Analysis of coenzyme Q10 in human plasma by high performance liquid chromatography

Coenzyme $Q_{10}$($CoQ_{10}$), a vitamin E-like substance, represents a components of the complex antioxidant system of the human organism. $CoQ_{10}$ levels in human plasma were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) with UV detection. It was dissociated from lipoproteins by methanol and extracted into n-hexane with liquid-liquid extraction procedure, after centrifugation, the supernatant was dried under nitrogen gas stream. The residue was dissolved in the absolute ethanol. Determination of $CoQ_{10}$ was performed on a $C_{18}$ reversed-phase analytical column with ultraviolet detection at 275 nm and the mobile phase containing 15% (v/v) ethanol in methanol at a flow rate of 1.7 mL/min. The low limit of quantitation was 0.02 mg/L (S/N=10), the linearity between the concentration and peak height is from 0.1 to 2.0 mg/L. Twenty-four randomly selected plasma samples from apparently healthy, 27 to 44 year old individuals (males and females) were analyzed for total $CoQ_{10}$. The average level in these subjects was $0.62{\pm}0.13mg/L$ with the range of 0.41-0.98 mg/L. This method has a specific and a sufficient limit of quantitation (LOQ) for analysis of $CoQ_{10}$ in human plasma in both a clinical study and research at laboratories.

고성능액체크로마토그라피를 이용한 혈장 내 코엔자임 큐텐 분석

코엔자임 큐텐은 비타민과 유사한 물질로 체내 중 미토콘드리아에 주로 분포 되어 있으며 항산화 작용을 나타낸다고 알려져 있다. 본 연구는 27-44세의 건강한 성인 남 녀 24명을 대상으로 하였고 혈장내 코엔자임 큐텐의 농도를 정량 평가하기 위하여 UV 검출기가 장착된 고성능액체 크로마토그라피를 사용 하였다. 혈장 내 코엔자임 큐텐을 분리하기 위해서 메탄올로 지방단백질을 제거하였고 노말헥산을 이용하여 액체-액체 추출법으로 코엔자임 큐텐을 용해 시켰다. 그 후 원심분리를 실시하여 노말헥산과 제단백된 물질을 층분리 시키고 상층액을 다른 유리 시험관에 옮겨 담았다. 옮겨진 노말헥산 층은 질소 가스를 이용하여 증발 농축을 시켰으며 남은 잔사에 순수한 에탄올로 재용해 시켜 검사 장비 내로 주입 하였다. 이 때 사용된 컬럼은 C18 역상 컬럼이었고 275 nm의 파장이 이용되었으며 메탄올과 에탄올을 85:15로 섞은 이동상을 1.7 mL/min의 유속으로 흘렸다. 본 검사 방법의 정량한계(limit of quantitation : LOQ, N/S=10)는 0.02 mg/L로 평가 되었고 0.1-2.0 mg/L의 농도 범위에서 검량선을 작성 하였다. 대상군 24명의 혈장 중 코엔자임 큐텐의 농도는 0.41-0.98 mg/L의 범위에서 분포 하고 있었으며 평균 농도는 $0.62{\pm}0.13mg/L$ 였다. 본 연구의 결과 본 검사 방법은 특수성을 가지고 있었으며 혈장 내 $CoQ_{10}$을 분석하는데 충분한 정량한계를 가지고 있었기에 임상에 적용이 가능하고 연구 기관에서 사용하기에 적합하다고 사료 된다.