HPLC/ESI-MS에 의한 글리시리진 표준품의 불순물 추정

Estimation of Impurities from Commercially Available Glycyrrhizin Standards by the HPLC/ESI-MS

Glycyrrhizin은 감초(Glycyrrhizae Radix)의 주성분으로써 항궤양, 항염증, 항알러지, 진해작용을 하는 것으로 알려져 있으며 glycyrrhetinic acid에 2당류가 연결된 매우 hydrophilic하고 분자량이 큰(mw=822.92) 물질이다. 본 연구에서는 on-line high performance liquid chromatography (HPLC)/electrospray ionization (ESI)- mass spectrometery (MS)를 이용하여 각종 glycyrrhizin 표준품들의 불순물들에 대한 구조 규명을 하였다. 사용한 HPLC column은 $C_{18}$($3.9{\times}300mm$, $10{\mu}m$)이었으며 이동상은 acetic acid/$H_2O$(1:15):acetonitrile=3:2를 0.8ml/min으로 흘려주었고 용출물을 post-column splitter를 사용하여 50:1로 split시켜서 ESI-MS에 주입하였다. ESI-MS는 negative mode이었으며 CapEx voltage는 100 V에서 각 불순물들의 분자량이 측정되었고 구조규명을 위하여 CapEx voltage를 80-300 V까지 변화시켜주는 CID (collision induced dissoclation) 기법을 사용함으로써 fragment를 얻을 수 있었고 이를 바탕으로 구조규명을 하였다. 주요 불순물의 구조는 glycyrrhetic acid moiety에 수산화기(-OH)가 붙은 형태와 glycyrrhetic acid moiety의 12번 위치에서 환원이 일어난 형태 이었다. 표준품의 순도는 약 90% 정도이었다.

The impurity profiles from the raw materials of glycyrrhizin were performed by the high performance liquid chromatography (HPLC)/electrospray ionization (ESI)- mass spectrometry (MS). For the HPLC experiment, a $C_{18}$($3.9{\times}300mm$, $10{\mu}m$) column was used and the mobile phase was acetic acid/$H_2O$ (1:10):acetonitrile=3:2 with a flow rate of 0.8 ml/min. The effluent was splitted into the ratio of 50:1 and went into the ESI-MS. Three to six impurities were found and informed of the identification of the structure of the impurities by ESI-MS. And the structures of impurities were suggested to a hydroxy-glycyrrhizin which is added with hydroxy group (-OH) in the glycyrrhetic acid moiety and a reduced-glycyrrhizin which the position of 12 of the glycyrrhetic acid moiety is reduced. The purities of the standard materials were about 90%.