Identification of Sex-Specific DNA Sequences in the Chicken

닭의 성특이적 DNA 분리

This study was performed to find out the reasonable sexing methods In the chicken, obtain the basic information for the mechanisms related to chicken sexual differentiation and identify the genes which known to involved in chicken sex differentiation. The chromosome analysis of chicken embryonic fibroblast was a simple method to determine sex of chicken by means of Z and W chromosome identification. The bands of female chicken genomic DNA digested with Xho Ⅰ and Eco RI restriction endonuclease showed to be useful in direct sex determination and these repetitive sequences of Xho Ⅰ and Eco RI families were proposed to be very homologous in their sequences by colony hybridization analysis. Seven of 150 random primers were selected to amplify the W chromosome-specific band by using arbitrary primed PCR and three of them were useful to identify the sex of chicken. To identify the sex differentiation genes in the chicken, PCR for the amplification of ZFY and SRY sequences was performed. ZFY and SRY sequences were amplified successfully in the chicken genome, implying that chicken genome might have the sex-related conserved sequences similar to mammalian ones. The PCR products of ZFY amplification were the same in both sexes, suggesting that these sequences may be located on autosome or Z chromosome. The profile of PCR amplification for SRY sequences showed variation between sexes, but this result was not enough to specify whether the SRY gene in chicken is on the autosome or sex chromosome.

닭에서 적절한 성감별 방법을 개발하고 닭의 성분화 기작의 기초자료를 얻기 위하여 배아의 섬유아세포의 염색체를 분석하고, W 염색체 특이적인 반복염기서열과 50∼60％의 유사성을 보이는 random primer로 PCR 증폭을 실시하여 성을 판별하는 방법이 이용되었으며, 닭에서 성분화에 관련된 유전자를 분리하기 위해 W 염색체 특이적인 반복염기서열을 클로닝하였고, PCR을 이용하여 ZFY와 SRY 염기서열을 증폭하였다. 닭의 배아섬유세포의 염색체 분석 결과 Z 염색체와 W 염색체를 구분함으로써 배아의 성을 직접적으로 판별하는 것이 가능하였으며 , 암닭의 DNA를 Xho Ⅰ와 Eco RI로 절단하여 생성되는 band를 이용하여 성을 판별하는 것이 가능하였다. Xho Ⅰ와 Eco RI family를 클로닝하고, colony hybridization을 통해 Xho Ⅰ과 염기서열이 유사한 80∼100개의 clone을 동정하여, 이들 두 그룹간 DNA homology는 매우 유사하였다. 150개의 random primer 중 W 염색체 특이적인 반복 염기서열과 유사성을 보이는 primer 7개를 screening하였으며, 이 중 3개의 primer는 닭에서 자성과 웅성간의 차이를 나타내었다. 닭에서 성분화에 관련된 유전자를 동정하기 위하여 포유류의 ZFY와 SRY유전자의 PCR증폭을 실시하였다. ZFY를 증폭한 결과, 자성과 웅성간의 차이를 발견할 수 없었으며, 이는 닭에서 ZFY는 상염색체 또는 Z 염색체에 존재함을 시사한다. SRY의 증폭에서는 성간의 차이가 확인되었으나, 이 유전자가 Z 염색체에 존재하는지 W 염색체에 존재하는지 혹은 상염색체 존재하는지 여부는 연구가 필요하리라 사료된다.