• KSBB Journal
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• 제15권1호
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• pp.9-13
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• 2000

Cellulose 분해에 관련된 $\beta$-Glucosidase 효소 활성의 특성 파악을 위하여 송이균사(Tricholoma matsutake DGUM 26001)의 액체 배양시 세포외로 분비되는 $\beta$-Glucosidase 효소를 부분정제하여 그 특성을 조사하였다. 효소 활성에 미치는 적정 온도는 55-$70^{\circ}C$이었고 최적 온도는 $65^{\circ}C$이었다. 적정 효소활성에 영향을 주는 적정 pH는 3.0-5.0 범위였으며 최적 pH는 4.0이었다. Salicin을 기질로 최적 조건하에서 $\beta$-Glucosidase 효소의 비활성도는 18.7 unit/mg protein이었다. 열안정성은 $60^{\circ}C$이하의 온도에 60분간 열처리시 약 90%이상의 효소활성을 유지하였다. $Fe^{++}$이온은 효소활성을 촉진하였으나, $Hg^{++}$ 및 $Cu^{++}$이온은 효소활성을 매우 억제하였다. Salicin에 대한 효소활성을 100으로 하였을 때, cellobiose는 48.6%의 상대적 효소활성을 나타내었으며, cellobiose에 대한 Km값 및 Vmax값은 각각 0.12mM과 0.02umol/min었다.

• 한국식품과학회지
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• 제37권3호
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• pp.504-507
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• 2005

Trichoderma reesei KCTC 6952는 고분자 섬유소인 cellulose를 분해하는데 관여하는 3종류의 효소로 구성된 cellulase system을 보유하고 있다. 그 중 ${\beta}$-glucosidase는 glucose를 함유한 glycoside 유도체들로부터 glucose를 효율적으로 유리할 수 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 변형된 Mandels의 배지를 사용하여 T. reesei KCTC 6952를 배양하면서 배지로 분비된 ${\beta}$-glucosidase를 조효소액으로 회수하여 조효소액내의 ${\beta}$-glucosidase 활성을 측정하고, 또한 효소활성이 온도와 pH에 대하여 어느 정도 안정한 지를 조사하였다. 그 결과 배양 4일째에 ${\beta}$-glucosidase의 효소활성이 최고(1.33 unit/mL)에 도달하였으며, 조효소액내의 ${\beta}$-glucosidase의 최적 반응 조건은 pH 5과 $70^{\circ}C$에서 10분간 반응하는 것이었으며, 그리고 효소의 안정성을 실험한 결과에 의하면 pH 4-5의 범위에서, $50^{\circ}C$ 이하에서는 안정적이었다. 그러므로 결론적으로 본 연구를 위하여 선택된 ${\beta}$-glucosidase 조효소액은 비교적 높은 온도와 넓은 pH범위에서 촉매반응을 일으킬 수 있었다.

• 한국균학회지
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• 제27권2호통권89호
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• pp.94-99
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• 1999

섬유소자원을 이용하기 위하여 S. rugosoannulata를 합성배지에서 배양하여 cellulase 생산 최적 배양조건을 검토한 결과는 다음과 같다. S. rugosoannulata에 의한 cellulase 생산은 세 효소 모두 $40^{\circ}C$가 최적온도이었고, Avicelase와 ${\beta}-glucosidase$는 pH 5.0, CMCase는 pH 4.0이 최적조건 이었다. 탄소원은 CMCase와 ${\beta}-glucosidase$는 xylose를 Avicelase는 maltose를 탄소원으로 했을 때 최고의 생산을 나타냈으며, xylose의 최적농도는 CMCase는 1.0%, Avicelase는 0.8%, ${\beta}-glucosidase$는 1.1%이었다. 질소원은 무기질소원으로 $NH_4Cl$ 첨가시 최고의 생산성을 나타냈으며, 최적농도는 CMCase는 0.3을 Avicelase와 ${\beta}-glucosidase$는 0.4%이었으며, 유기질소원으로는 malt extarct 첨가시 높은 생산성을 나타냈으며, 최적농도는 CMCase와 Avicelase는 1.0%, ${\beta}-glucosidase$는 1.3%이었다. 무기염류로는 $CoCl_2$ 첨가시 최고의 생산성을 나타냈으며, 최적농도는 세 효소 모두 0.35%이었다.

