Comparative Inactivation of Hepatitis A Virus and Murine Encephalomyocarditis Virus to Various Inactivation Processes

Murine encephalomyocarditis virus (EMCV) has been used as a surrogate for hepatitis A virus (HAV) for the validation of virus removal and/or inactivation during the manufacturing process of biopharmaceuticals. Recently international regulation for the validation of HAV safety has been reinforced because of the reported cases of HAV transmission to hemophiliac patients who had received ntihemophilic factors prepared from human plasma. The purpose of the present study was to compare the resistance of HAV and EMCV to various viral inactivation processes and then to standardize the HAV validation method. HAV was more resistant than EMCV to pasteurization (60oC heat treatment for 10 hr), low pH incubation (pH 3.9 at 25oC for 14 days), 0.1 M NaOH treatment, and lyophilization. EMCV was completely inactivated to undetectable levels within 2 hr of pasteurization, however, HAV was completely inactivated to undetectable levels after 5 hr treatment. EMCV was completely inactivated to undetectable levels within 15 min of 0.1 M NaOH treatment, however, residual infectivity of HAV still remained even after 120 min of treatment. The log reduction factors achieved during low pH incubation were 1.63 for HAV and 3.84 for EMCV. Also the log reduction factors achieved during a lyophilization process of antihemophilic factor VIII were 1.21 for HAV and 4.57 for EMCV. These results indicate that HAV rather than EMCV should be used for the virus validation study and the validation results obtained using EMCV should be precisely reviewed.

바이러스 불활화 공정에 대한 Hepatitis A Virus와 Murine Encephalomyocarditis Virus의 민감도 비교

Murine encephalomyocarditis virus (EMCV)는 혈장유래의약품의 바이러스 안전성 검증을 위해 hepatitis A virus (HAV)의 모델 바이러스로 사용되어왔다. 근래에 혈액응고인자제제에 의한 HAV 감염사례가 보고되면서 혈장유래의약품의 HAV 안전성 검증에 대한 국제적인 규제가 강화되어가고 있다. 본 연구에서는 HAV와 EMCV의 바이러스 불활화 공정에 대한 민감도를 평가하여, 혈장유래의약품 제조공정에서 HAV 불활화 공정의 검증법을 표준화하고자 하였다. HAV와 EMCV의 바이러스 불활화 공정에 대한 민감도를 평가한 결과 HAV가 60$^{\circ}C$ 열처리, low pH 처리(pH 3.9), 0.1 M NaOH 처리, 동결건조 공정 모두에서 EMCV보다 더 저항성이 큰 것을 확인할 수 있었다. EMCV는 특히 열처리와 0.1 NaOH 처리에 민감하게 불활화 되었지만, HAV는 큰 저항성을 나타내었다. 열처리의 경우 2시간 안에 EMCV는 검출한계 이하로 감소하였지만, HAV는 5시간 후에 검출한계 이하로 감소하였다. 0.1 M NaOH 처리시 EMCV는 15분 안에 검출한계 이하로 감소하였지만, HAV는 120분 정도의 처리에도 감염성 바이러스가 검출되었다. pH 3.9에서 25$^{\circ}C$로 14일 동안 항온하였을 때 HAV와 EMCV의 log 감소인수는 각각 1.63, 3.84이었다. 또한 혈액응고 8인자 제조공정의 동결건조 과정에서 HAV와 EMCV의 log 감소인수는 각각 1.21, 4.57이었다. 이와 같은 결과는 혈장유래의약품 제조공정의 HAV 불활화 또는 제거 검증시 모델 바이러스로 사용된 EMCV의 검증 결과를 해석함에 있어 보다 신중함을 가져야 한다는 것을 보여준다. 또한 보다 정확한 HAV검증 결과를 얻고자 한다면 모델 바이러스인 EMCV 보다 HAV를 사용하는 것이 보다 더 타당하다고 사료된다.