찰하고 난포의 크기를 측정하였다. 수침법을 통한 난소의 관찰로 난포와 황체의 정상적 . 비정상적인 구조를 관찰할 수 있었고, 과배란 처리한 소 난소의 관찰로 난포와 황체의 능동적 상호작용을 관찰할 수 있었다.
This study was conducted to find out the effect of follicle size and oocyte type on in vitro maturation of poricine follicular oocytes. TCM-HEPEAS medium was used to basic medium, and the oocyte matured in vitro was stained with the Rapid staining method. The results obtained were summarized as follows; 1. The number of follicles an ovary was 20.5. The number of A-and B-typed oocytes an ovary was 2.34. The proportion of A-and b-types oocytes was 40% of the recovery oocytes. 2. Cumulus expanison indexes(CEI) by the follicle size were 1.62∼2.34(<2mm), 1.27∼2.28(2∼5mm) and 1.46∼2.75(>5mm). It was no differ to maturation rate by the follicle size. 3. The degree of oocyte maturation based on oocyte type did not differ for B-and C-typed oocyted but the index of oocyte type A was higher than that of b-and C-typed oocytes. 4. When follicluar oocytes were cultured for 42 hours, the proportion of the Met-II(second metaphase) stage were 22.5% (degree 1), 35.4%(degree 2) and 65.5% (degree 3).
Alteration in ion channel or transporter expression levels affects cell volume which is produced by movement of water and ion across the plasma membrane. In particular, aquaporin (AQP) channels among ion channels play a crucial role in movement of water across the cell membrane. This study was performed to identify whether AQP expression is changed in bovine follicular cystic follicles using microarray, RT-PCR and Western blotting analyses. In microarray data, AQP4 expression was decreased, whereas AQP7 was increased in cystic follicles. Additional experiments were focused on the AQP7 expression increased in cystic follicles. The microarray data was confirmed by semi-quantitative polymerase chain reaction (PCR) and Western blot analysis. AQP7 mRNA and protein expressions were significantly increased in the cystic follicles (p<0.05). Application of estrogen ($10{\mu}g/ml$) to bovine ovarian cells showed a trend of increase in AQP7 expression. From these results, we suggest that the increase in AQP7 expression in cystic follicles may play an important role in movement of water in bovine ovary. In addition, AQP7, a aquaglyceroporin permeating water and glycerol, could be a good target in development of methods for the cryopreservation of bovine ovary.
Leptin, a product of the obese gene, is associated not only with obesity but also with female reproductive function, but it has not yet been ascertained whether leptin acts directly on the ovary or indirectly via the hypothalamus-pituitary pathway. Therefore, the object of this study was to investigate the expession of leptin and its receptor in the rat ovary by immunohistochemistry and RT-PCR during the estrous cycle. Immunohistochemistry results showed that leptin was stained in the theca cells and in part of granulosa cells in atretic follicles, whereas leptin receptor was localized in the interstitial cells and ova in preantral follicies. In particular, leptin and its receptor in atretic follicles displayed more intensive staining compared to those in normal follicles. During the estrous cycle, the mRNA expression of leptin and its receptor in the ovary was detected by RT-PCR and estradiol, progesterone, and leptin levels in the serum was measured by ELISA. The leptin level in the serum on metestrous phase was significantly higher than that on estrous phase. Similar to leptin level, progesterone level increased on metestrous phase. Leptin mRNA was not detected throughout the estrous cycle, whereas leptin receptor mRNA was expressed on all phases of estrous cycle excepting the diestrous phase. These results suggest that leptin might be directly involved in the regulation of ovarian function in rat.
The purpose of the present study was to set up basic information of size and status of ovaries by using ultrasonography to retrieve in vivo matured oocytes with ovum pick- up method. Ovaries were collected from the abattoir in Jeju in May and June which is breeding season. When the size of ovaries on ultrasonography was compared with real size measured by caliper, no significant difference was shown (p<0.05). The number of preovulatory follicles (>21mm) was investigated with ultrasonography and naked eyes. Ultrasonography group had 0.83 preovulatory follicles per ovary and naked-eye group had 0.75 preovulatory follicle per ovary and their average size was 2.86 cm and 2.34 cm, respectively. The average number of follicle was 4.25 with ultrasonography and 4.38 with naked eyes. There was no significant difference considering the size of follicle and number of follicle between ultrasonography and actual size except for the size of preovulatory follicle, suggesting that information of ultrasonography is able to use for OPU or other reproductive technology of mare.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.12
no.4
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pp.105-111
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2004
When the clitellate tiger worms(Eisenia fetida) were fed with paper mill sludge, sewage sludge of agricultural-urban area and sewage sludge of agricultural area, number of cocoons produced by individual clitellate earthworm for 104 days were 11.8, 8.6 and 3.5, respectively. However, clitellate earthworms that had been fed with sewage sludge of agricultural-urban area for 52 days or fed with sewage sludge of agricultural area for 95 days could not produce cocoons, whereas the earthworms that were fed with paper mill sludge kept producing cocoons through the investigating period. The hatchability of cocoons produced by the clitellate tiger worms(Eisenia fetida) fed with sewage sludge of agricultural-urban region, sewage sludge of agricultural region and paper mill sludge were 42.8%, 38.3% and 39.2%, respectively. And hatching periods of cocoons were 33.8~36.0 days, which were not affected by the kinds of sludges. However, the cocoons produced by clitellate earthworms which had been fed with sewage sludge for about 1.5 months could not hatch at all. Death rates of second generation hatched from cocoons produced by tiger worms(Eisenia fetida) which had been fed with the sewage sludge from agricultural-urban region and the sewage sludge from agricultural region reached to 100% and 90% at 60 days after hatching, respectively, whereas death rate of second generation fed with paper mill sludge reached to 16%.
