Effects of Recombinant Human Epidermal Growth Factor on the Proliferationand Radiation Survival of Human Fibroblast Cell Lines in Vitro

[ $\underline{Purpose}$ ]: To explore the effect of recombinant human EGF on the proliferation and survival of human fibroblast cell lines following irradiation. $\underline{Materials\;and\;Methods}$: Fibroblast was originated human skin and primary cultured. The trypan blue stain assay and MTT assay were used to study the proliferative effects of EGF on human fibroblast cell lines in vitro. An incubation of fibroblasts with rhEGF for 24 hours immediately after irradiation was counted everyday. Cell cycle distributions were analyzed by FACS analysis. $\underline{Results}$: Number of fibroblast was significantly more increased rhEGF (1.0 nM, 10 nM, 100 nM, 1,000 nM) treated cell than control after 8 Gy irradiation. Most effective dose of rhEGF was at 160 nM. These survival differences were maintained at 1 week later. Proportion of S phase was significantly increased on rhEGF treated cells. $\underline{Conclusion}$: rhEGF cause increased fibroblast proliferation following irradiation. We expect that rhEGF was effective for radiation induced wound healing.

재조합 표피성장인자가 방사선이 조사된 섬유아세포 증식에 미치는 영향

목 적: 재조합 표피성장인자는(rhEGF) 다양한 표피와 상피 세포의 증식을 자극하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 방사선이 조사된 섬유아세포의 증식에 rhEGF의 효과를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 인간에서 기원한 섬유아세포를 초대배양(primary culture)한 세포를 이용하였다. 대웅제약에서 유전자 재조합하여 대장균에서 발현하여 생산한 rhEGF를 제공 받아 사용하였다. 방사선 조사는 4 MV 선형가속기(CLINAC 600C, Varian, Palo Alto, CA, USA)를 이용하여 분당 2 Gy 내외의 선량률로 균일하게 조사하였다. 조사된 방사선량은 8 Gy이었다. 생존세포수는 trypan blue 염색법을 이용하였고, rhEGF에 의한 세포주기의 변화를 관찰하기 위하여 유세포 분석법을 시행하였다. 결 과: 4 Gy의 방사선을 조사한 후 7일째까지 생존 세포수를 trypan blue 염색법을 이용하여 측정한 결과 모든 rhEGF 농도(1.0 nM, 10 nM, 100 nM, 1,000 nM )에서 방사선 조사 단독군보다 생존세포 수가 많았다. 방사선을 조사하지 않은 섬유아세포에서 rhEGF를 10 nM처리한 후 FACS scan을 시행한 결과 세포주기 중에서 S기 비율이 증가하였다. 결 론: 방사선이 조사된 섬유아세포에서 rhEGF를 투여하면 rhEGF를 투여하지 않은 섬유아세포에 비해서 세포증식이 가속됨을 확인할 수 있었다.