엿기름의 적정 제조조건을 설정하기 위하여 발아조건를 달리하여 제조한 엿기름의 ${\beta}-glucanase$, ${\alpha}-amylase$ 및 ${\beta}-amylase$의 활성을 조사하였다. 보리는 발아가 진행됨에 따라 ${\beta}-glucanase$의 활성이 증가하였으며, 이로 인해 세포벽의 주요 구성다당류인 ${\beta}-glucan$이 분해되어 감소하였다. ${\beta}-Glucanase$ 활성은 $15^{\circ}C$의 발아온도에 비해 $18^{\circ}C$와 $21^{\circ}C$에서 발아초기에 급격히 증가하였으며 발아 6일경에는 최고값에 달하였다. 6조보리인 올보리의 ${\beta}-glucanase$ 활성이 2조보리인 진양보리에 비해 높게 나타났다. 올보리의 ${\alpha}-amylase$ 활성 역시 진양보리에 비해 현저히 높았으며 6일간의 발아일수에서 증가하는 경향이 있었다. 발아보리의 ${\alpha}-amylase$ 활성은 발아온도 $15^{\circ}C$에서 가장 낮았고 $18^{\circ}C$에서 가장 높았으며 $21^{\circ}C$에서는 약간 감소하였다. ${\beta}-Amylase$는 원맥에서 상당한 활성이 있었으며 발아과정중에 지속적으로 증가하는 경향을 보였다. $15^{\circ}C$에 비해 $18^{\circ}C$와 $21^{\circ}C$에서 발아일수에 따른 ${\beta}-amylase$ 활성의 증가폭이 컸으며 발아 5일 이후부터는 효소활성도에 있어서 크게 변화를 보이지 않았다. 엿기름의 당화력(diastatic power)은 올보리가 진양보리에 비해 $1.4{\sim}1.9$배 정도 높았으며 $18^{\circ}C$에서 $5{\sim}6$일의 발아가 당화력이 가장 우수한 것으로 나타나 발아조건으로서 적합한 것으로 제시되었다.
엿기름의 품질 요소인 당화력(DP)은 보리품종에 따라 큰 차이를 나타내 $139{\sim}220^{\circ}L$의 범위에 있었다. 당화력은 ${\alpha}-amylase$ 보다 ${\beta}-amylase$와 높은 상관관계가 있어 엿기름의 ${\beta}-amylase$ 활성이 매우 중요한 인자였으며, 엿기름 첨가에 따른 amylograph 전분기질 점도 감소는 ${\alpha}-amylase$와 관련이 있는 것으로 확인되었다. 보리품종들의 품질요소들을 분석하여 엿기름 당화력과의 상관관계를 조사한 결과 엿기름의 당화력은 원맥의 품질인자와 상관관계가 별로 높지 않았으나 중량이 낮은 품종이나 덜 풍만한 품종에서 당화력이 높은 경향을 보여주었다. 보리원맥이 지니고 있는 ${\beta}-amylase$ 활성은 엿기름의 당화력과 상관관계가 있는 것으로 평가되었으며 엿기름의 당화력을 예측할 수 있는 잠재적인 당화력으로서 엿기름 제조에 매우 유용한 품질인자인 것으로 판단되었다.
인삼액기스의 첨가량을 달리한 배지에 시간별로 국균의 첨가력($\alpha$-amylase, $\beta$-amylase, protease)에 미치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1) Asp. oryzae의 $\alpha$-amylase 활성도는 48시간 배양까지는 대조구보다 다소 높았으나 그 이후는 같은 경향을 나타내었고, Asp. oryzae의 $\beta$-amylase 활성도는 배양 24시간에서 인삼엑기스, 첨가량순으로 촉진되어 1%구까지 증가하고 3~5%구는 그 활성이 첨가량 순으로 감소되었다. Asp. oryzae의 protease 활성도에서 acid protease는 배양 72시간까지 대조구보다 활성이 높았고, 그중 3.0%구의 48시간때가 가장 역가가 높았으며 120시간 배양에서는 인삼엑기스 3.0% 이상이 효소활성의 감소가 컸다. Alkaline protease는 대조구보다 객처리구의 역가가 떨어졌다. 그러나 alkaline protease는 aeid protease보다 활성도가 높았다. 2)Asp. niger의 $\alpha$-amylase 활성도는 인삼엑기스 첨가량 순으로 높아지고 그 활성이 급증가하였다가 급감소되는 경향을 보였고, Asp. niger의 $\beta$-amylase 활성도는 인삼엑기스, 첨가량에 따라 활성이 높아졌으며 0.5~3.0% 첨가시에는 대조구 및 5.0%보다 활성이 빨고 높게 나타났으며 5.0구는 그 활성이 억제되었다. Asp. niger의 protease 활성도는 acid protease가 alkaline protease보다 효소역가가 현저하게 높았다. acid protease는 배양 48시간까지는 인삼엑기스의 첨가량에 따라 효소역가가 조해되었으나 72시간에서는 인삼엑기스 첨가량 순으로 역가가 높았고, 단 5.0%구만 현저하게 효소력이 감소되었다. Alkaline protease는 배양 24시간에서 48시간까지는 0.1%구와 0.5%구가 대조구보다 효소력이 높았고 그 이상의 인삼엑기스가 첨가된 처리구보다 효소력이 낮았다. 그러나 48시간 이후부터는 효소력은 인삼엑기스 첨가량 순으로 감소를 나타내었다.