• KSBB Journal
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• 제14권4호
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• pp.429-433
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• 1999

$\beta$-Glucosidaes from Cellvibrio gilvus(CG) was successfully overproduced in soluble form in E. coli with the coexpression of GroEL/ES/. Without the GroEL/ES protein, the $\beta$-glucosidase overexpressed in E. coli constituted a huge amount(80%) of total cellular protein, but was localized in the insoluble fraction, and little activity was detected in the soluble fraction. Coexpression of the E. coli GroEL/ES had a drastic impact on the proper folding of the $\beta$-glucosidase; 20% of the overexpressed enzyme was recovered in the soluble fraction in active form. Similar effects of GroEL/ES were also observed on the overexpressed $\beta$-glucosidase from Agrobacterium tumefaciens(AT). And pET28(a)-RGRAR, partially deleted mutant lacking 5-amino acid residues at carboxy teminus also could be folded into an active form when expressed with the molecular chaperonin GroEL/ES, and its activity was higher than that of the without GroEL/ES system, In addition, the synergistic effect of GroEL/ES and the low induction temperature were important factors for solubilization of the inclusion body from overproduced $\beta$-glucosidases.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권2호
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• pp.113-118
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• 1993

Fro the purpose of producing glouse from cellobiose or oligo saccharide and obtaining genetic information of beta-1,4-glucosidase gene, alpha beta-1,4-glucosidase gene of Pseudomonas sp. LBC505, potent cellulase complex and xylanase producing strain, was cloned in Esherichia coli and Bacillus subtilis into pUC19 and pBD64, respectively. Recombinant plasmid pGL1 contained 1.2kb EcoRI fragment was isolated from transformants forming blue color around colony on LB agar plate containing 20 ng/ml of 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucopyranoside(X-glu) and ampicillin.

• KSBB Journal
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• 제17권4호
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• pp.381-387
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• 2002

본 연구의 목적은 기존의 단일 균주보다 두 종의 서로 다른 균주를 복합시켰을 때 두 균주간의 상호 보완적인 면을 이용하여 효소생산을 극대화하기 위함이며, 다음과 같은 결론을 얻었다. 실험에서 사용된 T viride와 FB01는 최적 PH와 온도가 비슷하여 혼합배양이 가능하였으며, 이들의 복합균주를 개발하는데 성공하였다. 즉 두 균주는 회분배양 하였을 때, 서로의성장속도에 차이가 있었기 때문에 두 균주의 생장균형을 유지하기 위해 접종시기를 조절할 필요가 있었다. 접종시기를 변화시킴으로서 두 균주간의 상호작용으로 인해 단일 균주일때보다 CMCase, $\beta$-glucosidase 및 avicelase의 활성이 우수했으며 또한 계대배양을 통한 두 균주의 활성유지에 관한 실험에서는 pH 조절을 통해 $\beta$-glucosidase 활성이 최고 3.2배까지증가함을 알 수 있었다. 따라서 배양액내에서 초기 pH의 영향은 생산된 cellulase complex의 다양한 구성요소의 상대적인 농도를 결정하는 실질적인 요인으로 판명된다. pH 4.5에서의 enzyme activity는 12.5 U/mL CMCase, 2.46 U/mL If-glucosidase, 0.93 U/mL avicelase였으며 개발당시의 복합균주활성인, 2.04 U/ml CMCase, 0.78U/ml $\beta$-glucosidase, 0.2 U/mL avicelase과 비교할 때 각각 6, 3.2, 4.7배의 높은 활성을 보였다. 복합균주의 탄소원으로 볏짚을 이용했을 때 복합균주에 의한 효소생산이 단일 균주인 T. virile나 FB01보다 훨씬 높게 나타났으며, 이때의 볏짚의 최적 농도는 5%(w/v)였다. 이러한 배양조건에서 복합균주를 장기적으로 계대배양하면서 효소의 생산성 향상과 복합균주의 안정성을 관찰할 필요가 있다고 사료된다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제23권1호
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• pp.50-54
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• 1999

In this paper, the saponin enzymatic hydrolysis of ginsenoside Rg3 was studied. The $ginsenoside-{\beta}-glucosidase$ from FFCDL-48 strain mainly hydrolyzed the ginsenoside Rg3 to Rh2, the enzyme from FFCDL-00 strain hydrolyzed Rg3 to the mixture of Rh2 and protopanaxadiol (aglycon). The $ginsenoside-{\beta}-glucosidase$ from FFCDL-48 strain was purified with a column of DEAE-Cellulose to one spot in the SDS polyacrylamide gel electrophoresis. During the purification, the enzyme specific acitvity was increased about 10 times. The purified $ginsenoside-{\beta}-glucosidase$ can hydrolyze the Rg3 to Rh2, but do not hydrolyze the $p-nitrophenyl-{\beta}-glucoside$ which is a substrate of original exocellulase such as ${\beta}-glucosidase$ of cellulose. The molecular weight of $ginsenoside-{\beta}-glucosidase$ was 34,000, the optimal temperature of enzyme reaction was $50^{\circ}C,$ and the optimal pH was 5.0.

