Kinetic Analysis of Cathepsin B Inhibitor Using a Spectrophotometric Assay. Han, Kil-Hwan and SangDal Kim*. Department of Applied MicrobioJ0f5Yt Yeungnam UniversitYt Kyongsan 77 2-749, Korea - The KHS 10, C4Hl10~6 formula produced from Streptomyces luteogriseus KT-] 0 effectively inhibited a lysosomal cysteine proteinase, cathepsin B. It inhibited the enzyme activity of cathepsin B competitively when the N a-CBZ-Llysine p-nitrophenyl ester HC] (CLN) was used as a substrate. The inhibition const:mt (Ki) of KHS 1 0 for cathepsin B detennined by spectrophotometeric assay was 430 nM. The effective inhibition of cathepsin B was observed at $25^{\circ}C$ :md pH 6.0. The cathepsin B inhibitor, KHSlO needed a preincubation of cathepsin B with the inhibitor for over 5 min. The KHS 10 preserved over 80% inhibition activity even after heat-treatment at $100^{\circ}C$ for ] hr.
This study was carried out to investigate the structural characteristics of kraft lignin and the wood degrading characteristics, the productivity of ligninolytic enzymes and the enzymatic degradation of kraft lignin by white-rot fungi. To purify kraft lignin, precipitation of kraft pulping black liquors of pitch pine meal was done by titration with lN $H_{2}SO_{4}$ reaching to pH 2, and isolation of the precipitates done by centrifugation. The isolated precipitates from pitch pine were redissloved in lN NaOH, reprecipitated by titration with lN $H_{2}SO_{4}$, washed with deionized water, and kept ofr analysis after freeze drying. Fractionation of the precipitates in solution by successive extraction with $CH_{2}Cl_{2}$ and MeOH, and the fractionates were named SwKL, SwKL I, SwKL II, and SwKL III for pitch pine kraft lignin. The more molecular weights of kraft lignin increased, the less phenolic hydroxyl groups and the more aliphatic hydroxyl groups. Because as the molecular weights increased, the ratio of etherified guaiayl/syringyl(G/S ratio) and the percentage were increased. The spectra obtained by 13C NMR and FTIR assigned by comparing the chemical shifts of various signals with shifts of signals from autherized ones reported. The optimal growth temperature and pH of white-rot fungi in medium were $28^{\circ}C$ and 4.5-5.0, respectively. Especially, in temperature and pH range, and mycelial growth, the best white-rot fungus selected was Phanerochaete chrysosporium for biodegradation. For the degradation pathways, the ligninolytic fungus jcultivated with stationary culture using medium of 1% kraft lignin as a substrate for 3 weeks at $28^{\circ}C$. The weight loss of pitch pine kraft lignin was 15.8%. The degraded products extracted successively methoanol, 90% dioxane and diethyl ether. The ether solubles were analyzed by HPLC. Kraft lignin degradation was initiated in $\beta$-O-4 bonds of lignin by the laccase from Phanerochaete chrysosporium and the degraded compounds were produced from the cleavage of $C\alpha$-$C\beta$ linkages at the side chains by oxidation process. After $C\alpha$-$C\beta$ cleavage, $C\alpha$-Carbon was oxidized and changed into aldehyde and acidic compounds such as syringic acid, syringic aldehyde and vanilline. And the other compound as quinonemethide, coumarin, was analyzed. The structural characteristics of kraft lignin were composed of guaiacyl group substituted functional OHs, methoxyl, and carbonyl at C-3, -4, and -5 and these groups were combinated with $\alpha$ aryl ether, $\beta$ aryl ether and biphenyl. Kraft lignin degradation pathways by Phanerochaete chrysosporium were initially accomplished cleavage of $C\alpha$-$C\beta$ linkages and $C\alpha$ oxidation at the propyl side chains and finally cleavage of aromatic ring and oxidation of OHs.
