• 자연과학논문집
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• 제9권1호
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• pp.19-24
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• 1997

PCR 방법을 이용하여 K11 RNA 중합효소를 coding하는 Klebsiella phage gene 1을 cloning 하였고 lac 전사촉진제 조절 하에 발현시켰다. K11 RNA 중합효소는 DAEA-sephacel과 Affigel blue column chromatographies를 사용하는 상용 방법으로 분리하였다. DAEA-sephacel의 0.2-0.3 M $NH_4Cl$ 분획에서 K11 RNA 중합효소의 활성을 보였고, 다음 단계의 Affigel blue column에서 SDS-polyacryl amide gel 상의 단일 band로 분리되었다. K11 RNA 중합효소는 T7 그룹 phage RNA 중합효소로 다른 T7 그룹phage RNA 중합효소와 많은 상동성을 보인다. (대장균 phage T7, T3과 Salmonella tyhimurium phage SP6 RNA 중합효소). 이미 우리는 T7과 SP6 전사촉진제 변이체를 제조한 바 있고 T7과 SP6 RNA 중합효소의 전사촉진제 특이성을 연구한 바 있다 (이상수와 강창원, 1993). K11 RNA 중합효소의 전사촉진제 특이성을 알아보기 위해 SP6 전사촉진제 변이체를 사용하여 in vitro K11 RNA 중합효소의 활성을 측정하였다. 이 변이체 중 K11 전사촉진제와 가장 유사한 것이 가장 높은 K11 RNA 중합효소 활성을 보였다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제43권2호
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• pp.86-93
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• 2000

An experiment was conducted to obtain the quantitative data on the transformation and loss of applied urea-N in waterlogged soil columns. The soil columns were pre-incubated for 35 days to develop oxidized and reduced soil conditions prior to urea application. After urea application at the rate of $150kg\;N\;ha^{-1}$(29.5 mg N), the amounts of nitrogen which were volatilized, leached, and remained in soil column were measured during 38 days of incubation period. On 2 and 4 days of incubation, 54.1%(15.9 mg N) and 98.4%(29.0mg N) of the applied urea was hydrolyzed, respectively. Most of the applied urea was completely hydrolyzed within 6 days. After urea application, the rates of ammonia volatilization were increased with the floodwater pH when the floodwater pH were higher than 7.0. The maximum rate of ammonia volatilization was $0.3mg\;d^{-1}$ when pH of the floodwater showed maximum value of 7.6. The total amount of volatilized nitrogen was 6.1% (1.8mg N) of the applied urea-N. A 63.2 % (18.6mg N) of the applied urea was remained in soil as $NH_4{^+}-N$ and 28.0% (8.2mg N) of the applied urea was leached as $NH_4{^+}-N$ at the end of the incubation. Amount of $NO_3{^-}-N$ in soil was smaller than 2.0 mg throughout the incubation period. The total amount of $NO_3{^-}-N$ leached was very small, which value was 1.8 mg. It suggested that nitrification process was not significant in waterlogged soil column of this study due to high infiltration rate of urea solution applied to the soil column. Therefore only small amount of $NO_3{^-}-N$ was lost by denitrification and leaching process.

• 한국농공학회논문집
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• 제56권1호
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• pp.1-9
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• 2014

Sediment pollutants have been considered an important source for the eutrophication of estuarine reservoir. In this study, the effects of pollutants released from bottom sediment to water column were investigated. Sediment samples were collected each two station from Namyang and Sukmoon estuarine reservoirs in August 2013. The fractionation result of sediment phosphorus indicated that Adsorbed-P ($36.7{\pm}8.84%$) and Nonapatite-P ($29.3{\pm}12.50%$) are the two dominant phosphorus groups in the sediments. For sediment release test, eight sets of acrylic chamber (0.3 m $diameter{\times}1m$ high, with 0.15 m sediment depth) were used with aerobic and anaerobic environment. Under anaerobic conditions, rates of $NH_4-N$ release from the sediments were highly variable, with final concentrations of $NH_4-N$ in the overlying water varying from between about 0.69~1.04 in Namyang and 2.58~4.23 mg/L in Sukmoon reservoir. The $NH_4-N$ release was active at the upstream around the confluence of tributary compared to downstream near the embankment. The $PO_4-P$ release was more obvious than $NH_4-N$ in anaerobic condition. The final $PO_4-P$ concentrations were approximately from two-fold to eight-fold higher than initial concentration. In terms of reservoir water quality management, not only tributary pollutants but also sediment nutrient loading is necessary to consider the water quality contribution.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제7권3호
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• pp.149-155
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• 1979

