So, Yee-Seul;Yang, Dong-Hoon;Jung, Kwang-Woo;Huh, Won-Ki;Bahn, Yong-Sun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권2호
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pp.357-364
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2017
In this study, we aimed to generate a series of versatile tagging plasmids that can be used in diverse molecular biological studies of the fungal pathogen Cryptococcus neoformans. We constructed 12 plasmids that can be used to tag a protein of interest with a GFP, mCherry, $4{\times}FLAG$, or $6{\times}HA$, along with nourseothricin-, neomycin-, or hygromycin-resistant selection markers. Using this tagging plasmid set, we explored the adenylyl cyclase complex (ACC), consisting of adenylyl cyclase (Cac1) and its associated protein Aca1, in the cAMP-signaling pathway, which is critical for the pathogenicity of C. neoformans. We found that Cac1-mCherry and Aca1-GFP were mainly colocalized as punctate forms in the cell membrane and non-nuclear cellular organelles. We also demonstrated that Cac1 and Aca1 interacted in vivo by co-immunoprecipitation, using $Cac1-6{\times}HA$ and $Aca1-4{\times}FLAG$ tagging strains. Bimolecular fluorescence complementation further confirmed the in vivo interaction of Cac1 and Aca1 in live cells. Finally, protein pull-down experiments using $aca1{\Delta}$::ACA1-GFP and $aca1{\Delta}$::ACA1-GFP $cac1{\Delta}$ strains and comparative mass spectrometry analysis identified Cac1 and a number of other novel ACC-interacting proteins. Thus, this versatile tagging plasmid system will facilitate diverse mechanistic studies in C. neoformans and further our understanding of its biology.
조강 생산 시 발생되는 슬래그는 대부분 서냉 방식에 의해 처리되고 있다. 하지만 슬래그 중 일부는 속경성 광물을 포함하고 있음에도 불구하고, 서냉 방식에 의해 그 반응성을 상실하게 된다. 이에 본 연구에서는 제강환원슬래그를 SAT공법에 의하여 공기 급냉하여 선별 및 분급 후 분쇄한 CAC의 활용성 확대를 목적으로 석고 종류 및 혼입율에 따른 CAC의 특성에 관하여 고찰하였다. 그 결과, CAC는 3시간에서는 석고 용해도, 1일 이후에는 석고 함량비에 따라 특성이 나타나는 것을 확인하였다. 반수, 무수석고의 적정 혼입율은 30% 이내, 이수석고는 35% 이상인 것을 확인하였으며, 이수석고의 혼입율 및 특성 확인을 통하여 부산이수석고의 적용 가능성을 확인하였다.
본 연구는 자기가수분해전 처리를 통하여 제조한 반응성이 높은 셀룰로오스(high reactive cellulose, HRC)기질의 카르복시메틸화(carboxymethylation, CM화) 특성을 알기 위하여 수행되었으며, 비교를 위하여 시판 알파셀룰로오스(commercial α-cellulose, CAC) 및 침엽수 리파이나기계펄프(Refiner mechanical pulp, RMP) 2종의 시료를 사용하였다. HRC는 12시간 당화처리로 70%, 24시간 처리로 90%, 72시간 처리로 99.5%의 높은 당화율을 나타냈다. 아울러 Cellulase 효소활성에 있어서 처리 전후에 측정된 CMCase 및 Avicelase의 효소활성의 큰 변화가 없었다. 이에 대하여 72시간 처리로 CAC는 57%의 당화율을, 리그닌을 많이 포함하는 RMP는 38%의 매우 낮은 당화율을 보였다. CM화시 리그닌함량이 낮은 HRC 및 CAC시료의 CM화가 용이하였고, 1.13-1.15의 높은 치환도를, 리그닌함량이 많은 RMP는 0.85 정도의 낮은 치환도를 나타냈다. 모든 시료에서 알칼리의 농도는 30%, 3시간 처리가 가장 높은 치환도를 보여주었다. CM화물로부터의 수용성부분은 HRC 및 CAC에서 98-98.5%, RMP 로부터는 31.5%로 매우 낮았다. 비표면적이 낮은 RMP는 보수도가 매우 낮았으며, 비표면적이 높았던 CAC 및 HRC는 435% 및 321%의 매우 높은 보수도 값을 나타냈다. 팽윤도에 있어서는 비표면적과는 무관하게 HRC, RMP 그리고 CAC 순으로 팽윤율이 커졌다.
This study was conducted to suggest the Cudrania tricuspidata leaf and Achyranthes japonica Nakai Complex (CAC) possibility of use as a functional natural material for improving bone disease. Cudrania tricuspidata leaf and Achyranthes japonica Nakai were mixed in the same amount, extracted with hot water, and then powdered and used in the study. After, the cytotoxicity of CAC for osteoblasts (MG63 cell), osteoclasts (differentiated RAW264.7 cell), and macrophages (RAW264.7 cell) were evaluated by MTT assay, and ALP assay and TRAP assay were performed to confirm the differentiation capacity of osteoblasts and osteoclasts, respectively. In addition, the anti-inflammatory effect in macrophages was evaluated by ELISA, qRT-PCR, and western blot assay. CAC did not proliferated osteoblasts and osteoclasts, but increased ALP activity against osteoblasts differentiation and decreased TRAP activity against osteoclasts differentiation. CAC did not proliferated macrophages but decreased nitric oxide production. Also, decreased NOS2, IL1B, IL6, PTGS2, and TNFA gene expression, and JNK and p38 protein phosphorylation in a concentration-dependent manner, but ERK protein phosphorylation was not changed. As a result, CAC increased the differentiation and activation of osteoblasts, inhibited the differentiation and activation of osteoclasts, and regulated the expression of inflammatory cytokines in macrophages. Therefore, it is thought that CAC can be used as a functional natural material that prevents bone disease and has an anti-inflammatory effect.