This experiment was conducted to investigate the effect of continuous feeding of probiotics on growth performance, nutrient digestibility, blood urea nitrogen(BUN) and immune responses in pigs. Treatments were 1) Control(basal diet), 2) P-O.l(basal diet + 0.1% probiotics) and 3) P-0.2(basal diet + 0.2% probiotics). In growth trial, a total of sixty pigs(6.17 $\pm$ 0.45 kg average body weight) weaned at 21 days of age were used. All pigs were assigned according to sex and body weight, and each treatment had 5 replicates of 4 pigs per pen in a randomized complete block(RCB) design. During 0${\sim}$8 weeks, there was no significant difference in average daily gain(ADG), average daily feed intake(ADFI) and gain:feed ratio(GfF) among treatments. During 9 - 20 weeks, ADG was improved significantly in pigs fed P-O.I or P-0.2 diets when compared to the pig fed control diet(P <0.05), but there was no significant difference in ADFI and GfF ratio. During overall period, ADG, ADFI and GfF ratio were not significantly different among treatments. In the first metabolic trial(17.93 $\pm$1.45kg average body weight), apparent digestibility of OM, protein, fat in pigs fed P-O.l and P-0.2 diets were greater than in pigs fed control diet(P <0.05) and ash digestibility in pigs fed P-0.2 diet was significantly higher than in pigs fed control diet(P <0.05). Calcium digestibility in pigs fed P-0.2 diet was significantly higher than in pigs fed control and P-O.I diets(P <0.05). Fecal-N excretion was lower in pigs fed P-O.! and P-0.2 diets than in pigs fed control(P <0.05). In the second metabolic trial(41.80 $\pm$ 2.68kg average body weight), there was no significant difference among treatments in apparent digestibility of nutrients and N-retention. In blood assay for the BUN and immune responses investigations, there was no significant difference among treatments during overall period of experiment. Therefore, this experiment suggested that probiotics supplementation could improve growth performance and nutrient digestibility of pigs.
The purpose of this study was to investigate the detoxifying effect on PSP-infested sea mussel, Mytilus edulis, by heating treatment and correlation between the PSP toxicity and the environmental conditions of shellfish culture area such as temperature, pH, salinity, density of Protogonyaulax sp. and concentration of inorganic nutrients such as $NH_4-N,\;NO_3-N,\;NO_2-N\;and\;PO_4-P$. This experiment was carried out at $Suj\u{o}ng$ in Masan, Yangdo in Jindong, $Hach\u{o}ng\;in\;K\u{o}jedo\;and\;Gamch\u{o}n$ bay in Pusan from February to June in $1987\~1989$. It was observed that the detection ratio and toxicity of PSP in sea mussel were different by the year even same collected area. The PSP was often detected when the temperature of sea water about $8.0\~14.0^{\circ}C$. Sometimes the PSP fox of sea mussel was closely related to density of Protogonyaulax sp. at $Gamch\u{o}n$ bay in Pusan from March to April in 1989, but no relationship was observed except above duration during the study period. The concentration of inorganic nutrients effects on the growth of Protogonyaulax sp., then effects of $NO_3-N$ was the strongest among them. When the PSP-infested sea mussel homogenate was heated at various temperature, the PSP toxicity was not changed significantly at below $70^{\circ}C$ for 60 min. but it was proper-tionaly decreased as the heating temperature was increased. For example, when the sea mussel homogenate was heated at $100^{\circ}C,\;121^{\circ}C$ for 10 min., the toxicity was decreased about $67\%\;and\;90\%$, respectively. On the other hand, when shellstock sea mussel contained PSP of $150{\mu}g/100g$ was boiled at $100^{\circ}C$ for 30 min. with tap water, the toxicity was not detected by mouse assay, but that of PSP of $5400{\mu}g/100g$ was reduced to $57{\mu}g/100g$ even after boiling for 120 min.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.39
no.9
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pp.1379-1383
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2010
Nectarine beverage treated with cellulase and pectinase enzymes was measured for mineral contents, total flavonoids, and free amino acids and DPPH radical scavenging effect, nitrite scavenging effect. Total flavonoid contents of the no treatment, treated with pectinase, with cellulase, and with both measured 0.146 mg/mL, 0.167 mg/mL, 0.148 mg/mL and 0.171 mg/mL, respectively. DPPH was measured as 13.42% with no treatment and more than 28.98% with enzyme treatments. Nitrite scavenging effect with no treatment was 79% at pH 1.2. Whereas, it was measured above 90% while treated with enzymes at pH 1.2. And also, the nitrite scavenging effect was slightly higher at pH 3.0, pH 4.0 and pH 6.0 than no treatment. Results of free amino acids analysis revealed that, aspartic acid, serine, alanine, $\gamma$-aminobutylic acid, and glutamic acid were present with the amount ranging from 86.71% to 94.14% from total detected free amino acids. Ornithine and taurine were also observed from the beverages. The mineral contents, nitrogen element (T-N) of enzyme treatment of nectarine beverages were measured slightly higher than T-N of no treatment, however, the $P_2O_5$ was similar. Moreover, CaO, MgO and $K_2O$ in the beverages were measured above 45 mg/L, 85 mg/L and 2,133 mg/L, respectively.
