Immunohistochemical study on the antigenicity of each organ structure of Clonorchis sinensis

간흡충 충체의 부위별 항원성에 대한 면역조직화학적 연구

An immunohistochemical study was performed to demonstrate comparative antigenicity of each body structure of the liver fluke, Clonorchis sinensis, such as the digestive tract, reproductive organs, excretory system, tegument and suckers. Indirect immunoperoxidase technique was applied, rising formalin-fixed and paraffin-embedded sections of C. sinensis as the antigen. Pooled cat sera obtained 10 weeks after an experimental infection with C. sinensis and peroxidase-conjugated goat anti-cat IgG were used as the primary and secondary antibodies, respectively. The intensity of immunohistochemical stain was very sensitive upon the titers of the primary and secondary antibodies, and their optimum dilutions were found to be 1:1,000∼1:2,000 and 1:1,000, respectively. The intestinal epithelial cells, intestinal content and excretory bladder showed strong positive coloring reactions even at lower titer (1 : 2,000) of the primary antibody, whereas the uterine wall and eggs, vitelline glands, and male reproductive organs showed only weak positive reactions despite an increase in the antibody titer (1:1,000). On the other hand, the suckers, tegument, subtegumental cells and other parenchyme portions did not reveal any positive immunoperoxidase reaction at the same antibody titers. From the above results, it is highly suggested that the most potent antigenicity of C. sinensis occur from their excretory-secretory substances originated from the digestive and excretory organs.

간흡충의 충체 부위별 항원성을 알아보고자 면역조직화차적 방법을 이용하여 간흡충의 소화기관, 생식기관, 배설기관, 흡반, 표피 등의 염색강도를 비교 관찰하였다. 간흡충 실험 감염 후 2~8주 된 토끼에서 담관 내 충체를 포함하는 간 조직을 얻어 중성 포르말린 용액에 고정하고 파라핀으로 포매한 다음 4 $\mu\textrm{m}$두께로 잘라 항원으로 이용하였다. 항-간흡충 항체(1차 항체)는 실험 감염 10주 된 고양이 혈청을 희석하여 사용하였고 peroBidaseconjugated goat anti-cat IgG를 2차 항체로 하여 간접 면역효소 염색을 시행하였다. 가장 적합한 1차 항체의 희석 농도는 1 : 1,000~1 : 2,000, 2차 항체의 희석 농도는 1 : 1,000이었다. 충체의 장 상피세포, 장 내용물 및 배설낭은 1차 항체 희석 농도 1 : 1,000~1 : 2,000에서 강한 양성 반응을 보인 반면, 자궁 및 일부 자궁 내 충란, 난관선, 웅성 생식기관 등은 1차 항체 회석 농도 1 : 1,000에서 미약한 양성 반응을 나타내었다. 한편, 흡반, 표피, 표피하 세포, 충체 실질 등은 1차 항체 회석 농도 1 : 1,000에서도 음성 반응을 나타내었다. 이상의 결과를 종합하면, 간흡충 감염시 숙주의 항체 반응은 충체의 소화-분비 기관에서 유래된 이른바 분비-배설 항원에 의해 가자 강력하게 유발되는 것으로 추측된다.