자연계에서 진균류와 절족동물의 외피를 이루는 주된 다당류인 chitin(N-acetyl glucosamine polymer)의 $\beta$-1, 4-lingkage를 가수분해하는 Strepto-myces sp. 115-5 균주로부터 생성되는 chitinase를 정제하여 그 성질을 조사하였다. 48시간 진탕배양하여 생성된 chitinase를 ammonium sulfate처리, 1차 Sephadex G-100, DEAE-Cellulose, 2차 Sephadex G-100 column chromatography하여 정제하였으며 그 순도를 CM-Sephadex C-50 column chromatography 및 polyacryla-mide gel electrophoresis로서 확인하였다. 이 chitinase는 chitin과 chitosan을 가수분해 할수 있었으나 cellulose는 분해할수 없었고 chitin을 기질로서 사용하였을 경우 Km value가 3.6mg/ml이며 Vmax가 100 $\mu$mole/hr였다. Activation energy는 산 가수분해보다 훨씬 낮은 3.66kca1/mole이었고 분자량은 Sephadex G-100을 사용한 column chromatography에서 56,000 daltons으로 나타났으며, 이 chitinase의 등전점은 pH3.0에서 보여졌다.

• KSBB Journal
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• 제23권1호
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• pp.31-36
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• 2008

The use of L-carbohydrates and their corresponding nucleosides in medicinal application has greatly increased. For example L-ribose has been much in demand as the starting material for curing hepatitis B. High performance liquid chromatography (HPLC) method was studied for the analysis of ribose and arabinose fractions from ion exchange chromatography (IEC). Dowex Monosphere 99 Ca/320 resin was packed in IEC to separate ribose and arabinose under various operating conditions. $NH_{2}$ and sugar HPLC columns were then used to analyze the fractions from the IEC column. Pulse input method (PIM) was also used to measure adsorption isotherms of ribose and arabinose in the Dowex column and HPLC columns. Experimental results and simulations by ASPEN chromatography were compared with fair agreement.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제13권1호
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• pp.28-32
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• 1990

Precipitation and purification of amylase secreted by Streptomyces aureofaciens 77 in liquid inorganic salts-starch medium under the optimum conditions were carried out. Ammonium sulphate fractionation was used to precipitate amylase in cell free culture filtrate. (NH/sub 4/)/sub 2/ SO/sub 4/ at a concentration of 50-70% saturation gave the highest enzyme yield. The obtained precipitates were redissolved in phosphate buffer (pH 7.0) and subjected to dialysis. The dialyzed enzyme preparation was applied to DEAE-cellulose column chromatography which resulted in an increase of purification up to 59.48 fold. A further step of purification was done by applying the obtained purified sample to Sephadex-G200 column chromatography which resulted in ann increase of purification up to 73. 92 fold. The results clearly indicated that the isolated amylase from S. aureofaciens 77 was only on type.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권1호
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• pp.36-40
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• 1993

토양에서 inulin으로부터 di-D-fructofuranose dianhydride(DFA)를 생산하는 inulin fructotransferase를 생산하는 균주로 Enterobacter sp. S45를 선발, 분리하였다. 본 효소에 의하여 생산되는 DFA는 $^13C-nmr$과 HPLC로 분석한 결과 fructose 두 분자가 $\beta$ 1,2': $\alpha$ 2,3' 결합을 한 DFA III로 동정되었다. 본 균주는 탄소원으로 inulin, 유기질소원으로 corn step liquor, 무기질소원으로 $NH_4H_2P0_4$를 사용할 때 효소생산이 가장 많았으며 이 조건하에서 72시간 배양으로 최대 효소생산을 보였다. 균 배양중 배양액내에 DFA III가 생성되었다가 소멸되는 것으로 보아 균체내에 DFAIII를 분해, 이용하는 효소가 존재한다고 추정되었다.