• 미생물학회지
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• 제51권1호
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• pp.68-74
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• 2015

Thermococcus pacificus P-4의 유전체 서열 분석을 통하여 예측되는 GH1 ${\beta}$-glucosidase를 암호화하는 유전자를 동정하였다. 그 유전자는 487 아미노산들을 암호화하는 1,464 bp 나타내었으며, 그 아미노산 서열은 Pyrococcus furiosus ${\beta}$-glucosidase와 77% 상동성을 나타내었다. 그 유전자는 Escherichia coli 시스템 내에서 복제 및 발현하였다. 재조합 된 단백질은 금속 친화크로마토그래피를 통하여 정제하고 특성을 분석하였다. 정제된 단백질(Tpa-Glu)은 pH 7.5와 $75^{\circ}C$에서 최적활성을 나타내었으며, 열안정성은 $90^{\circ}C$에서 약 6시간의 반감기를 보였다. Tpa-Glu는 pNP-${\beta}$-glucopyranoside, pNP-${\beta}$-galactopyranoside, pNP-${\beta}$-mannopyranoside, 그리고 pNP-${\beta}$-xylopyranoside 순으로 우수한 $k_{cat}/K_m$ 값을 나타내었다. 또한, Tpa-Glu는 ${\beta}$-1,3-linked polysaccharide (laminarin) 그리고 ${\beta}$-1,3-와 ${\beta}$-1,4-linked oligosaccharides에 대하여 exo-hydrolyzing 활성을 보였다. 본 연구는 초고온 고세균으로터 ${\beta}$-glucosidase가 exohydrolyzing 활성을 처음 확인한 것으로 이 효소는 laminarin의 당화공정에 ${\beta}$-1,3-endoglucanase와 함께 적용할 수 있을 것으로 기대된다.

• 한국균학회지
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• 제12권2호
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• pp.59-64
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• 1984

볏짚배지(培地)에서 Pleurotus sajor-caju의 배양조건(培養條件)을 달리하여 섬유소분해효소(纖維素分解酵素) 생산(生産)에 미치는 영향(影響)을 검토(檢討)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1) 효소생산(酵素生産)의 최적(最適) 수분함양(水分含量), pH 및 온도(溫度)는 $C_1-cellulase$가 60%, 7.0, $35^{\circ}C$ 이었고 $C_x-cellulase$는 60%, 5.0, $25^{\circ}C$이었으며 ${\beta}-glucosidase$는 60%, 7.0, $20^{\circ}C$이었다. 2) 균사배양기간(菌絲培養期間) 중에 광(光)을 조사(照射)하므로서 $C_1-cellulase$와 ${\beta}-glucosidase$생산(生産)은 감소(減少)하였으나 $C_x-cellulase$는 $500{\sim}1,000\;lux$에서 오히려 증가(增加)되었다. 3) 배양기간(培養期間) 중에 $C_1-cellulase$가 감소(減少)하면 $C_x-cellulase$와 ${\beta}-glucosidase$가 증가(增加)하는 상반관계(相反關係)를 나타내었다. 4) 부원료(副原料) 중에서 $C_1-cellulase$는 미강(米糠), $C_x-cellulase$는 면실박(綿實粕)과 미강(米糠), ${\beta}-glucosidase$는 대두박(大豆粕)과 어분(魚粉)을 첨가(添加)했을 때 가장 양호(良好)했으며 $C_1-cellulase$와 ${\beta}-glucosidase$는 미강(米糠) 20%, $C_x-cellulase$ 10%는 첨가(添加)했을 때 양호(良好)하였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2002년도 생물공학의 동향 (X)
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• pp.441-444
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• 2002

본 연구의 목적은 기존의 단일 균주보다 두 종의 서로 다른 균주를 복합시켰을 때 두 균 주간의 상호 보완적인 면을 이용하여 효소생산을 극대화하기 위함이며, 다음과 같은 결론을 얻었다. 실험에서 사용된 T. viride와 FB01는 최적 pH와 온도가 비슷하여 혼합배양이 가능 하였으며, 이들의 복합균주를 개발하는데 성공하였다. 두 균주간의 상호작용으로 인해 단일 균주일 때보다 CMCase, ${\beta}-glucosidase$ 및 avicelase의 활성이 우수했으며 또한 계대배양 및 pH 조절을 통해 ${\beta}-glucosidase$이 활성이 최고 3.2배까지 증가함을 알 수 있었다. 탄소원으로 섬유소 폐기물중 특히 볏짚을 이용했을 때 복합균주에 의한 효소생산이 효과적이었으므로 앞으로 이 조건에서 복합균주를 장기적으로 계대배양하면서 효소의 생산성 향상과 복합균주의 안정성을 관찰할 필요가 있다고 사료된다.