해수산 rotifer Brachionus rotundiformis의 내구란 대량생산을 위한 효과적인 유성생식자극요인을 구명하기 위해 염분자극과 기사용배양수의 효과를 9일 동안 조사하였다. 각 염분에 노출된 후 모든 실험구에서 배양 3일째부터 유성생식률이 증가하기 시작했으며 이후 배양 4-5일째 이후 감소하는 경향을 보였다. 내구란은 10‰, 15‰, 20‰, 25‰ 실험구에서 배양 4일째에 출현하였으며 특히 20, 25‰ 실험구는 배양 6일째 수정률이 각각 33.3%와 31.3%로 다른 실험구에 비해 높게 나타났다. 9일간 평균 유성생식률은 10‰와 20‰ 실험구에서 각각 25.3%와 20.2%로 높게 나타났다. 수정률은 25‰ 실험구에서 14.0%로 가장 높았다. 각 기사용배지농도에 노출된 후 모든 실험구의 유성생식률은 염분실험결과와 유사한 경향을 보였고 내구란은 0%과 25% 기사용배지에 노출되었을 때 만 출현하였다. 평균수정률은 모든 실험구가 차이를 보이지 않은 반면, 유성생식률은 25% 실험구가 22.3%로 대조구인 0%에 비해 높게 나타났다. 본 연구결과를 종합해보면, B. rotundiformis의 내구란 대량생산을 위한 효과적인 유성생식유발요인으로 기배양수자극보다 염분자극이 더 효과적이며 최적 염분은 비교적 높은 유성생식률과 수정률을 유도한 20-25‰로 판단된다. 본 연구결과는 차후 rotifer 내구란 대량생산을 위한 핵심적인 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
rotifer의 배양조에 혼재된 Artemia가 rotifer의 증식에 미치는 영향을 검토하였다. 실험에는 Koshiki주의 rotifer, Brachionus rotundiformis와 미국 샌프란시스코의 Great Salt lake주의 Artemia sp.를 사용했다. 그리고 모든 실험은 염분을 22ppt, 배양 온도는 $25^{\circ}C.$, 먹이로서 N. oculata을 2일 간격으로 ml 당 $7{\times}10^5$ 세포씩 공급하면서, 50 ml의 비이커에 N. oculata 현탁액을 40ml씩 넣고, rotifer 20마리 그리고 Artemia는 3마리씩 각 수조에 수용하여 각 생물들을 단일종 배양한 경우와 혼합 배양한 경우의 증식을 비교하였다. rotifer와 Artemia 유생을 혼합 배양한 경우, 두 생물은 한정된 먹이 N. oculata 조건하에서 먹이 경쟁(food competition)을 하였다. 또한, rotifer의 대량 배양조에 Artemia 성체의 급속한 섭식 활동에 의해서 심각한 먹이 부족 현상을 일으켰다. 결국, Artemia 성체는 rotifer의 안정적인 생산을 크게 방해하는 rotifer 증식 억제 요인으로서 작용했다. 즉, rotifer을 안정적으로 생산하기 위해서는 종묘 생산 과정에서 유발될 수 있는 Artemia의 혼재가 일어나지 않도록 각별한 주의가 필요하다.
본 연구는 rotifer, B. rotundiformis를 대상으로 소화효소 실험을 하기 위해 이들이 가지고 있는 소화효소의 최고 활성 조건을 확인하기 위해 수행하였다. rotifer, B. rotundiformis의 $\alpha$-amylase, total alkaline Protease, trypsin 및 TG-lipase는 Tris-HCl buffer 보다 phosphate-NaOH buffer 안정적인 효소활성을 보였다. $\alpha$-amylase, trypsin 및 TG-lipase는 pH 8.0에서, total alkaline proteaset pH 7.0에서 높은 효소 활성을 나타내었다. $\alpha$-amylase 활성은 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였으며, total alkaline pretense와 trypsin은 $55{\~}60^{\circ}C$의 온도에서 높은 활성을 나타내었다. 반면 TG-lipase 활성은 $25{\~}30^{\circ}C$의 낮은 온도에서 활성이 높았다. $\alpha$-amylase, total alkaline pretense, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 기질 농도는 $3.5\%$ starch, $\0.6%$ azo-casein, $87.5{\mu}M$ BApNA and 81.2 mM olive oil이었다. $\alpha$-amylase, total alkaline protease, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 반응시간은 40, 60, 30 and 25 min으로 나타났다. 본 연구 결과에서 얻어진 자료는 rotifer, B. rotundiformis의 소화효소 연구를 위한 기초 자료로 이용될 것이다.