Proceedings of the Korean Journal of Food and Nutrition Conference
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2000.05a
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pp.5-7
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2000
국내에서의 식이섬유의 이용은 대부분 저분자량의 수용성 식이섬유를 이용한 음료형태가 주류를 이루고 있으며, 밀기울, 귀리, 옥수수 껍질 등으로 부터 얻는 불용성 식이섬유는 제과 및 제빵등에 이용되어 오고 있다. 수용성 식이섬유는 혈중 콜레스테롤을 저하시키며, 불용성 식이섬유는 변비예방과 장기능 증진효과가 탁월한 것으로 알려져 있다. 그러므로, 대장암과 변비같은 장질환 환자가 날로 증가하고 있는 상황에서 국내산 미이용 자원으로부터 불용성 식이섬유의 기능성 향상과 활용기술을 개발하는 것은 식품산업적 가치가 크다고 할 수 있다. 또한, 국내에서 소비되고 있는 폴리덱스트로스와 올리고당과 같은 기능성 당류의 대부분이 외국에서 수입하여 국내에 보급되고 있기 때문에 큰 외화지출이 되고 있다. 따라서 본고에서는 국내산 미곡 부산물인 밀기울 식이섬유 세포벽의 불용성 구조를 수용성으로 변화시킬 수 있는 변형기술과 얻어진 수용성 식이섬유 소재의 특성을 소개하고자 한다. 즉, 밀기울 세포벽의 수용화를 위한 가공처리는 압출성형 공정에 의하여 실시하였으며, 수용화가 수반되는 압출성형 조건에 따른 식이섬유 소재의 이화학적 특성과 수용화가 일어난 세포벽 성분의 분해기작에 대한 연구결과를 정리하였다. 그리고, 현행 올리고당과 식이섬유의 산업적 생산공정에서 문제점으로 대두되고 있는 효소처리, 산성하에서의 감압가열, 고점도 원료물질의 이송, 생물공학적 공정제어, 반응시간, 잔여 효소의 불활성화 및 재활용, 제조원가 상승 등과 같은 것을 해결하거나 개선할 수 있는 효율적인 압출반응공정의 조건과 생산된 소재 glucooligosaccharide, fructooligosaccharide, galactooligosaccharide 등의 특성에 대하여 논하여 보기로 한다.경우가 많지 않다. 또한 그 발생 경위나 원인요소에 대해서는 일반에게 공개되지 않고 있어, 우리가 실천하여 식중독을 예방할 수 있는 정보가 함께 제시되지 못하는 형편이다. 따라서 본 고에서는 최근 수년간 외국에서 학교급식을 비롯한 집단급식 등에서 발생한 식중독 사례를 중심으로 고찰, 분석하였다. 이로부터 식중독 발생에 기여한 주요 원인을 찾아내고 여기서 얻어지는 교훈을 토대로 식중독 발생을 예방 및 최소화할 수 있는 실천적 대처 방안을 모색해 보고자 한다.중의 E. coli O157:H7이 연관되어있다는 보고도 있다. 목장 방문시 원유를 마신 어린이에서 HUS가 유발하였고, 균분리 결과, 농장의 소와 어린이에서 유사한 E. coli O157:H7이 분리된 바 있다. 본 연자들은 베로톡신 유형, plasmid profiles, RFLP 분석, phage type을 기초로하여 소에서 분리된 E. coli O157:H7이 사람유래주와 매우 유사함을 확인하였다.mm 및 2-6mm 난포에서의 101개(67.8%) 및 47개(50.0%) 보다 매우 낮게 나타났다. 전체 회수 난포란수도 4등급이 59.1%(149/252)로써 1, 2, 3등급의 0.4% (1/252), 7.6%(19/252) 및 32.9%(83/252)보다 높게 나타났다. 1회 평균 회수 난포란은 $\leq$2mm 난포에서 4.8$\pm$3.7개로써 2-6mm(3.0$\pm$3.4개) 및 $\geq$6mm (0.3$\pm$0.6개)보다 높았으며, 1회당 평균 8.1$\pm$5.1개의 난포란을 회수하였다. investigation can be separated into sa
Kim, Jin-Kyu;Lee, Chang-Joo;Lee, Young-Keun;Song, Kang-Won;Yoon, Yong-Dal
Journal of Radiation Protection and Research
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v.24
no.1
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pp.17-22
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1999
This study was carried out to evaluate the biochemical and morphological effects of ionizing radiation on mouse ovarian follicles. Immature mice (ICR, 3 week-old) were irradiated with a dose of $LD_{80(30)}$ at KAERI. The ovaries were collected after 6 hours, 12 hours, 1 day, and 2 days post irradiation. With the morphological basis of the histological staining with hematoxylin-eosin, immunohistochemical preparation using in situ 3'-end labeling was evaluated. Flowcytometric evaluation of DNA extracted from the whole ovary was performed. The percentage of $A_0$ (subpopulation of cells with degraded DNA and with lower DNA fluorescence than $G_0/G_1$ cells), apoptotic, cells in the cell cycle was significantly higher in the irradiated group than in the control group. The number of in situ 3'-end labeled follicles increased at 6 hours post irradiation. All the analyses represented that the ionizing radiation-induced follicular atresia was taken place via an apoptotic degeneration. Such a degeneration underwent very fast and acutely. Therefore, it is concluded that the radiation-induced follicular degeneration is, like the spontaneous atresia, mediated by an acute apoptosis of follicular granulosa cells. Flowcytometric evaluation of cell cycles can make the role for quantifying the atretic follicles and understanding the mechanism of the radiation-induced cell death.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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