대두 및 고구마로부터 얻은 ${\beta}-Amylase$의 단백질 구조를 CD Spectra, 항체반응, 화학적 절단을 통하여 비교하였다. 고구마 ${\beta}-Amylase$는 4개의 동일한 subunit로 구성되어 있으며 대두 ${\beta}-Amylase$는 Subunit구조를 하고 있지 않았다. 또한 두 효소는 변성시킨 상태에서 SDS-gel전기영동, gel filtration한 결과 분자량은 동일하였다. 그리고 대두 및 고구마 ${\beta}-Amylase$는 CD spectra상 유사한 2차구조를 나타내고 있으나 방향족 측쇄가 상이함을 나타냈다. 한편 cyteine 잔기 및 methionine 잔기의 화학적 절단한 결과 두 효소는 동일한 아미노산 배일을 나타냈다. 또한 면역학적인 방법에 의해서도 두 효소는 유사성이 인정되었다. 한편 대두 ${\beta}-Amylase$에 대한 항체는 고구마 ${\beta}-Amylase$의 활성을 억제하였으나 밀, 보리, 무우 ${\beta}-Amylase$에 대해서는 활성 억제가 나타나진 않았다.
Monascus속 곰팡이를 이용한 메주의 효소류 활성을 조사하기 위하여 M perpureus와 M. pilasus의 두 균주를 사용하여 쌀 메주와 콩 메주의 효소활성을 조사하였다. M Manascus 백미 및 백미붙말 메주의 효소휴 활성은 전반 적으로 M pilasus를 사용한 경우에 높았다 Prote잃e 활 성응 쌀 분말 메주가 남알상태의 쌀 메주에 비하여 높 았으나. ($\alpha$-amylase, $\beta$-amylase 및 glucoamyJa않는 날알 쌀 메주에서 높았다. 균주 배양액을 사용한 콩 메주는 효소활성온 높았으나 외관적 품질이 양호하지 못히였다. 균주 배양액 10%와 쌀 분말을 0-12% 범위로 챔 가한 결과 prot,않se의 활성온 두 균주 다같이 10%일 때 최대를 나타내었다. ($\alpha$-anylase의 활성은 쌀 분말의 첨가량이 2%일 때 가장 낮았으나 첨가량이 증가할수록 활성이 증가하였다 $\beta$-와nylase와 gluecoamnylase의 훨-성 은 우 균주 다같이 쌀 분말의 첨가량이 증가할수록 감소하였다 메주용 균주로는 M pilosus몹가 양호하였으며 이 균의 쌀 메주 분말을 증자 콩에 10% 되게 첨가 하여 발효시킨 콩 메주는 일반 Aspergillus oryzzae 콩 메주에 비하여 protease 활성은 높았다. 그러나 $\beta$-amylase 와 glueoarnylase는 약 50% 이하의 활성을 나타내었다.
$\beta$-Amylase was purified from sweet potato by acetone fractlonatlon, Sephadex A-50 ion exchange chromatography and Sepgadex G-200 gel chromatographyl The higher enzyme concentration was, the higher heat stability of enzyme became. After 1 hour 30 minute. At 6$0^{\circ}C$ in pH 5, enzyme under concentration of 30$\mu$l/ml lost its activity completely and over the concentration of 100$\mu$g/ml remained 25% of activity. The enzyme was stabilized at range of pH 4~10 and pH stability was increased by glycerol. Five moles of NaCl inhibited completely of the enzyme activity. SDS of 0.05% inhibited the enzyme completely after 12 hours at 37$^{\circ}C$ in pH5. One mole guanidine-HCl and 8M urea inhibited the entire enzyme after 13 hours at 37$^{\circ}C$ in pH 5.
