• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.301-304
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• 1990

Bti와 Btd의 내독소에 대한 면역학적인 검토를 행한 결과 양균주의 내독소에는 동일한 기원의 단백질이 혼존하고 있음을 면역확산반응 및 면역전기영동법으로 확인되었다. 또한 동일한 기원의 단백질 함량은 Bti 내독소 보다 Btd 내독소에 많이 존재함을 효소항체법으로 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권3호
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• pp.308-312
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• 1991

B.thuringiensis subsp. darmstadiensis 73E10-2의 내독소에 대한 화학적 처리에서 고농도의 중성염(4M NaBr), 유기용매(50% acetone), 변성제(4M urea) 및 중성 계면활성제(10% triton X-100)로 내독소를 처리하였을 때 모기유충에 대한 독력의 소실이 거의 나타나지 않았으나, guanidine HCL이나 $CCl_4$ 또는 양이온 및 음이온 계면활성제로 처리함으로써 그 독력이 크게 소실되었다. 또한, 내독소의 sulfhydryl기의 변형은 모기유충에 대한 독력에 영향을 나타내지 못하였으나, lysine기 변형으로 내독소의 독력이 거의 완전히 소실되었다.

• 생명과학회지
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• 제17권5호
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• pp.658-663
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• 2007

B. thuringiensis는 많은 해로운 곤충들을 박멸시키는데 널리 사용되는 생물학적 살충제로 잘 알려져 있다. 그것은 측포자 형태의 결정체($\delta$-내독소)를 생산하고 내생포자들을 형성한다. 본 논문에서는 B. thuringiensis BT-1과 BT-2에 의해 생산되는 내독소의 특성을 주사전자현미경(SEM), 투과전자현미경(TEM), SDS-PACE, 알칼리 용액에서의 용해 활성을 통하여 규명하였다. BT-1, BT-2 균주는 GBY 배지에서 배양되었고, 두 균주의 내독소는 당밀도구배법을 이용하여 정제되어, 주사전자현미경(SEM), 투과전자현미경(TEM)으로 관찰하였다. 형태학적으로, BT-1의 내독소는 사각형 및 납작형이고 크기는 $1.73{\mu}m{\times}0.7{\mu}m$, 그리고 BT-2 내독소는 구형이며 $1.1{\mu}m$, 폭이 $0.9{\mu}m$인 것으로 밝혀졌다. SDS-PACE 방법으로 분석한 결과, BT-1의 분자량은 28 kDa, 21 kDa, 반면에 BT-2의 분자량은 50 kDa, 35 kDa, 22 kDal으로 밴드가 형성되었다. 이들의 결정체는 알칼리 완충용액 내에서 시간에 지나감에 따라서 점차로 용해되었으며 3시간 후에는 거의 완전하게 용해되었다. 이 결과들을 통하여 BT1과 BT-2 결정체의 내독소가 곤충의 중장 내에서 시간이 흐름에 따라 비활성 상태에서 활성상태로 전환되는 것으로 보여진다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제37권1호
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• pp.62-67
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• 1995

Bacillus thuringiensis(Bt) var, kurstaki의 내독소 단백질을 섭취한 미국천불나방(Hyphantria cunea)의 유충에서 중장과 지방체조직의 세포 미세구조변화를 투과전자현미경으로 조사하였다. Bt 내독소 단백질은 중장 원주상피세포에 있어서 미세융모의 파괴, 소포체 구형화, 기저층 소실, 리보솜 탈락, 세포내 소기관의 파괴 등을 초래하였다. 또한, 지방체 세포에서도 역시 소포체의 구형화와 미토콘드리아의 변형 등 세포미세구조의 변화를 유발시켰다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제37권2호
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• pp.176-180
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• 1995

나비목과 파리목 곤충에 독성을 보이는 B. thuringiensis NT0423을 수용체로 하여 형질전환된 B. thuringiensis PT0529에서 원래 수용체가 생성하는 내독소 단백질과 도입된 CryIVD 및 CytA 단백질들간의 발현 특성을 분석하기 위하여, B. thuringiensis PT0529에서 내독소 단백질들간의 발현을 성장 과정에 따라 투과 전자 현미경 관찰 및 단백질 전기영동으로 분석하였다. 그 결과, B. thuringiensis PT0529에서 내독소 단백질의 발현은 원래의 수용체 내독소 단백질보다 도입된 CryIVD와 CytA가 먼저 합성되었으며, 그 발현량에 있어서도 높게 나타났다. 또한, B. thuringiensis PT0529에서 세가지 내독소 단백질은 그들 자신의 고유 형태로 잘 발현되었으나, 수용체인 B. thuringiensis NT0423의 내독소 단백질은 그 크기에 있어서 다소 작게 관찰되었다. 따라서 형질전환체 내에서 도입된 내독소 단백질 유전자의 발현은 수용체의 내독소 단백질 유전자 발현에 영향을 받지 않는 반면 외부 유전자의 도입으로 인하여 수용체가 생성하는 내독소 단백질은 그 발현에 있어서 간섭을 받는 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권3호
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• pp.303-307
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• 1991

