Bacillus polyfermenticus SCD was transformed by the recombinant shuttle vector for Bacillus and Escherichia coli containing 3 antibiotic resistant genes and an ${\alpha}$-amylase gene from Bifidobacterium adolescentis Int57. The ${\alpha}$-amylase gene fused to a secretion sequences was expressed under the control of the promoter of amylase gene from B. subtilis var. natto. The recombinant plasmid was maintained stably in the transformants producing the ${\alpha}$-amylase. The enzyme was secreted to outside of the cell and showed the similar enzyme activity as that of Bacillus subtilis BD170 under the same conditions of pH and growth temperature. Because of the relatively easy transformation and the secretion of the enzyme, the transformants of B. polyfermenticus SCD may give a new strategy in the production of foreign genes.
본 연구는 벼의 저온발아중 생채내의 ${\alpha}$-amylase 활성, 유리 proline함량, 생육특성 등 몇가지 실험을 수행하였던 바 얻어진 결과를 요약하면 저온발아시 초장은 품종간에 차이를 보이지는 않았지만 저온발아성이 다소 강한 대야벼가 3.9cm로 가장 우세하였으며 근장은 동진벼에서 4.8cm로 매우 양호한 생육현상을 보이는 것으로 나타났다. 벼 품종간 발아일수에 따른 ${\alpha}$-amylase 활성은 발아 후 3일째 고시히까리가 가장 낮은 65.4 mg인 반면에 동진벼는 80.9 mg 으로 매우 높은 활성을 보였다. 유리 proline 함량변화는 발아 후 3일째 저온발아능력이 다소 약한 품종인 상주벼와 고시히까리가 각각 $1.807{\mu}mole$, $1,800{\mu}mole$인 것보다 다소 강한 품종인 동진벼와 대야벼가 각각 $1,933{\mu}mole$, $1,895{\mu}mole$로 높은 함량변화를 보였다.
잣죽의 점도를 낮추는 주요원인이 amylase작용에 의한 것임을 증명하기 위하여 잣으로부터 조효소를 분리하고 작용특성을 조사하였다. 잣의 초산완충액 추출물에 ammonium sulfate를 가하여 $35{\sim}55%$ 포화되도록 하였을 때 침전하는 획분이 가장높은 ${\alpha}-amylase$의 specific activity를 나타내었다. 이 효소의 적정 작용조건은 $75^{\circ}C$, pH5.4이었으며 쌀가루에 첨가하여 amylograph 양상을 관찰한 결과 쌀가루의 점도를 크게 낮추는 것으로 나타났다.
감자 생전분의 분해력이 강한 $\alpha$-amylase를 생산하는 Bacillus circulans F-2를 선발하고, 이 균주가 생산하는 $\alpha$-amylase를 정제하였으며, 정제효소의 polyacrylamide disc gel electrophoresis, SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis 및 soluble starch에 eo한 분해산물을 검사하고 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1 조효소액을 corn starch흡착, 유안분획, Bio-Gel P-100에 의한 gel filtration 및 DE-32 column chromatography에 의하여 specific activity 50.0 u/mg protein(원 비활성의 약 23배), 수율 25. 5%의 정제효소를 얻었다. 2. 정제효소에 대하여 polyacrylamide disc gel electrophoresis를 실시한 결과 $\alpha$-amylase activity를 가지는 아주 인접된 2ro의 Band가 나타났으나, SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis의 결과, polyacrylamide disc gel electrophoresis에서 나타난 2개의 Band는 charge가 약간 다른 charge isomer의 $\alpha$-amylase임을 시준하는 single band가 나타났다. 3. Polyacrylamide의 농도에 따른 2개 Band의 log mobility의 plot는 charge isomer를 가리키는 평행선을 나타내었다. 4. 두 효소단백질 Band의 작용 pattern을 알기 위하여 2개의 Band를 각각 분리하여 추출하고 soluble starch에 작용시켜 생성된 oligosaccharide의 pattern을 paper chromatography로 확인한 바 2개의 효소단백질 Band는 동일한 작용 pattern을 나타내었다. 5. Soluble starch로부터 생성되는 유일한 초기 가수분해산물은 maltohexaose이었다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제8권2호