The culture used wheat bran as media for four kind of mold strains such as Aspergillus oryzae, Aspergillus kawachii, Aspergillus usamii and Rhizopus javanicus to examine which strain could higher the activity of amylase most which is used for alcohol fermentation. It also provided three different kind of wheat bran media containing starch of 47%, 51% and 55% respectively for each strain. For each media it also added three different kind of nitrogen sources; ammonium sulfate, casein, and ammonium sulfate and casein equally mixed. Each nitrogen source added was subordinately differentiated into three different percentages, 2%, 4% and 6% respectively, except the 2% for the ammonium sulfate. The results obtained were summarized as follows (1) The activity of ${\alpha}-amylase$ was highest in the media of starch value 47% of wheat bran with 6% of casein added. (2) The activity of ${\beta}-amylase$ was highest in the media of starch value 51% of wheat bran with 2% of the equal mixture of ammonium sulfate and casein added. (3) The activities of both ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ of Aspergillus usamii were highest in the media of starch value 47% wheat bran with no addition of nitrogen source. (4) Of the four strains examined, the activities of ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ cultured in Rhizopus javanicus were both relatively higher. (5) The activities of ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ of the strains examined became lower as the percentage of starch contents increased except in Rhizopus javanicus.
본 연구는 효소식품과 효소표방식품 (기타가공식품, 음료베이스, 기타발효음료, 액상차) 98건에 대한 ${\alpha}$-아밀라아제, ${\beta}$-아밀라아제 활성과 당 함량을 조사하였다. 효소식품과 기타가공품의 ${\alpha}$-아밀라아제 활성은 각각 4.9~53,854.6 U/g, 2.9~1,182.7 U/g으로 같은 유형간에 큰 차이가 있었다. 발효식품의 ${\alpha}$-아밀라아제 활성은 각각 0.1~1.7 U/g이었다. 효소식품, 기타가공품 그리고 발효식품의 ${\beta}$-아밀라아제 평균 활성은 각각 126.0 U/g, 5.6 U/g, 10.5 U/g으로 효소표방식품은 효소식품보다 훨씬 낮은 활성을 나타냈다. 평균 당 함량은 효소식품 22.4 g/100 g, 기타가공품 14.8 g/100 g, 음료베이스 46.9 g/100 g, 기타발효음료류 41.1 g/100 g, 액상차 39.5 g/100 g으로 발효식품에서 높은 당 함량을 나타냈다. ${\alpha}$-아밀라아제 활성과 유당 함량은 효소식품에서 통계적으로 강한 상관관계(r = 0.644)를 나타냈고 기타가공식품에서는 매우 강한 상관관계(r = 0.903)를 나타냈다. ${\beta}$-아밀라아제 활성과 유당 함량은 효소식품에서 통계적으로 강한 상관관계(r = 0.648)를 나타냈고 기타가공식품에서는 강한 상관관계(r = 0.757)를 나타냈다. 효소식품과 기타가공품에서 ${\alpha}$-아밀라아제 활성과 ${\beta}$-아밀라아제 활성 사이에는 매우 강한 상관관계(r = 0.869, r = 0.760)를 나타냈다. 즉, ${\alpha}$-아밀라아제 활성과 ${\beta}$-아밀라아제 활성 사이에 비례관계가 성립함을 알 수 있었다.
V. alginolyticus 138-2, a marine halophilic bacterium, produced an extracellular amylase with a molecular weight of ca. 56,000. The analysis of the digestion products of soluble starch by thin layer chromatography(TLC) revealed that the extracellular amylase of V. alginolyticus 138-2 is a saccharifying-type alpha-amylase. The alpha-amylase activity of the culture supernatant of soluble starch was optimal at pH 6.0 and 45$^{\circ}C$. Ca2+ slightly increased the alpha-amylase activity, whereas Hg2+, An2+, Cu2+, Ni2+, Fe2+, and Mn2+inhibited the enzymatic activity. Alkylating thiol group agent, iodoacetic acid did not affect the alpha-amylase activity, but reduced thiol reagents such as dithiothreitol, cysteine, and beta-mercaptoethanol stimulated theenzymatic activity. On the other hand, even if V. alginolyticus 138-2 is a marine halophilic bacterium, its alpha-amylase activity was significantly inhibited by NaCl.
한국의 토양에서 분리한 균 중 bacterial $\alpha$-amylase에 저해효과가 있는 균주를 분리하여 DMC-47 균주라 명명하였고, 이 균주는 Streptomyces 속의 균임을 확인하였다. 이 균주를 옥수수 전분 배지에서 진탕 배양한 결과 4일후에 최대 저해 효과를 나타내었다. 이 균주가 생성한 저해물질은 bacterial $\alpha$-amylase, pancreatic $\alpha$-amylase, salivary $\alpha$-amylase, glucoamylase에 저해효과를 보였고, $\beta$-amylase 에는 저해효과가 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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