Cryopreservation of Chrysanthemum morifolium cv. 'White ND' Shoot Tips using Encapsulation-Dehydration-Vitrification Method

캡슐화-탈수화-유리화에 의한 국화 품종 '화이트 엔디' 신초의 초저온 동결보존

This study investigated the effects of cryopreserving Chrysanthemum morifolium cv. 'White ND' shoot tips for eliminating viroids. As a result, smaller shoot tips (2-3 LP, 1mm) showed a better survival and regrowth than larger shoot tips (4-5 LP, 1.5mm). The most effective vitrification solution for survival and regrowth was PVS3, which induced a high survival rate after 60 minutes of incubation. For a high efficiency, the best pre-treatment condition for vitrification was incubation in 88 mM sucrose for 24 h, 0.3M sucrose for 16 h, 0.5 M sucrose for 6 h, and 0.7 M sucrose for 3 h, in a descending order. The ploidy levels were the same in the mother plants and following cryopreservation, which confirmed the absence of any gene mutation.

본 실험은 국화의 바이로이드 제거에 이용되는 초저온처리 시 국화 품종 'White ND'을 적합한 처리조건을 확립하기 위해 초저온처리의 단계별 요인을 실험하였다. 그 결과 생장점의 크기는 1 mm(엽원기 2~3매 포함)에서 높은 생존율과 신초 재생율을 나타내었고, vitirification 처리시 PVS3가 효과적이었으며, 처리 시간은 60분 처리 하였을 때 높은 생존율 및 정 상 신초 재생율을 보였다. 또한 vitrification을 위한 전처리 조건은 sucrose 농도를 88 mM 24시간, sucrose 0.3 M 16시간, sucrose 0.5 M 6시간, sucrose 0.7 M 3시간으로 처리하는 것이 초저온 처리 후 생존율 및 신초 재생율을 높이는데 효과적이었으며, 재생된 정상 식물체는 모본과 비교하여 ploidy level이 동일한 것으로 보아 식물체의 유전적 변이가 일어나지 않았다.