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pp.189-194
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2004
Amylase isozyme based three multivoltine viz., N+p, Np, N+ $p^{cho}$ and two bivoltine-D6+p, D6p syngenic lines (Syn. L) were developed from germplasm (GP) stocks Nistari (N) and D6 respectively. haemolymph isozyme pattern at pH 7.0 and 8.5 depicted a total 11 number (Am $y_{1 to 6}$ at pH 7.0 and Am $y^{l to 5}$ at pH 8.5) of native proteins (NP) of various sizes are amylase isozyme expressers. Among eleven NPs, two NPs of 770 kDa (Am $y^{6}$ at pH 7.0) and 376 kDa (Am $y^3$ at pH 8.5) are $\alpha$-amylase expressers and remaining NPs of 370, 364, 350, 329 and 274 kDa at pH 7.0 and 206, 292, 416, 725 kDa at pH 8.5 are $\beta$-amylase expressers. Accordingly, digestive juice amylase isozyme pattern at aforesaid pH also depicted a total number of 10 NPs (Am $y^{1 to 5}$) at each pH 7.0 and 8.5 are amylase expressers of which NP of 387 kDa (Am $y^4$ at pH 7.0) and 780 kDa (Am $y^{5}$ at pH 8.5) are a-amylase expresser. Remaining NPs of 338,297 & 216 kDa at pH 7.0 and 370, 341, 329 &302 kDa at pH 8.5 are $\beta$-amylase expresser. Recurrent backcross lines (RBL) viz., N+pRBL and NpRBL were developed through introgression of high shell weight character (a multigenic trait) to be used further for congenic line (Con. L) development and to understand any association with introgressed character. Isozyme pattern in haemolymph of RBLs depicted only one $\alpha$-amylase of 770 kDa at pH 7.0 and 376 kDa at pH 8.0 with three and four respective $\beta$-amylase bands but in bivoltine lines numbers of $\beta$-amylase bands vary between 1 to 2 at aforesaid pH. Variability was also observed in digestive juice of multivolitine and its RBLs but bivoltine lines express null activity at both pH except appearance of one very week $\alpha$-amylase band D6+p at pH 8.5. Overall study suggests that not a single NP at both pH is common for expression of any band of amylase isozyme i.e., a totally different set of proteins are the amylase isozyme expresser at specific pH and no molecular factor of amylase is associated in developed RBLs which showed improvement on survival, single cocoon shell weight (SCSW) and single filament length over receptor parents.s.s.s.
제주도에 자생하는 양치식물 25종을 대상으로 항산화활성, ACE 저해활성, APN 저해활성 및 $\alpha$-amylase 저해활성을 검색하였다. 항산화활성은 쇠고비와 일색고사리에서 비교적 높아서 항산화 음료로 애용되고 있는 차나무 잎보다도 더 높았다. ACE 저해활성과 APN 저해활성은 전체적으로 낮았으나, 쇠고비에서 각각 26.7%와 28.2%으로 비교적 높은 저해활성을 나타내었다. $\alpha$-Amylase 저해활성은 10종이 50% 이상의 높은 활성으로 보였으며, 그 중에서 쇠고비와 홍지네고사리의 저해활성이 특히 높았다. 이상의 결과로부터 쇠고비는 항산화활성뿐만 아니라 ACE 저해활성, APN 저해활성과 $\alpha$-amylase 저해활성 모두 다른 식물에 비해 높아 생리활성 물질의 분리 및 동정 등 식품소재 및 식물생약으로 이용하기 위한 후속 연구가 기대된다.
