Quantification of Bowman-Birk Protease Inhibitors in Soybeans and Soybean Products by Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

경합 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay에 의한 대두 및 대두가공제품 중의 Bowman-Birk Protease Inhibitors의 함량 분석

BBPI contents in domestic soybean and soybean products were investigated by the measurement of chymotrypsin inhibiting activity(C.I.A) and competitive ELISA method. In order to produce polyclonal antibody, BBPI was purified from soybean trypsin-chymotrypsin inhibitor by ion exchange chromatography and electrophoretic gel slicing. Rabbit anti-BBPI polyclonal antibody was produced with the purified BBPI as immunogen. This antibody showed relatively specific binding to BBPI and then used for the establishment of competitive ELISA method to measure BBPI contents in extracts of soybean and soybean products. The standard curve for the measurement of BBPI in soybean extracts was drawn up within the range 0.03 to $30\;{\mu}g/ml$ of BBPI. The C.I.A. and BBPI contents of 12 soybean cultivars were $8,462{\sim}12,428\;U/g$ and $482{\sim}692\;mg%$, respectively. The C.I.A. and BBPI contents were not detected in most of soybean products except soybean sprouts, which contained $10,695{\sim}13,249\;U/g$ of C.I.A. and $529{\sim}803\;mg%$ of BBPI.

대두가공제품 중에 존재하는 Bowman-Birk protease inhibitor(BBPI) 함량을 protease 저해활성 측정 및 경합 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)로 살펴보았다. 항체제조를 위한 BBPI는 ion exchange chromatography와 전기영동 후 gel slicing 방법으로 시판 soybean trypsin-chymotrypsin inhibitor로부터 순수, 분리하였다. 순수분리한 BBPI를 면역원으로 rabbit anti-BBPI antibody를 조제하였으며 단백질 농도별 titration방법으로 BBP에 비교적 선택적으로 결합하는 항체임을 확인하였다. 이를 이용한 경합 ELISA 방법으로 BBPI를 정량하기 위한 표준 정량곡선을 작성하였으며 시료용액중의 BBPI 함량이 $0.03{\sim}30\;{\mu}g/ml$ 범위일 경우에 정량적인 분석이 가능하였다. 대두품종별 chymotrypsin 저해활성은 $8,462{\sim}12,428\;U/g$이었으며 BBPI 함량은 $482{\sim}692\;mg%$ 이었다. 시판 대두 가공제품 중에서 5종의 콩나물은 건물량 기준으로 $10,695{\sim}13,249\;U/g$의 chymotrypsin 저해활성과 $529{\sim}803\;mg%$의 BBPI 함량을 나타내었으며 일부 두부제품에서도 68.9 mg%정도의 BBPI가 검출되었다. 그 밖의 두유, 된장, 고추장 및 간장 등의 대두발효식품, 탈지대두박 등에서는 chymotrypsin 저해활성 및 BBPI가 거의 검출되지 않았다.