Kim, Yeong-Hwa;Lee, Yong-Il;Kim, Ik-Hwan;Kim, Dong-Il
한국생물공학회:학술대회논문집
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2002.04a
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pp.301-304
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2002
Perfusion culture strategies for high density culture of plant cell suspensions to enhance the productivity of extracellular polysaccharides were investigated. Angelica gigas Nakai cell suspensions were used to produce the extracellular polysaccharide and perfusion parameters were optimized to maximize the production. When the medium exchange was started at the fifth day after inoculation, the maximum cell concentration (23.8 g dry cell weight per liter) was achieved.
Pichia pastoris, a methylotrophic yeast widely used for the production of heterologous proteins, was used to produce Hepatitis B surface antigen (HBsAg) under the control of the strong, tightly-regulated alcohol oxidase promoter. It is highly induced during the growth on methanol, but the presence of non-methanol carbon sources such as glycerol and glucose repressed fully the expression of alcohol oxidase. In this study, glycerol and sorbitol feedings for the expression of the recombinant HBsAg were compared to examine the potential of sorbitol as a less repressive carbon source in fed-batch fermentation. The sorbitol feeding enhanced the production yield by 12% compared to that in glycerol feeding, although the cell concentration was lower.
The purpose of this study was to determine optimum condition for the cultivation of Chlorella sp. FC-21, which is a freshwater microalgae, using light emitting diodes (LEDs). Specific growth rate and cell concentration were measured for the reactors at the illumination of different wavelengths of LEDs. Among various types of LEDs, red LEDs were the most effective light source, and also greatest increases of specific growth rate and cell concentrations were obtained when light intensity of red LEDs increased. From this study, we found that red LEDs were the most appropriate light source for the cultivation of Chlorella sp. FC-21.
Hair follicles develop as a result of epithelial-mesenchymal interactions between epidermal keratinocytes and dermal cells. Moreover hair follicles constitute multiple cells that influence hair follicle development and cyclic activity. We isolated some cells using explantation and enzymatic digestion method from human scalp hair follicles. So we could culture some follicular cells, such as outer root sheath (ORS) cells, dermal papilla (DP) cells, dermal sheath (DS) cells, matrix cells and melanocyte.
최근 의약적으로 유용한 단백질을 대량 생산키 위한 실현 가능한 방법이 유전자변환 가축의 이용과 관련되어 발전되어 왔다. 이러한 유전자 변환동물은 이종의 단백질을 유즙속으로 분비시키는 생체반응기로서 이용되고 있다. 이러한 전략적 목적을 위해 현재 유전자 변환동물의 생산을 위한 이용에 있어 여러 가지 방법들이 보고되고 있다. 그러나 ES 세포의 사용이 이러한 방법들 사이에서 가장 실질적인 것으로 추정되고 있다. 본 실험에서는 유전자 구축을 위해 사람 황체 호르몬(human luteinizing hormone; hLH)의 전사를 유도하기 위해 각각 2.2 및 0.5 kb의 토끼 $\beta$-casein pronoter 단편을 이용하여 생쥐의 유선에 hLH를 발현시키도록 조절하고 발현이 thynidine kinase(TK) pronoter에 의해 좌우되는 neo 유전자를 selectable marker로서 plasnid속에 삽입하였다. 그 결과 생긴 구축 유전자는 각각 pCas 2.2와 pCas 0.5로 명명하였다. 구축된 유전자로 2$\times$107의 TT-2 ES세포를 170V, 550$\mu$F로 100$\mu$g의 선상 plasmid에 의해 electroporation 시켰다. 감염된 colony들은 250$\mu$g/$m\ell$ G418을 함유하는 ESM 배양액에서 선별 7일 이후에 회수하여 성공적으로 감염된 ES세포는 PCR 및 Southern blot에 의해 확인되었고 그들 중 나머지는 trypsin 처리 후 각각 미세조작과 공배양 기술을 사용하여 ICR 생쥐의 8세포기 수정란 속에 도입하였다. 결국 24시간 동안 37$^{\circ}C$, 5% $CO_2$에서 배양된 배반포를 chimera의 생산을 위해 위임신 유기된 G418 선발처리 이후 400 및 275개의 ES 세포 colony가 생존하였으며, 3개의 ES 세포으 colony 의 genome 속에 임의적으로 plamid가 삽입된 것을 Southern blot에 의해 확인되었다. 총 13 chimera 생쥐가 3 colony로부터 생산되었으나 germ-line chimera는 현재 조사중이다. chimera 생산빈도는 공배양 기술보다 주입방법에서 현저히 높았다.
