항생제 생산을 위한 생물공정은 크게 3단계로 나뉠 수 있다. 우주균주 선발, 현장균주 보존및 현장 종균 공급을 위한 일련의 종균배양 과정을 Upstream이라 할 수 있고, 종모실로 부터 공급받은 종균을 현장에서 증식시키는 현장 종균배양 공정과 본 발효조에서의 항생제 생합성공정을 Mid-Stream, 발효가 끝난 상태의 배양액으로부터 균체, 세포내 및 세포외 불필요한 물질을 제거하고 항생제만을 회수, 정제하는 Down Stream으로 나뉠 수 있다. 따라서 항생제 발효는 좁은 의미에서는 본 발효조에서의 항생제 생합성공정을 가르키지만 넓은 의미에서는 위 전체 공정을 가르키는 말이기도 하다. 따라서 본 소고에서는 항생제 생산을 위한 생물 공정상의 문제점을 3분야로 나누어 제시하고자 한다. 실제로 항생제 공장을 건립하여 항생제 발효를 실시해 왔으며 그것을 좀더 나은 수준으로 개선하고자 꾸준히 노력해 온 당사에서의 경우를 그 예로 보아 문제점을 제시하고자 한다.
Effect of some nutrients on the growth of 3 yeast strains in the pulp mill waste liquor was determined during an attempt to lower the BOD content of the waste liquor and to produce the fodder yeast. The strains applied were Debaryomyces castelli Capriotti, D.phoffi Capriotti, and Cryptococcus luteolus (Saito)Skinner. The necessity of the addition of 0.2% ${NH_4}2SO_4$ 0.5% yeast extract, 0.2% $NH_2SO_4$, and 0.1% $MgSO_4$.$7H_2$O for the best growth of all three strains in the waste liquor was ascertained as a result. After 3-day treatment of the yeast cells on the waste liquor, the BOD content was lowered by about 60-70%. Harvested yeast cells contained ca. 75% water with 1.5-3% lipid, 40-46% protein, 50% carbohydrate and 3-5% ash on the dry weight basis, indicating the possibility of being utilized as the fodder yeast.
전국 각지에서 수집된 발표식품으로부터 젖산균을 분리하고 유해균인 B. cereus, L. monocytogenes, S. Typhimurium, S. aureus 및 S. epidermidis 균주에 대하여 생육 억제효능이 강한 L2167 균주를 선발하고, 16S rDNA 분석법을 이용하여 L. plantarum로 동정하였다. L2167 균주의 단백질 분획물을 제작하여 S. aureus 등 5종의 유해균 배양액에 첨가한 후, 전자현미경으로 관찰하였다. L. plantarum L2167 균주의 균체 단백질 분획물은 유해균의 생육을 억제하였으며, 생육 억제활성은 균체 내부에 함유된 단백질이 유해균의 세포막을 파괴하는 것에서 기인하는 것으로 추정되었다. L. plantarum L2167은 pH 5.5로 조절한 MRS 배지에서 35℃로 배양하였을 때, 가장 우수한 비성장속도를 나타냈으며, 대조구로 사용된 L. plantarum KCTC21004보다 NaCl에 대하여 민감한 특징을 나타내었다. 본 연구를 통하여 선발한 L. plantarum L2167 균주는 추가연구를 통하여 유해균의 생육을 효율적으로 억제할 수 있는 스타터 균주로서 개발될 수 있을 것으로 기대된다.
고점성을 갖는 미생물 생물 고분자에 대한 발효공정 분석 및 조절 연구의 일환으로 알카리 내성 Ba cillus sp.를 사용한 생물고분자의 발효 중 배양액의 유변학적 성질에 대한 경시변화를 조사하였으며, 균 체생육 및 생물 고분자의 생산과 유변학 특성 변화와의 상관관계를 검토하였다. 배양액의 유변학은 배양시간 경과에 따라 현저하 게 변화하여 더욱 점성이 있고, 또 의가소성이 증대 하면서 비뉴우톤 유체로서 거동하였다. 발효 중 유 통지수, 점조도지수, 항복융력 빛 겉보기 점도 등 유 변학 특성값은 균체증식에는 거의 영향을 받지 않고, biopolymer의 합성과 밀접한 상관성을 보였다. 또 유변학적 특성값의 변화는 생물고분자 농도만의 함수가 아니고 발효진행과 상관성을 보였고, 생물고 분자의 생성이나 기질 소비의 완료 직전에 최대값을 나타내었다. 따라서 이들 변화의 특성화는 발효경과 또는 완료에 대한 양호한 지표를 공급할 수 있음을 시사하였다.
국내에서 재배되고 있는 번데기동충하초의 배양조건과 영양원이 균사체의 생육과 단백다당류 생성에 미치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 탄소원에 따른 단백다당류의 생성량은 균체와 배양액에서 glucose, sucrose, 전분의 순으로 30mg/100$m\ell$ 이상의 생성량을 보였다. 또한 탄소원에 따른 단백다당류를 구성하는 단당류의 조성은 크게 달라졌다. 탄소원과 질소원에 따른 단백다당류의 생성은 glucose와 peptone에서 가장 높았으며 탄소원과 질소원의 비율(C/N비)은 glucose 3%에 peptone 0.5%의 함량이 균체의 증식이나 단백다당류 생성에 가장 좋았다. 단백다당류의 생성량은 균사체 내에서는 진탕 배양에 의해 현저하게 증가하였으며 배지의 산도는 pH 4.5에서 최적을 보였으며 최적배양온도는 $25^{\circ}C$이었다. DPPH 법으로 측정한 단백다당류의 항산화능을 측정한 결과, 번데기를 이용한 고체배양보다 액체배양에서 더 높은 전자공여능을 나타내었다.