• 한국동물학회지
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• 제29권2호
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• pp.141-158
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• 1986

흰쥐를 실험재료로 그 적혈구에서 glutathione peroxidase를 $(NH_4)_2SO_4$ 침전법, Sephadex filtration column, DEAE-sephadex column chromatogrgphy하여 순화시키고 이것의 성질을 연구하였으며, 간에서 이 효소의 작용부위를 조직화학적 처리를 하여 전자현미경으로 관찰한 결과는 다음과 같다. 1. Glutathione peroxidase는 약 33.5배 순화되었다. 2. Crude glutathione peroxidase의 최적온도는 $40^\\circC$이며, 반응 최적 pH는 7.5였다. 3. 이 효소는 $30^\\circC$에서 가장 안정되었으며 glutathione농도 변화에 대한 Km값은 8.5 mM, 최대 반응속도는 15.6 $\\mu$moles/min이었고, $H_2O_2$ 농도변화에 대한 Km값은 40 $\\mu$M이며, 최대 반응속도는 10.5 $\\mu$moles/min이었다. 4. 이 효소의 분자량은 약 90,000정도로 측정되었다. 5. 쥐의 간에서 이 효소의 활성부위는 microbody에 국한되며 간소염의 주변주에서 그 활성이 크게 나타났다. 6. 조직화학적 방법으로 나타난 반응산물은 직경 $2.0\\sim0.7 \\mum$ 정도의 원형으로 그 경계막은 뚜렷하지 않았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권6호
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• pp.465-471
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• 1997

Bacillus brevis CD162가 생산하는 cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex CL-6B 및 Sephadex G-150 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분리정제하였다. 정제된 CGTase는 분자량이 약 74,000, 등전점은 약 6.3인 단백질이었고, 정제된 단백질을 SDS-PAGE한 후 변성된 단백질을 재활성시켜 zymogram을 수행한 결과 cyclodextrin glycosyltransferase임을 확인할 수 있었다. 이 효소의 최적활성 pH와 온도는 각각 8.0과 $55^{\circ}C$이었으며, pH $5.5{\sim}9.0$과 $50^{\circ}C$까지 안정한 활성을 보였다. 또한, CGTase의 $NH_2$-말단 부위의 아미노산서열은 Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln 이었으며, 전분으로부터 cyclodextrin으로의 전환률을 분석한 결과, ${\alpha}$-cyclodextrin은 1.3%, ${\beta}$-cyclodextrin은 33.9% ${\gamma}$-cyclodextrin은 9.7% 이었다.

• 생명과학회지
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• 제8권5호
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• pp.614-621
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• 1998

열안정성 inulinase를 분비하는 Penicillium sp.를 돼지 감자 서식지의 토양으로부터 분리하여 이 균주의 inulinase를 50%-80% 염석, DEAE-Sephacel column chromatography, Toyopearl HW 65 F column chromatography에 의해 정제하여 inulinase 활성을 가진 단일 band를 얻었다. 이 band의 단백질을 polya-cryamide gel electrophoresis 후 추출하여 inulinase 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 이 단백질의 분자량은 SDS-PAGE에 의해 약 77,000 dalton으로 추정되었고, 최종 정제도는 53.3배이었다. 정제된 효소의 효소학적 성질을 조사한 결과, 최적온도는 약 6$0^{\circ}C$이었고, 열 안정성은 30-5$0^{\circ}C$에서 비교적 안정하였다. pH 4에서 가장 높은 활성을 나타냈으며, pH 4-5에서는 비교적 안정했고 염기성에서는 아주 낮은 활성을 나타내었다. 금속이온과 다른 화학물질의 영향을 조사한 결과 1mM의 $MnCl_2$와 $CaCl_2$에 의해 활성이 증가했으며 특히, $MnCl_2$는 1.7배까지 활성을 증가시켰다. 그러나, 1mM의 $CuCl_2$,$HgCl_2$와 1mM EDTA 시에는 활성이 저해되었다. TLC분석결과 모든 산물이 monosaccharide였으므로 이 효소는 exo-acting inu-linase로 추정되었고, inulin에 대한 이 효소의 $K_M$치는 $2.2\times10^{-3}$이었다. 이 효소의 결정된 N-terminal 아미노산 배열은 $NH_2$-X-Glu-Tyr-Thr-Glu-Lys/Leu-Tyr-Arg-Pro이다.