Improvement of Glucoamylase Productivity of Saccharomyces diastaticus by Intergration of Glucoamylase Gene, STA, into Chromosomal DHA

Glucoamylase 유전자 STA의 염색체내 삽입에 의한 Saccharomyces diastaticus의 glucoamylase 생성능 향상

For the purpose to improve the glucoamylase productivity of Saccharomyces diastaticus, we integrated STA 1 gene into chromosomal DNA of S. diastaticus using YIp vector. After construction of Ylp-STA by the subcloning of STAI (5.3 kb) into YIp5 vector, S. diastaticus GMT-II(a. ura3. STAJ) was transformed by Ylp-STA through homologous recombination at the chromosomal STAJ gene. So we obtained the tram formants that glucoamylase productivity was increased maximum six fold. These strains transformed by the multi-copy integration of Ylp-STA in chromosomal DNA were confirmed by Southern hybridization. And the integrated Ylp-STA was maintained stably during 30 mitotic divisions.

Saccharomyces distaticus 의 glucoamylase 생성능을 증진시킬 목적으로 STA1 유전자를 YIp vector 를 이용하여 염색체에 도입해 주고자 하였다. STA1 유전자 5.8-Kb 를 YIp vector 에 재조합하여 YIp-STA 를 재작하고, S. diastaticus GMT-11 (a, ura 3, STA1) 을 숙주균주로 하여 염색체의 STA1 유전자 부위에 homologous recombination 되어 삽입하도록 형질전환을 실시하였다. 이렇게 하여 glucoamylase 생성능이 모균주에 비해 최대 6배까지 증대된 다양한 형질전환체들을 얻을 수 있었다. 그리고 glycoamylase 생성능이 증대된 형질전환체들의 염색체 DNA 를 분리하여 Southern hybridization 을 실시한 결과 YIp-STA 가 multi-copy integration 되었음을 확인하였고, 또한 도입해 준 YIp-STA 는 세포분열인 30세대기간 동안 계속되었어도 안정하게 유지되었음을 알았다.