Adsorption characteristics of three endocrine disruptors, amitrol, nonylphenol, and bisphenol-A, were evaluated depending on the type and service duration of activated carbon (AC). Bituminous coal-, wood-, and coconut-based coals were tested. Bituminous coal-based AC (BCAC) had the greatest sorption capacity for the three chemicals tested, followed by wood-based AC (WAC) for nonylphenol and coconut palm-based AC (CAC) for bisphenol-A. During the column test, amitrol removal efficiency increased over time, indicating that hydrophilic endocrine disruptors are biodegraded in the AC column. Removal efficiencies of hydrophobic compounds such as nonylphenol and bisphenol-A decreased over time since the main removal mechanism was adsorption. The order of the amitrol removal was: BCAC-5.9 yr, CAC-3.l yr > BCAC-2.2 yr > BCAC-virgin > CAC-virgin > WAC-virgin > WAC-3.l yr. In general, used AC had greater removals than virgin AC. The order of the bisphenol-A removal was: CAC-virgin > BCAC-2.2 yr > CAC-3.l yr > WAC-virgin > BCAC-5.9 yr > WAC-3.l yr. The order of the nonylphenol removal was: BCAC-virgin > WAC-virgin > CAC-3.1 yr, WAC-3.1yr> BCAC-2.2 yr > BCAC-5.9 yr > CAC-3.1 yr. Bituminous coal AC performed the best over time. Endocrine disruptors such as these three compounds appear to be removed effectively by activated carbon through biodegradation and adsorption. Wood and coal based among the virgin ACs and 3.1 years used wood base among the used ACs appeared the lowest carbon usage rate(CUR) for nonylphenol removal by prediction model. Virgin and used coconut base ACs except BCAC had the lowest CUR for removal Bisphenol-A. Biodegradation of nonylphenol and Bisphenol-A did not occurred during the 9,800 bed volume experiment period. BCAC had the highest biodegradation capacity of 46% for amitrol among virgin ACs and the used coal based ACs had 33-44% higher biodegradation capacity than virgin's for amitrol so biodegradation is the effective removal technology for hydrophilic material such as amitrol.
Adsorption process using granular activated carbon(GAC) has been considered as one of the most effective water treatment technologies to remove humic acid which is recon- niEed as trihalomethane(THM) precursor in chlorination. To design the most effective GAC process, it is necessary to conduct the test of adsor- ption performance by means of isothem, batch rate and column studies and to select the most effective activated carbon according to raw materials of GAC - lignite and coconut shell. The objective of this study is to investigate the adsorption performance of humid acid on two activated carbons - lignite activated carbon(LAC) and coconut shell activated car- bon(CAC) made in Korea. It is available to represent UV-abs and trihalomethane formation potential(THMFP) as concentration of humic acid due to good relationship. The adsorption capacity of humid acid is not concerned with surface area of activated carbon but with pore size related to about $100{\AA}$, and then LAC forming at the extent of mesopore is found to be eight times more effective in adsorption capacity than CAC forming at micropore. The adsorption capacity of LAC and CAC is better at pH 5.5 than at pH 7. Pore and surface diffusion coefficients calculated from the diffusion model are $7.61\times10^{-13}m^2/sec$, $3.52\times10^{-15}m^2/sec$ for CAC, and $3.38\times10^{-12}m^2$/sec and $Ds=1.48{\times}10^{-15}m^2/sec$ for GAC respectively. From the results of column test it shows that the performance of LAC is also better than CAC and the optimal EBCT(Empty Bed Contact Time) is 4.52min. and activated carbon removes selectively the components of humic acid to be easily formed to THM.
In this study, the effect of complex hot water extracts of Cirsium jaonicum, Artemisia annua and Curcuma longa (CAC) on the improvement of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) was investigated. CAC inhibited fatty acid synthesis and lipid accumulation in HepG2 cells cultured with free fatty acid (FFA). In the NAFLD animal model, CAC extract suppressed the increase in body weight, liver, and epididymis fat weight, and suppressed the increase in hepatocyte fat and blood triglyceride. In addition, by blocking the Nrf2/HO-1 signaling pathway, cells were protected from oxidative stress in hepatocytes. Moreover, CAC inhibited the expression of COX-2, iNOS, TNF-α and IL-17 in hepatocytes. These results suggest the possibility that CAC extract can be applied in the field of health functional foods and pharmaceuticals for improvement and prevention of NAFLD.
Colorectal cancer (CRC) is the third most common malignancy and fourth most common cause of cancer mortality worldwide. Untreated chronic inflammation in the intestine ranks among the top three high-risk conditions for colitis-associated colorectal cancer (CAC). Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) protein is a member of the STAT family of transcription factors often deregulated in CRC. In this review, we try to emphasize the critical role of STAT3 in CAC as well as the crosstalk of STAT3 with inflammatory cytokines, nuclear factor (NF)-${\kappa}B$, PI3K/Akt, Mammalian Target of Rapamycin (mTOR), Notch, $Wnt/{\beta}$-catenin and microRNA (MiR) pathways. STAT3 is considered as a primary drug target to treat CAC in humans and rodents. Also we updated the findings for inhibitors of STAT3 with regard to effects on tumorigenesis. This review will hopefully provide insights on the use of STAT3 as a therapeutic target in CAC.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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