돼지 난포란의 단위발생에서 Cytochalasin B의 영향

Effects of Cytochalasin B on Parthenogenetic Development of Porcine Follicular Oocytes

도축된 돼지의 난소에서 난포란을 채취하여 체외 성숙시킨 후 인위적으로 활성화시켜 이배체 배발달을 유기하기 위해 cytochalasin B를 2.5, 5.0, $7.5\;{\mu}g/mL$ 농도로 3, 5, 7 시간 처리한 후 NCSU23 배양액으로 7일간 배양하여 배발달율에 미치는 영향을 검사하였다. 체외 성숙된 돼지 난모세포를 활성화 처리하여 2일째 분할율을 관찰한 결과 각 처리의 분할율은 $39.0{\sim}48.9%$로 나타났으며, 처리별로 유의차가 없었다. 7일간 배양하여 상실배기 이상으로 발달한 난자들의 처리별 발달율 차이를 관찰한 결과는 cytochalasin B를 $5.0\;{\mu}g/mL$ 농도로 3시간 처리구(19.7%)에서 $2.5\;{\mu}g/mL$ 농도로 3, 5시간 처리한 구(9.4%)의 배발달율에 비해 유의적으로 높은 결과를 얻었다. 시간별과 농도별로 분석한 결과 $2.5\;{\mu}g/mL$ 처리구가 5.0, $7.5\;{\mu}g/mL$ 처리구들보다 유의적으로 낮은 배발달율을 보였다. 배반포기까지 발달한 난자들의 처리별 발달율 차이를 관찰한 결과는 cytochalasin B를 $5.0\;{\mu}g/mL$ 농도로 3시간과 5시간 처리구들의 배반포기 발달율은 9.4%와 9.0%로 $2.5\;{\mu}g/mL$ 농도로 3시간 처리구의 배발달율인 0%보다 유의적으로 높은 배발달율을 보였다. 시간별과 농도별로 분석한 결과 농도에 따라 $5.0\;{\mu}g/mL$ 처리구가 2.5와 $7.5\;{\mu}g/mL$ 처리구들보다 유의적으로 높은 배반포기 배발달율을 보였으며, 3, 5, 7시간 처리에 따른 유의적인 차이는 없었다. 이상의 결과로 돼지 난모세포를 65시간 체외 성숙 후 활성화 처리할 때 cytochalasin B $5.0\;{\mu}g/mL$로 $3{\sim}5$ 시간 처리하는 것이 가장 높은 배반포 발달율을 얻을 수 있었으며, 처리 농도가 배발달에 유의적인 영향을 미치는 것을 확인하였다.

The effects of cytochalasin B was studied for the cleavage and development of in vitro matured porcine follicular oocytes. The follicular oocytes were collected from slaughtered pig ovaries and matured for 65 hours. The matured oocytes were activated by 7% ethanol(v/v) in DPBS and the activated oocytes were subjected to cytochalasin B concentrations of 2.5, 5.0 and $7.5\;{\mu}g/mL$ for 3, 5 and 7 hours, and then the treated oocytes were cultured in NCSU23 with 0.4% BSA for 7 days. The cleavage rates were not different significantly in each treatment. However, the oocytes treated with $5.0\;{\mu}g/mL$ for 5 hours yielded a significantly higher morula rate(19.7%) than oocytes treated with $2.5\;{\mu}g/mL$ for 3 and 5 hours(9.4%). The sum rate of $2.5\;{\mu}g/mL$ concentration(10.5%) by hour was also significantly lower than those of 5.0(18.0%) and $7.5\;{\mu}g/mL$ concentration(14.6%). The blastocyst rate in oocytes treated with $5.0\;{\mu}g/mL$ for 3(9.4%) and 5 hours(9.0%) was significantly higher than the rate in oocytes treated with $2.5\;{\mu}g/mL$ for 3 hours(0%). The sum rate of $5.0\;{\mu}g/mL$ concentration also significantly higher than those of 2.5 and $7.5\;{\mu}g/mL$ concentration. The results demonstrated that the treatment of oocytes with cytochalasin B of $5.0\;{\mu}g/mL$ for $3{\sim}5$ hours was the optimal concentration and duration for parthenogenetic activation and blastocyst formation of in vitro matured porcine oocytes.