B.thuringiensis subsp. darmstadiensis 73E10-2의 내독소에 존재하는 hemolysin이 Sephadex G-100 gel filtration과 DEAE-cellulose ion exchange column chromatography에 의해 정제되었으며, 그 순도는 SDS-PAGE와 Ouchterlony test로 확인하였다. 그 결과 정제된 hemolysin의 분자량은 64KDa 의 단백질 이었으며, in vivo 상태에서는 전혀 모기유충에 독작용을 나타내지 않았다는 점이 28KDa 단백질의 차이가 있었다. 또한 정제된 hemolysin과 B.thuringiensis subsp. israelensis의 내독소를 효소항체법으로 검토해 본 결과 양단백질 사이에는 면역학적으로 전혀 상관이 없었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제37권1호
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• pp.68-73
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• 1995

미국흰불나방(Hyphantria cunea)의 유충에서 중장, 지방체, 말피기씨관에 Bacillus thuringiensis(Bt) var. kurstaki의 내독소 단백질의 독성효과로 인한 생리적 변화를 autoradiography와 Western blot으로 확인하였다. 단백질 합성과 번역연장민자-2에 미치는 영향을 조사한 결과, 앞의 모든 조직에서 단백질 합성이 급격히 저하되었으며, 번역연자인자-2의 활성도 병행하여 저하되었다.

• 자연과학논문집
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• 제6권1호
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• pp.41-48
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• 1993

위치지정 변이기법을 이용하여 Bacillus thuringiensis var. kurstaki NRD 6의 내독소 유전자의 N말단 독성부위를 변이시켜 Bacillus thuringiensis var. kurstaki NRD 6-Stu 1을 육종하였다. 내독소에 대한 염기서열 조사결과, 변이주의 내독소 유전자부위에 Stu 1 인식부위가 생성되었고 특히, 이부위의 177번 염기 A가 C로 치환된 silent mutation이 일어났음을 확인하였다. 변이주의 내독소 유전자의 항원성질은 친주와 차이가 없었고 Choristoneura femiferana-1에 대한 독성도는 0.015~0.030ng으로 친주의 0.01~0.024ng과 유사하였으나 다른 친주계열인 B.t.kurstaki NRD 5의 500~1000ng과 B.t.kurstaki NRD 4(무독성)보다 강하였다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제33권3호
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• pp.178-183
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• 1994

Bacillus thuringiensis kurstaki와 aizawai의 내독소단백질을 알카리용액 또는 트립신, 곤충소화액 드응ㄹ 처리하여 전기영동한 후 단백질팬턴을 비교하였다. 두 균주의 주요 결정단백질은 130kd와 64kd의 단백질이었으며, 소화액이나 효소로 처리한 경우 공통적으로 62kd의 활성독소가 생성되었다. 그러나, aizawai는 kurstaki에 비해 현저히 적은 양의 62kd 단백질을 생성하였다. 흰불나방의 유충이 Bacillus thuringiensis 독소를 섭식하였을 때 지방체를 비롯한 몇 가지 조직에서 45kd의 스트레스 단백질이 유발되었는데 이 단백질은 열충격이나 저온 충격시에도 마찬가지로 생성되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권1호
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• pp.51-57
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• 1985

Bacillus thuringiensis subspecies중 HD-1, HD-9, HD-73과 finitimus의 내독소와 플라스미드분리에 대하여 얻은 실험결과는 다음과 같다. 1. 밀도구배에 의한 ${\delta}$-내독소 정제는 NaBr, CsCl, Renografin-76으로 행하여 밀도구배 재료간 독소 수율은 Renografin-76>CsCl>NaBr순으로 독소와 아포의 분리가 양호하였고 그 순도는 약 98%정도였다. 2. 정제한 내독소는 SDS-PAGE, 현미경 관찰, 생물검정으로 조사하였고, SDS-PAGE에 의한 하위단위체의 분자량은 약 66,000과 130,000달돈 이었다. 3. 내독소의 결정단백질의 외부형태는 finitimus를 제외한 3균주는 모두 이중피라마드형이었다. 4. 담배나방 유충에 대한 살충실험 결과 $0.1{\mu}g/ml$의 내독소 농도에서 HD-1은 60%, HD-73은 100% 치사율을 보였다. 5. B. thuringiensis의 플라스미드 크기는 약 0.5~120Kb 정도였고 그 수는 HD-1, HD-9, HD-73에서 각각 12, 3, 11개 였고, finitimus 균주에는 플라스미드가 없었다.