According to the results for the thermodynamic stability of feed-stuff dust, there are little change of initiation temperature of heat generation and heating value for used particle size. But initiation temperature of heat generation decreased with high heating rate whereas decomposition heat increased with particle size. Using the supporting gas, O2, initiation temperature of heat generation decreased remarkably than using the inert gas, N2, and heating value increased as twenty times under the same condition. When the ignition energy is given from the outside, used fine particle which can float in the air easily reacted tremendously with oxygen. Average maximum explosion pressure was 6.88 Kgf/$\textrm{cm}^2$ for 80/100 mesh.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.20
no.2
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pp.451-457
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2019
In this study, the characteristics of coffee grounds were reviewed by making them from solid fuel through heat-drying and oil-drying method. The differences in the higher calorific power by each dried sample were compared. And industrial analysis using the thermogravimetric analyzer was considered for applicability to organic waste and oily samples. Before and after drying, the surface of the specimen was observed with SEM equipment and the ingredients were measured through the EDS equipment. As a result, no other hazardous substances, such as heavy metals, were measured. Next, The differences between thermal decomposition and combustion reactions were considered through the TG and DTG curves. As a result, it is that the oil-dried coffee grounds is longer to burn than the heat-dried coffee grounds. Finally, the combustion gases emitted through the thermogravimetric analyzer were collected and the carbon monoxide and carbon dioxide performed qualitative and quantitative analysis using GC over time.
Isolation and Characterization of Cathepsin B inhibitor Produced by Streptomyces luteogriseus KT-IO. Han, Kil~Hwan and Sang~Dal Kim*. Department of Applied Microbiology, Yeungnam Universit}/t Kyongsan 712749, Korea - The cathepsin B inhibitor produced by Streptomyces luteogriseus KT-IO was very stable in heat, acidic and alkaline conditions. The cathepsin B inhibitor was isolated from the extracted fraction of culture broth with butanol, methanol and chloroform subsequently, the inhibitor was purified with following several column chromatography sLlch as DEAE-Sephadex A-25, Sephadex G-15, silica gel 60, Sephadex LH-20, and preparative HPLC. The cathepsin B inhibitor showed positively to detective reaction of ninhydrine, 5% H2S04, iodine, but negatively to the reaction of Ehrlich's reagent, DNS, aniline. The molecular formular of cathepsin B inhibitor was elucidated by JR, lH and 13C-NMR, FAB mass and elemental analyzer. Consequently, it was identified as C4HlI04N6. The cathepsin B inhibitor had the mode of competitive inhibition with the reaction of cathepsin B.
A suite of extracellular enzyme activities involved in organic carbon decomposition were determined in three northern peatlands (a bog, a fen, and a swamp) over a 12 month period along with trace gas ($CO_2$ and $N_2O$) flux and DOC dynamics in the wetlands. The activities varied $0.008-0.066\;{\mu}mole\;g^{-1}\;min^{-1}$, $0.003-0.021\;{\mu}mole\;g^{-1}\;min^{-1}$, $0.003-0.016\;{\mu}mole\;g^{-1}\;min^{-1}$, $0.004-0.047\;{\mu}mole\;g^{-1}\;min^{-1}$, for ${\beta}-glucosidase$, cellobiohydrolase, ${\beta}-xylosidase$, and N-acetylglucosaminidase, respectively. In general, the activities were highest in the forested swamp followed by the fen and the bog. When the data from three wetlands are combined, the enzyme activities exhibited significant positive correlations with trace gas emission and available carbon. Further, the average activity of 4 enzymes explained about 20-40% of the variations of trace gas emssion and available carbon. The results indicate that enzymes related to the mineralization of organic carbon may play an important role in trace gas flux and DOC dynamics in northern peatlands.
The selective catalytic reduction (SCR) of nitrogen oxides (NOx) was investigated in a catalyst (Ag/γ-Al2O3) packed dielectric barrier discharge plasma reactor. The intermittent generation of plasma in the catalyst bed partially oxidized the hydrocarbon reductant for NOx removal to several aldehydes. Compared to using the catalyst alone, higher NOx conversion was observed with the intermittent generation of plasma due to the formation of highly reductive aldehydes. Under the same operating conditions (temperature: 250 ℃; C/N: 8), the NOx reduction efficiencies were 47.5%, 92%, and 96% for n-heptane, propionaldehyde, and butyraldehyde, respectively, demonstrating the high NOx reduction capability of aldehydes. To determine the optimal condition for intermittent plasma generation, the high voltage on/off cycle was adjusted from 0.5 to 3 min. The NOx reduction performance was compared between continuous and intermittent plasma generation on the same energy density basis. The highest NOx reduction efficiency was achieved at 2-min high voltage on/off intervals. The reason that the intermittent plasma discharge exhibited higher NOx reduction efficiency even at the same energy density, compared to the continuous plasma generation case, is that the intermediate products, such as aldehydes generated from hydrocarbon, were more efficiently utilized for the reduction of nitrogen oxides.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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