This study investigated the possibility of salinity acclimation of freshwater rotifers (Brachionus calyciflorus) as live food for sweetfish (Plecoglossus altivelis) larvae, and also examined the optimal salinity for the growth of sweetfish. Freshwater rotifers cultured in 0 and 4 PSU and seawater rotifers (B. rotundiformis) cultured in 33 PSU were supplied to the larvae with four kinds of enrichment material (condensed freshwater Chlorella, $\omega-yeast,$ baker's yeast, Super Selco) and larval growth at 4 PSU was examined. Growth of the freshwater rotifers positively increased from 0 PSU to 6 PSU, but decreased when over 8 PSU was reached. Growth and survival of the sweet fish larvae reared in 0 PSU were significantly lower than those reared in either 4 PSU or 33 PSU. This indicated that the freshwater rotifers (B. calyciflorus) could be used as live food for sweetfish larvae reared in 4 PSU. The body weight of sweetfish larvae fed on freshwater rotifers enriched with Super Selco was the highest at 0.163 mg, but there was no significant difference in survival and body length of the fish fed with the other enrichment materials. The content of n-3 HUFA of the sweetfish larvae fed on the freshwater rotifers enriched with Super Selco and the condensed freshwater Chlorella was higher than that enriched with $\omega-yeast$ and baker's yeast. These results indicated that B. calyciflorus cultured with the condensed freshwater Chlorella could be used for the sweetfish larvae without enrichment, and the most efficient enrichment material for B. calyciflorus is Super Selco.
본 연구의 목적은 rotifer Brachionus rotundiformis의 수온과 염분농도의 변화에 따른 이들의 소화효소 활성을 파악하고, 소화효소 활성을 기초로 적정 영양강화 조건을 찾는 것이다. 다른 온도에서 24시간 배양된 rotifer 밀도는 $32^{\circ}C$에서 1,453 개체/mL로 가장 높았다(P<0.05). 그리고 배양온도 $28^{\circ}C$에서 염분농도에 따른 rotifer 밀도는 15 에서 2,147 개체/mL로 가장 높게 나타났다(P<0.05). 배양환경에 따른 rotifer의 소화효소 활성에서 TAP 개체당 활성은 $24-32^{\circ}C$에서 유의적으로 높게 나타났으며(P<0.05), 단백질 비활성은 $32-36^{\circ}C$에서 높게 조사되었다(P<0.05). 그리고 TG-lipase 활성에서는 개체당 활성과 단백질 비활성 모두 $20^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였다(P<0.05). 또한 염분별 실험에서 TAP와 TG-lipase 활성은 32 psu에서 가장 높은 활성을 보였다(P<0.05). 32 psu에서 온도별 영양강화한 rotifer의 methionine 함량(% in protein), 지질 함량과 지방산 불포화도이 $20^{\circ}C$에서 유의적으로 높게 나타났다. 특히, DHA와 DHA/EPA 비가 $20^{\circ}C$ 실험구에서 12.6%와 12.5의 비로 각각 높았다(P<0.05). 따라서 rotifer B. rotundiformis의 지질 영양강화는 특히 TGlipase 활성을 높여 줄 수 있는 32 psu, $20^{\circ}C$에서 실시하는 것이 지방산 불포화도, DHA 및 DHA/EPA 비를 높여 줄 수 있는 효과적인 방법이라고 판단된다.
본 연구는 통기방법과 배양수의 환수에 따른 담수산 rotifer B. calyciflorus의 내구란 형성을 조사하였고 0.5 톤 수조에서 내구란 대량 생산을 수행하였다. 산소와 공기를 공급한 실험구에 있어서 rotifer의 최고밀도와 유성생식률은 차이는 없으나 수정률과 내구란 형성은 공기를 공급한 실험구가 산소를 공급한 실험구보다 높게 나타났다. 배양수의 환수간격에 따른 실험에서 환수를 하지 않은 실험구가 rotifer 최고밀도와 내구란 형성은 환수를 한 실험구(매일 환수한 실험구)보다 높게 나타났지만 내구란 생산의 효율적인 측면에서 Chlorella 건조중량당 내구란 형성은 환수를 한 실험구(매일 환수한 실험구)에서 가장 높게 나타났다. 또한 0.5톤 수조에서 내구란의 총 생산량은 $51.8{\sim}57.9{\times}10^6$개로 나타났다. 본 연구의 결과를 종합하여 볼 때, 공기를 공급한 batch 배양이 담수산 rotifer, B. calyciforus의 내구란을 대량생산하는데 효과적인 방법인 것으로 판단된다. 또한 이종의 내구란 대량생산은 해수산 rotifer B. plicatilis와 B. rotundiformis와 비슷한 생산 효율을 보인 것으로 판단된다.
