Protein Hydrolysis with Formic Acid and Analysis of Amino Acid Using Butylthiocarbamyl - trimethylsilyl (BTC - TMS) Derivatives by Gas Chromatography

The protein hydrolysis with 6 M formic acid containing 0.3% tryptamine was a superior method for amino acid analysis of standard amino acid and protein than 6 M HCI containing 0.3% tryptamine. The recoveries of standard amino acid after acid hydrolysis were more accurate in the 6 M formic acid hydrolysis than 6 M HCI hydrolysis, especially recovery of tryptophan showed higher values of 1.5 times than that of 6 M HCI hydrolysis. The results of analysis on the standard protein, bovine serum albumin, showed very similar values compared to the sequence analysis reported in the literature for the 6 M formic acid hydrolysis than 6 M HCI hydrolysis, especially in the tryptophan recovery as standard amino acid recovery. Butylthiocarbamyl - trimethylsilyl (BTC - TMS) derivatives of 22 standard amino acids were successfully resolved DB-17 capillary column. Excellent reproducibility of standard amino acid recovery and composition of bovine serum albumin were obtained with BTC-TMS derivatives.

단백질 구성 아미노산 분석을 위한 효과적인 가수분해 방법을 찾기 위하여 0.3% tryptamine을 함유한 6M formic acid와 6M HCI을 표준 아미노산과 단백질 표준품인 bovine serumn albumin 가수분해에 적용하여 표준아미노산의 회수율과 bovine serum albumin의 아미노산 조성을 분석하였고 GC에 의한 효과적인 아미노산 분석을 위하여 새로운 유도체인 butylthiocarbamyl-trimethylsilyl(BTC-TMS)유도체를 개발하여 분석한 결과는 다음과 같았다 표준아미노산의 회수율은 6M formic acid에 의한 가수분해방법이 6M HCI에 의한 가수분해 방법보다 상당히 정확하였고 특히 산 가수분해에서 tryptamine의 존재하에서도 잘 파괴되는 tryptophan의 경우 formic acid가수분해가 HCI가수분해보다 1.5배정도 높은 회수율을 보였다. Bovine serum albumin의 아미노산 조성을 583 아미노산 잔기로 환산하여 나타내었을 경우도 formic acid에 의한 가수분해가 HCI가수분해 경우보다 훨씬 정확하였고 이 때 tryptophan의 회수율도 훨씬 높게 나타났다. 다만 서열분석에서 분석되지 않는 cystine이 formic acid 가수분해시 분석되고 있어 이에 대한 정확한 검정이 필요하였다. BTC-TMS 유도체는 GC분석시 극성이 다소 낮은 DB-l7 column으로 분리가 잘되었고 재현성도 좋았으나 GC분석을 위한 대부분의 유도체에서와 마찬가지로 몇 가지 아미노산에서 두 개의 peak로 나타나는 결점이 있었다.