본 연구에서는 우리 나라에서 분리된 Vibrio harveyi의 미생물학적 특성을 조사하여 V. harveyi 연구의 기초적인 정보를 제공하고자 하였다. V. harveyi는 염분 농도 3%, 배양 온도 30℃에서 가장 잘 증식하였다. Swarming 운동은 1.5% NaCl 첨가 TSA에서 가장 활발하였으며, swarming 운동시 균체는 길어지며, 짧고 곧은 다수의 lateral flagella가 생성된 것을 확인하였다. 우리나라에서 분리된 V. harveyi는 luminometer로 직접 검출하는 방법과 luciferase gene을 검출하는 방법 모두에서 음성으로 나타나, 발광능이 없는 것으로 조사되었다. V. harveyi의 균체 단백질은 50 kDa 부근의 major protein을 가지며, 균주에 따라 40 kDa 근처의 상이한 band pattern을 보였다.
1. 약 70여종의 보존 및 토양분리균에서 cysteine 분해능이 큰 새로운 균주를 분리검색 하였던 바 cysteine 분해능이 가장 높았던 토양분리균주인 No. I-3-2를 공시균주로 선정하여 이균주에 대한 균학적 제성질을 검토한 결과 No, I-3-2 균주는 Aerobacter aerogenes로 동정되었다. 2. No I-3-2 균주는 L-cysteine을 cysteinedesulfhydrase 생산의 가장 효과적인 유도제로 필요로 하였으며 또한 본균의 효소생산을 위한 몇가지 배양조건을 검토한 결과 배양배지의 initial PH가 7.0~7.5일때, 탄소원으로 glycerol을 0.1%, 무기염으로 CaCl$_2$를 0.2% 농도로 기초배지에 첨가 하였을때 가장 양호한 효소생산효과를 나타내었고 배양시간은 배양 8시간전후에서 균체증식 및 효소생산의 최대치를 나타내었다.
농산 폐자원 중에서도 감귤 가공공정에 따라 부생되는 감귤과피를 발효 기질로서의 이용을 목적으로 분리균 Asp. niger를 사용하여 구연산 발효에 미치는 배양조건 및 영향인자를 조사하였다. 그 결과 고 체 배양에서의 최적조건 즉 감귤과피와 물을 동량 혼합하고 여기에 NH$_4$NO$_3$0.2%, MgSO$_4$7$H_2O$ 0.1%, Methanol 2.5%를 첨가하여 PH4.5로 조절한 다음포자 현탁액(1x$10^8$ spore/$m\ell$) 2%를 접종하여 균체증식 초기에 35$^{\circ}C$, 20시간 배양하고 4시간 저온 처리한 다음 구연산 생성기에서 3$0^{\circ}C$로 48시간 배양했을 때 당에 대해 80.4%의 높은 수율의 구연산을 얻었다.
Candida rugosa IFO0750의 UV-변이주를 제조하여 butyric acid를 D-$\beta$-hydroxybutyrin acid(이하 D-$\beta$-HBA)로 전환하는 데 이용하였다. 후보 변이주 중 활성이 가장 높은 Candida rugosa CM42를 이용하여 발효를 수행한 후 NMR 분석, polarimeter 분석 등을 통하여 생성된 물질이 D-$\beta$-HBA 임을 확인하였다. Chemostar 배양을 이용하여 D-$\beta$-HBA 발효 생산의 주요 영향인자를 분석하였으며, 균체의 활성을 나타내는 비생산성의 최대치는 균체의 비증식 속도를 0.06, 발효조 내의 glucose와 butyric acid의 농도를 각각 10g/L와 8.7 g/L로 각각 유지 할 때 얻어졌다. 회분식 배양 중에 glucose와 butyric acid를 공급하여 발효조 내의 glucose 및 butyric acid 농도를 최적조건으로 유지하는 fed-batch 발효를 수행하였다. 배양 180 시간 후에 D-$\beta$-HBA 농도가 약 12.4 g/L에 도달하였으며 회분식 발효에 비하여 4.7배 증가하였다.
148종의 시료로부터 301주의 섬유소 분해세균을 분리하였고 그 중 cellulase 활성이 가장 높은 균주를 선발하여 동정한 결과, Cellulomonas sp. KL-6로 확인하였다. KL-6 균주는 약 50시간만에 여과지(whatman No.1)를 붕괴하였고 congo red 반응으로 본 halo 환의 직경은 11 cm였으며 또한, CMCase의 활성은 67 unit/ml, FPase는 70 unit/ml, ${\beta}-glucosidase$는 0.68 unit/ml로 나타났다. 여과지를 기질로 하여 배양하였을 때 배양액 중에 유리된 glucose의 유무를 확인하였으나 추적할 만한 양이 없었다. KL-6 균주의 균체증식 최적 배양조건은 sucrose 0.5%, yeast extract 0.1%, $(NH_4)_2HPO_4\;0.1%$, $K_2HPO_4\;0.1%$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.01%$, $CaCl_2\; 0.01%$, NaCl 0.6%, $CaCO_3\;0.1%$, pH 7.0 및 온도 $30^{\circ}C$였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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