소금용액(15%, w/v)에서 깍두기용 무우 cube를 간절임하는 동안 무우 cube중의 ${\alpha}-amylase$ 활성도와 ascorbic acid 함량의 변화, 포도당액과 고추즙액의 침투에 대한 영향 및 생균수에 미치는 영향을 조사하였다. Ascorbic acid 함량은 1시간 동안 약 24%(w/v)가 감소되었고, 반면 ${\alpha}-amylase$ 활성도는 시간이 경과됨에 따라 다소 증가하는 경향을 보였다. 또한 간절임은 무우 cube 조직내로의 glucose와 고추 중액과 같은 양념류의 침투를 촉진하는 효과가 있었다. 그리고 무우 cube 중의 세균과 효모 및 곰팡이 수는 간절임 중 감소되었는데 간절임 1시간 이내에 주로 감소하는 경향을 나타냈다.
산업폐수로부터 강력한 $\alpha$-amylase 생성능력을 가진 미생물을 분리하여 검토한 곁과 Bacillus속 (Bacillus Y-124)으로 판명되었으며, Bacillus Y-l24로부터 $\alpha$-amylase의 생산성을 최적화하기 위해 배양조건 및 생성된 효소의 안정성을 유지하기 위한 제반 영향들을 검토하였다. 기본 배지내의 casein 및 Ca-pantothenate의 첨가는 본 효소의 생산에 좋은 인자로 작용하였으며 calcium이온 역시 효소합성에 관여하는 것으로 나타났다. 또한 (NH$_4$)$_2$HPO$_4$는 본 미생물의 효소생성 에 중요한 유기 질소원으로 작용하였다. 생성된 본 효소의 보존에 대한 안정성의 유지에는 calcium 및 sodium염의 영향이 컸으며 특히 CaCO$_3$ 및 $Na_2$SO$_4$의 첨가는 이 효소의 변성요인을 제거하는데 효과적인 보존제의 하나로 인식되 었다.
제주도에 자생하는 피자식물 289종 454점을 대상으로 항산화활성과 ${\alpha}$-amylase 저해활성을 검색하였다. DPPH radical에 대한 전자공여능으로 측정한 항산화활성은 붉나무의 오배자, 굴피나무의 열매, 참죽나무의 줄기 메탄올 조추출물에서 높은 활성을 보였다. 특히, 붉나무의 오배자의 항산화활성은 94.2${\pm}$0.8%로 본 실험에 동일 농도의 대조구로 사용된 BHA(61.7${\pm}$0.6%)와 ascorbic acid(53.6${\pm}$0.7%) 보다도 활성이 높았다. 그리고 붉나무, 굴피나무, 참죽나무 이외의 나머지 52점의 식물들도 차나무 잎의 활성보다 높았다. ${\alpha}$-Amylase 저해활성은 곰의말채의 줄기와 잎, 조록나무의 잎과 소지, 정금나무의 잎 등 9종 11점에서 80% 이상의 높은 활성을 보였다. 앞으로 식품 소재 또는 생약으로의 개발 가능성을 모색하기 위해서 활성성분의 분리 및 동정 그리고 이들 물질을 이용한 임상실험 등 보다 심도있는 연구가 요구된다.
The culture used wheat bran as media for four kind of mold strains such as Aspergillus oryzae, Aspergillus kawachii, Aspergillus usamii and Rhizopus javanicus to examine which strain could higher the activity of amylase most which is used for alcohol fermentation. It also provided three different kind of wheat bran media containing starch of 47%, 51% and 55% respectively for each strain. For each media it also added three different kind of nitrogen sources; ammonium sulfate, casein, and ammonium sulfate and casein equally mixed. Each nitrogen source added was subordinately differentiated into three different percentages, 2%, 4% and 6% respectively, except the 2% for the ammonium sulfate. The results obtained were summarized as follows (1) The activity of ${\alpha}-amylase$ was highest in the media of starch value 47% of wheat bran with 6% of casein added. (2) The activity of ${\beta}-amylase$ was highest in the media of starch value 51% of wheat bran with 2% of the equal mixture of ammonium sulfate and casein added. (3) The activities of both ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ of Aspergillus usamii were highest in the media of starch value 47% wheat bran with no addition of nitrogen source. (4) Of the four strains examined, the activities of ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ cultured in Rhizopus javanicus were both relatively higher. (5) The activities of ${\alpha}-amylase$ and ${\beta}-amylase$ of the strains examined became lower as the percentage of starch contents increased except in Rhizopus javanicus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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