제주 연안에서 주로 어획되는 연안 정착성 고급 어종인 흰점독가시치, S. canaliculatus 양식 기술개발을 목적으로 부화 자어의 먹이 섭취, rotifer와 Artemia nauplii에 대한 섭식 생태 등 종묘생산을 위한 기초적인 연구와 자어 사육 시스템의 개선과 새로운 먹이생물을 적용하여 대량 종묘생산을 실시하였다. 흰점독가시치 자어의 먹이 계열별 생존율 실험은 부화후 1일째부터 참굴의 trochophore 유생과 B. rotundiformis를 공급한 실험구에서 부화 후 10일째까지 평균 3.3%가 생존하였으나, rotifer와 ciliata를 공급한 실험구 및 rotifer와 N. oculata를 공급한 실험구에서는 정상적으로 섭식하지 못하고 부화 후 5일과 6일째 모두 사망하였다. 자어의 성장에 따른 rotifer의 1회 섭식량은 부화 후 5일째에는 평균 11개체, 부화 후 9일째에는 43개체, 부화 후 15일째에는 167개체로 급격히 증가하여 19일째에는 239개체를 섭식하였다. Artemia nauplii의 일간 섭식량은 부화 후 12일째 평균 43.5개체, 부화 후 15일째부터는 섭식량이 급격히 증가하여 438개체를 섭식하였으며, 부화 후 24일째에는 자어 1마리가 하루에 평균 3,000개체를 섭식하였다. 대량 종묘생산은 야외수조(23$M^3$)에서 규조류를 번식시키고 나서 N. oculata를 첨가하면서 1주일간 물 만들기를 실시하였다. 그 이후부터는 B. rotundiformis (136${\mu}$m)와 copepoda 류를 배양한 상태에서 수정란을 수용하여 부화된 자어를 50일간 사육하였다. 또한 바윗굴의 trochophore 유생(58~62${\mu}$m)을 자어의 대량 폐사가 발생하는 위험기(부화 2~7일)에 공급하여, rotifer로의 먹이전환이 원활하게 이루어졌다. 부화 후 5일까지의 생존율은 14.9%, 부화 후 10일까지의 생존율은 11.1%였으며, 최종 사육 기간동안 생존율은 10.7%, 치어의 평균 전장은 65.5${\pm}$0.4mm 이었다.
섬모충은 윤충류보다 다양한 크기를 가지고 있으며, 얇은 세포벽, 느린 운동성, 빠른 번식률로 새로운 동물성 먹이생물로써 개발가능성을 가지고 있다. 한국 연안 수역인 수영만, 광양만 및 경기만 소래 염전지역에서 식물성 플랑크톤 네트를 이용하여 6종의 섬모충을 채집하였으며, capillary pipette로 분리 $\cdot$배양하였다. 먹이생물로써의 개발가능성을 파악하기 위하여 크기, 운동성, 배양밀도 및 부유능력을 평가하였으며, 채집된 섬모충류 가운데 광양만에서 채집된 Euplotes sp. (K-1)가 가장 적합한 것으로 평가되었다. MErds 기본배지에 glycine, glucose, yeast extract을 각 0.1 g씩 첨가하여 변형한 MErds-2 배지는 기본배지보다도 약 6배의 번식률을 보여, Euplotes sp.를 비롯한 기타 섬모충 배양배지로도 유용하였다. Euplotes sp. (K-1)은 수온 $22.5^{\circ}C$, pH 8,조도 2,000 lux에서 각각 최고의 번식률을 보였으며, 이들 환경조건에 대해 비교적 폭넓은 환경적응력을 나타내었다. 한편, 빵효모 1.0 g/L의 첨가에 의해서도 대량배양이 가능하였다. 본 연구에서의 섬모충은 종보관이 용이하며 폭넓은 환경 적응력과 간단한 방법의 대량배양이 가능하여 초기 동물성 먹이생물로써의 높은 잠재력을 가지고 있는 것으로 평가되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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