The effect of low dose ${\gamma}$-radiation on the callus growth of Lithospermum erythrorhizon S. cultured on different medium and lighting condition was investigated. The 8 Gy irradiation stimulated callus growth on LS medium supplemented with BA 2 mg/L and NAA 2 mg/L, however, the growth of callus was more effective on LS medium supplemented with BA 1 mg/L and NAA 1 mg/L under 16 hrs day light. And on the LS medium containing IAA 0.2 mg/L, 16 Gy irradiation increased the callus growth by supplement with kinetin 2 mg/1 and the effect of kinetin was higher than BA at same concentration. The growth of callus was more vigorous on LS medium than MS medium in general. On M-9 medium, the growth of callus was poor regardless lighting conditions, however, by ${\gamma}$-ray irradiation of 16 Gy or 30 Gy, callus growth rates were increased by 30% or more than 30%, especially, under 16 hrs day light condition.
The experiment was carried out to investigate the influence of light condition and polarity of explant on adventitious shoot formation from cotyledon of apple in vitro The treatment of light culture after 10days dark treatment showed effective result than other treatments on the rate of adventitious shoot formation on light intensity treatments and also the treatment of blue light treatment after 4days dark treatment showed more effective result than other treatments in light quality treatments. The polarity of explant influence on adventitious shoot formation. Adventitious multiple shoot formation occured at the proximal end of an excised cotyledon. In other words. shoot organogenesis occured at the proximal cut surfaces of both proximal and distal explants rather than at the distal cut surface of proximal explants.
Addition of carbon and nitrogen source to an alcohol distillery wastewater was tried to increase the cell concentration of a b baker's yeast cultivated in that wastewater. Carbon was found to be primary limiting nutrient and nitrogen secondary limiting o one. Glucose addition increased the cell concentration 1.3 times higher than no addition, and both glucose and $(NH_4)_2S0_4$ a addition did 5.8 times. A fed-batch cultivation by the automatic addition of glucose and ammonium was executed. Added g glu$\infty$se was automatically controlled to low concentration by a method using DO as control parameter. Ammonium was a automatically added as NH40H used as pH $\infty$ntrol agent after initiating glucose addition. By this simple cultivation method t the cell concentration $\infty$내d be efficiently increased from 2.6g/L to 12.0g/L, and maximum specific growth rate and biomass y yield to glu$\infty$se were $0.18hr^{-1}$ and about 0.54g/g respectively. By increasing cell concentration, COD of the wastewater m media could be additionally reduced by about 22%.
BACK, Kyoungwhan;SHIN, Dong Hyun;KIM, Kil Ung;De HAAS, Cynthia R.;CHAPPELL, Joseph;CURTIS Wayne R.
Korean Journal of Plant Tissue Culture
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v.24
no.5
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pp.273-277
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1997
The sesquiterpene cyclase (SC) was induced and its products were accumulated in the culture media of Hyoscyamus muticus hairy roots by addition of Rhizoctonia solani extracts. The cumulative production of solavetivone was nearly doubled by integrated extraction of the products from the media during the 24 h accumulation period. Western blots with monoclonal antibodies against SC show that the enzyme levels are the same for both extracted and non-extracted cultures. SC activities measured in vitro with radioactive substrate are not significantly different. These results suggest that productivity is controlled by substrate availability within the terpenoid pathway, and feedback regulation precedes the branch-point enzyme sesquiterpene cyclase.
BACK, Kyoungwhan;SHIN, Dong Hyun;KIM, Kil Ung;De HAAS Cynthia R.;CHAPPELL Joseph;CURTIS Wayne R.
Korean Journal of Plant Tissue Culture
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v.24
no.5
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pp.279-284
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1997
The extracellular sesquiterpenoids were accumulated in cell and hairy root cultures of Hyoscyamus muticus by elicitation using extracts of Rhizoctonia solani. The vetispiradiene synthase (VS) which is the first committed step in biosynthetic pathway leading to formation of solavetivone, lubimin, and rishitin from isoprenoid intermediate farnesyl pyrophosphate was induced upon elicitation, whereas no sesquiterpenoids and VS activity were detected in both control cell and hairy root cultures. VS activity increased rapidly and reached its maximum 12 h in both cell and hairy root cultures upon elicitor treatment. VS activities were paralleled with the absolute levels of VS polypeptide(s). Interestingly, the profiles of sesquiterpenoid accumulation in hairy root cultures were different from those in cell cultures. The hairy root culture seemed to fail to metabolize solavetivone further to lubimin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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